针对生物药物组合物的生物学活性评价方法技术

本发明专利技术涉及一种针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，包括步骤：首先基于ELISA夹心法原理建立针对生物药物组合物各个蛋白组分的定量方法；确认生物药物组合物各个蛋白组分的共同的生物学作用机理并基于该作用机理建立生物学活性评价方法；利用所建立生物学活性评价方法检测不同比例混合的生物药物组合物的生物学活性，以某单一组分蛋白浓度为基准，记录不同混合比例条件下的生物药物组合物的生物学活性检测结果以及4‑参数拟合曲线的EC50值。本发明专利技术方法可以根据生物学活性检测结果或4‑参数拟合曲线的EC50值的变化而判断生物药物组合物的某组分是否发生失活，可用于生物药物组合物的活性研究及稳定性评价。

【技术实现步骤摘要】
针对生物药物组合物的生物学活性评价方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及生物学活性评价方法，具体是指一种针对生物药物组合物的生物学活性评价方法。
技术介绍
随着生物技术水平的不断提高，包括基因克隆技术、细胞培养与纯化技术、生物分析技术等持续高速发展，生物大分子药物研发逐步取代化药小分子药物而成为制药领域的研究热点。2015年全球销售排名前十的药物中有8个是生物药，研发处于临床到上市阶段的生物药有超过4500个，可谓市场强劲，研发火爆。在国内，生物制药被列为国家医药工业“十三五”发展规划的重点突破领域。而“生物产业倍增和健康中国行动计划”则被纳入国家十三五规划纲要。生物技术药物主要包括生化提取类药物如人来源的血液制品如凝血因子、白蛋白等，和基因工程类药物包括疫苗、单克隆抗体、融合蛋白、多肽类药物等。其中单克隆抗体类药物以其安全性和有效性以及在抗肿瘤、自身免疫疾病领域的巨大成功和潜力，在生物技术药物的大的发展浪潮中独领风骚。2015年全球药物销售前十的8个生物技术药物中有6个是单克隆抗体药物，并且常年位居全球药物销售冠军的是雅培的阿达木单抗。传统化药小分子类药物具有较好的抗肿瘤细胞作用，但其选择性较差，毒副作用较大，对患者体内正常细胞也有杀伤，极大限制了化药小分子类药物的应用和发展。生物药物特别是单克隆抗体类药物的1个突出显著特点和优势在于靶向性，以针对乳腺癌细胞表面HER2受体的赫赛汀单抗为例，该药在体内能够特异性作用于肿瘤细胞表面HER2受体而将肿瘤细胞杀死或抑制肿瘤细胞生长，达到治疗乳腺癌患者的目的。然而生物药物的应用也有其局限性，同样以赫赛汀为例，并非所有乳腺癌患者的乳腺癌肿瘤细胞表面都高表达HER2受体蛋白或者说表达的HER2受体蛋白都与赫赛汀表现出较好的亲和力。临床研究表明事实上仅有约30％-40％的乳腺癌患者接受赫赛汀单抗治疗能够表现良好的治疗效果，而其中的大部分患者在继续接受赫赛汀治疗时的治疗效果会逐步减弱。类似的案例有很多包括目前研发市场火热的免疫检查点PD1、PDL1、CTLA4单抗药物等，仅依靠单一作用靶点的单抗药物无法满足日益复杂的临床需要。目前大部分的生物药物特别是抗肿瘤的单克隆抗体药物还并未进入治疗用一线用药行列，而是作为化药小分子药物以及放射性疗法的补充，来改善癌症患者的生活质量。在这样的大背景下，为了克服生物药物单一靶点作用局限性的问题，生物技术药物的研究呈现许多新的方向，包括抗体偶联小分子药物ADC类药物，以Amgen2013年获批的Kadcyla(T-DM1)为代表；双特异性抗体Bispecificmonoclonalantibody类药物，以Amgen2014年获批的Blinatumomab(BiTE)为代表；以及多个生物药物联合用药(CombinationCocktail)或生物药物与小分子药物联合用药，如针对乳腺癌患者HER2靶点的2个单克隆抗体药物Trastuzumab和Pertuzumab联合用药，针对非霍奇金淋巴瘤的2个单克隆抗体药物epratuzumab和rituximab联合用药等，大量的针对不同靶点的生物药物的联合用药的临床实验在各个大的临床研究中心积极开展中。