本发明专利技术公开了一种用于检测金黄色葡萄球菌的经过特异性抗体包被的PCR反应管及免疫PCR检测试剂盒。所述的PCR反应管上预包被了能特异性富集样品中金黄色葡萄球菌的单克隆抗体。本发明专利技术的检测试剂盒能够快速、准确、灵敏地从食品等样品中检测出金黄色葡萄球菌，其灵敏度可达到103～104cfu/ml，比常规PCR灵敏度提高10～100倍。本发明专利技术将免疫学和分子生物学方法有机结合于一体，可在一个PCR管中实现样品中金黄色葡萄球菌的富集和检测，操作简便，成本低廉，检测快速，结果准确。
【技术实现步骤摘要】
金黄色葡萄球菌免疫PCR检测试剂盒
本专利技术属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测金黄色葡萄球菌的免疫PCR检测试剂盒。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是最常见的食源性致病菌,广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌主要污染奶、肉、蛋、鱼及其制品等动物性产品，包括奶制作的饮料、冷饮、糕点，熟肉、肉制品罐头，剩饭、油煎蛋、糯米糕、凉粉、剩大米和米酒等，俗名“嗜肉菌”。金黄色葡萄球菌侵染人体后主要会引起一下人体疾患，其一是侵袭性疾病如引起化脓性感染，如伤口化脓、蜂窝织炎，肺炎、脑膜炎、心包炎，败血症等；其二是由金黄色葡萄球菌产生的毒素性疾病，人食用后引起头晕、恶心、腹泻、呕吐等急性胃肠炎等食物中毒症状，而由毒素引起的休克综合症表现为高热、低血压、腹泻、皮疹、休克。目前金黄色葡萄球菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以金黄色葡萄球菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及金黄色葡萄球菌快速检测产品O
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测金黄色葡萄球菌的PCR反应管。本专利技术的另一个目的是提供一种用于检测金黄色葡萄球菌的免疫PCR检测试剂`盒。本专利技术的第一方面是提供了一种用于检测金黄色葡萄球菌的PCR反应管，所述的PCR反应管包括:免疫PCR管；和包被于所述的免疫PCR管管体内壁的抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体，所述的抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系OT2G2D9C1，CGMCC N0.8763或OT6D9G3B4，CGMCC N0.8764 产生。本专利技术的第二方面是提供了一种检测试剂盒，所述的试剂盒含有所述的PCR反应管。在一优选例中，所述的试剂盒还含有容器a，所述的容器a中装有所述的PCR反应管。 在另一优选例中，所述的试剂盒还含有缓冲液、dNTP、TaqDNA聚合酶、ddH20、引物、阳性对照和阴性对照。在另一优选例中，所述的引物包括正向引物和反向引物。在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的金黄色葡萄球菌菌液，所述的阴性对照为灭菌的脑心浸出液肉汤。本专利技术各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本专利技术的特点、目的和优势将更为明显。【专利附图】【附图说明】图1是本专利技术的试剂盒的使用流程和原理图。图2是金黄色葡萄球菌直接PCR梯度稀释检测限研究结果。其中，M:1OOObp DNA ladder ；N:阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO8 ~1.24X 10cfu/mL。图3是金黄色葡萄球菌免疫PCR检测试剂盒检测金黄色葡萄球菌梯度稀释检测限研究结果。其中，M:1OOObp DNA ladder ；N:阴性对照；1-8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO8 ~1.24X 10cfu/mL。图4是检测试剂盒特异性的结果。其中，M=1000bp DNA ladder ;N:阴性对照；1_11号泳道分别为:金黄色葡萄球菌ATCC82346，金黄色葡萄球菌ATCC27660，鼠氏伤寒沙门氏菌ATCC22956，肠炎沙门氏菌ATCC13076，单增李斯特菌ATCC43251，小肠结肠炎耶尔森氏菌ATCC23715，福氏志贺氏菌ATCC12022，宋内氏志贺氏菌ATCC25931，痢疾志贺氏菌ATCC51329，乙型溶血性链球菌ATCC10373,阪崎肠杆菌 ATCC29004。图5是模拟带菌牛奶样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。A (I)模拟带菌牛奶样品直接PCR检测限研究结果；A (2)模拟带菌牛奶样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；其中，M =1000bp DNA ladder ;N:阴性对照；1号泳道为牛奶样品(不加菌液)；2_8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO2~1.24X 108cfu/mL。图6是模拟带菌酸奶样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。B (I)模拟带菌酸奶样品直接PCR检测限研究结果；B (2)模拟带菌酸奶样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；其中，M =1000bp DNA ladder ;N:阴性对照；1号泳道为酸奶样品(不加菌液)；2_8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO2~1.24X 108cfu/mL。图7是模拟带菌香肠样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果；C (I)模拟带菌香肠样品直接PCR检测限研究结果；C (2)模拟带菌香肠样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；其中，M =1000bp DNA ladder ;N:阴性对照；1号泳道为香肠样品(不加菌液)；2_8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO2~1.24X 108cfu/mL。图8是模拟带菌蛋糕样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。D (I)模拟带菌蛋糕样品直接PCR检测限研究结果；D (2)模拟带菌蛋糕样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；其中，M =1000bp DNA ladder ;N:阴性对照；1号泳道为蛋糕样品(不加菌液)；2_8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO2~1.24X 108cfu/mL。图9是模拟带菌果汁样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。E (I)模拟带菌果汁样品直接PCR检测限研究结果；E (2)模拟带菌果汁样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；其中，M:1OOObp DNA ladder ;N:阴性对照；1号泳道为果汁样品(不加菌液);2_8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO2~1.24X 108cfu/mL。图10是模拟带菌鸡蛋样品免疫PCR试剂盒检测限研究结果。F(I)模拟带菌鸡蛋样品直接PCR检测限研究结果；F (2)模拟带菌鸡蛋样品免疫捕获PCR检测试剂盒检测限研究结果；其中，M:1000bp DNA ladder ;N:阴性对照；1号泳道为鸡蛋样品(不加菌液)；2_8号泳道对应的细菌浓度为:1.24X IO2~1.24X 108cfu/mL。【具体实施方式】本专利技术人的研究表明，以金黄色葡萄球菌作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，分离纯化得到抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体OT2G2D9C1和OT6D9G3B4，其抗体效价可达到1:100000，其能够特异性、高效地与金黄色葡萄球菌结合，检测灵敏度达到105cfu/ml。与单增李斯特、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、出血性大肠杆菌0157:H7、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽孢杆菌等共计74种病原细菌均无交叉反应。`在此基础上，本专利技术人进而将致病菌免疫富集技术和基因水平检测技术有效结合，即先用本专利技术的抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体将待测样品中的病原菌特异性免疫富集，然后再进行PCR扩增，从而提供了一种可快速、高效检测食源性金黄色葡萄球菌的检测试剂盒。抗体本专利技术的抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体可以利用小鼠杂交瘤细胞系OT2G2D9C1(CGMCC N0.8763)或?6D9G3B4(CGMCC N0.8764)分泌产本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测金黄色葡萄球菌的PCR反应管，其特征在于，所述的PCR反应管包括: 免疫PCR管；和 包被于所述的免疫PCR管管体内壁的抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体，所述的抗金黄色葡萄球菌单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞系OT2G2D9C1，CGMCC N0.8763或OT6D9G3B4，CGMCCN0.8764 产生。2.一种检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有如权利要求1所述的PCR反应管。3.如权利要求2所述的试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘箐，吴嫚，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：
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