国内生物技术药物的发展较国外虽然起步较晚，但发展势头迅猛，紧跟国际步伐，从传统靶点的生物类似药研发开始，到新的免疫检查点靶点的创新生物药，再到抗体偶联小分子药物ADC、双特异性抗体、生物药物组合物等，有数十个研发项目处于临床前或临床研究的不同阶段，涉及的生物制药企业超过百家，近些年国内生物药物IND申报数量也逐年提升达到近百件IND申报/年。2016年，上海医药基于国际上治疗乳腺癌患者采用2个单克隆抗体药物Trastuzumab和Pertuzumab联合用药的研究思路，开创性的将这2个抗体分子按照1:1质量比例混合形成抗体组合物，得到一种新型组合药物，用于治疗乳腺癌。Trastuzumab(T组分)和Pertuzumab(P组分)这2个单抗分子均靶向乳腺癌细胞表面生长因子受体HER2，作用于HER2胞外区的不同表位，抑制肿瘤细胞生长，具有协同作用。临床前药理研究结果也表明该新型抗体组合药物具有优于T组分或P组分单独给药的药效。该新型组合药物相对传统单抗药物进步明显，具有更广泛的应用前景。此外，针对VEGF单抗、PCSK9单抗、阿达木单抗、自噬调节类药物的生物药物组合物等的研究也屡见报端，该类药物将多个不同作用机制、不同作用靶点药物组合而发挥各自的功效，克服前述单靶点生物药物的作用靶点单一的缺陷，达到更好治疗效果。生物技术药物研究方向的拓展和进步势必促发生物药物质量研究手段的不断变革，生物技术药物的最终产品上市离不开质量研究的保障。即使单个生物药物组分的质量研究手段已经健全，也不能保证多个生物药物形成组合物后，之前的传统成熟手段还适用。以2种单克隆抗体药物组合而成的生物药物组合物为例，质量研究重点关注产品纯度、活性和杂质含量。其中杂质含量检测与常规单抗药物基本一致；产品纯度检测则需要对组合物单抗的2个核心组分进行区分，在纯度分析方法开发过程中不止需考虑杂质峰的分离度，也需要考虑2个核心组分的分离效果，开发难度高于常规单抗药物；而针对该抗体组合物的活性评价则是最困难的：首先，2个核心单抗组分的靶点不同，生物学评价手段也很可能不同，2者作为传统单抗药物都有各自的生物活性评价方法，在利用各自的生物活性方法检测单抗组合物时可能出现协同作用，也可能相互阻碍使得检测结果难以评价；其次，2者的蛋白浓度需要分别检测确认，不能简单用2者混合之后的蛋白浓度作为组合物的生物活性评价基准，因为二者的作用机理可能不同；更进一步在稳定性研究中，希望通过该组合物的生物学活性检测能够区分判断组合物的各个组分是否出现活性下降。所以简而言之，针对生物药物组合物的生物活性方法开发难点在于如何建立和使用一种生物活性方法能够评价生物药物组合物作为整体新型药物的生物学活性，同时利用该生物活性方法还能够表征和追踪生物药物组合物各个单一活性组分的生物活性的变化。进行由多个针对不同靶点表位生物药物组合而得的生物药物组合物的生物学活性方法开发，特别是体外细胞生物活性方法的开发，需要克服上述针对生物药物组合物生物学活性检测的难题。针对不同单一活性组分可能存在各自的活性检测手段的问题，尽量寻找基于与各个活性组分都相关的作用机理为基础建立细胞活性方法，这样能够实现将生物药物组合物视为一个整体用一种生物活性方法进行评价，该生物活性方法能够用于评价生物药物组合物中的各个单一组分的生物学活性；针对不同单一活性蛋白组分的蛋白定量，传统方法基于HPLC色谱方法难以实现对不同蛋白组分的充分分离而对蛋白精准定量，本专利技术采用ELISA夹心法定量的方法实现对生物药物组合物的各个单一组分进行精确定量；针对生物药物组合物各个单一组分的活性变化情况的追踪，采用数据采集的方式，将不同单一活性蛋白组分按照各种比例进行混合，并用针对整体的生物活性方法进行检测，由于该生物活性方法能够用于评价各个单一组分，因此在计算和记录不同比例生物药物组合物的生物学活性时，分别以某单一组分为基准记录当其他组分的比例发生变化时的检测结果的变化(包括活性检测值，活性检测4-或5-参数曲线本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：建立针对生物药物组合物中的各个蛋白组分的蛋白定量方法，用于准确检测生物药物组合物中的各个蛋白组分的蛋白浓度；步骤(2)：确认生物药物组合物中的各个蛋白组分的共同的生物学作用机理，并基于所述的生物学作用机理建立生物学活性评价方法，所述的生物学活性评价方法可用于评价生物药物组合物中的各个单一蛋白组分的生物学活性；步骤(3)：将生物药物组合物的各个蛋白组分在已知浓度情况下按照不同比例混合，利用所建立生物学活性评价方法检测不同比例混合的生物药物组合物的生物学活性，以某单一组分蛋白浓度为基准，记录不同混合比例条件下的生物药物组合物的生物学活性检测结果。

【技术特征摘要】
1.一种针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：建立针对生物药物组合物中的各个蛋白组分的蛋白定量方法，用于准确检测生物药物组合物中的各个蛋白组分的蛋白浓度；步骤(2)：确认生物药物组合物中的各个蛋白组分的共同的生物学作用机理，并基于所述的生物学作用机理建立生物学活性评价方法，所述的生物学活性评价方法可用于评价生物药物组合物中的各个单一蛋白组分的生物学活性；步骤(3)：将生物药物组合物的各个蛋白组分在已知浓度情况下按照不同比例混合，利用所建立生物学活性评价方法检测不同比例混合的生物药物组合物的生物学活性，以某单一组分蛋白浓度为基准，记录不同混合比例条件下的生物药物组合物的生物学活性检测结果。2.根据权利要求1所述的针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，其特征在于，所述的步骤(1)中的定量方法为基于ELISA的蛋白定量方法。3.根据权利要求1所述的针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，其特征在于，所述的生物药物组合物包括至少两种组分，所述的组分选自单克隆抗体药物、融合蛋白、多肽类药物。4.根据权利要求1所述的针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，其特征在于，所述的生物药物组合物为单克隆抗体组合物，如果所述的生物药物组合物的各个蛋白组分为基于同一靶点的不同表位，则建立针对同一靶点的生物学作用机理的生物学活性评价方法；如果所述的生物药物组合物的各个蛋白组分的靶点不同，则建立针对单抗Fc段共同的生物学功能的生物学活性评价方法或者找到包含各个不同靶点的细胞株，建立所述的细胞株针对不同组分的生物学活性方法。5.根据权利要求1所述的针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，其特征在于，所述的生物药物组合物为各个组分针对同一靶点不同表位的生物药物组合物。6.根据权利要求1所述的针对生物药物组合物的生物学活性评价方法，其特征在于，所述的生物药物组合物中的组分按照预设比例混合而成。7.根据权利要求1所述的针对生物药物组合物的生物学活...

【专利技术属性】
技术研发人员：王少雄，吕品，刘丹莉，许飞，
申请(专利权)人：上海博威生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31