一种竹节虾抗氧化肽及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种竹节虾抗氧化肽，其氨基酸序列为Gly‑Asn‑Gly‑Leu‑Pro；还涉及该竹节虾抗氧化肽的制备方法，其包括以下步骤：原料预处理；超声波辅助酶解；超滤处理；凝胶柱处理；以及反相高效液相色谱处理。与现有技术相比，本发明专利技术的竹节虾抗氧化肽，其具有较强的抗氧化活性，并以竹节虾虾头为原料，来源广，成本低，解决了竹节虾加工过程中产生的下脚料问题，对进一步提高竹节虾的经济价值具有的理论意义，此外，本发明专利技术将超声波处理和蛋白酶酶解结合，提高水解率，充分提取原料中的有效成分，提高提取率，且提取方式温和，不会对待提取的有效成分造成破坏，同时通过多重分离纯化、逐步筛选，获得结构可靠的竹节虾抗氧化肽。

Bamboo shoot shrimp antioxidation peptide and preparation method thereof

The invention relates to a bamboo shrimp antioxidant peptide, the amino acid sequence of Gly Asn Gly Leu Pro; preparation method of the bamboo shrimp also relates to antioxidant peptide, which comprises the following steps: raw material pretreatment; ultrasonic assisted hydrolysis; ultrafiltration; gel column processing; processing and reverse phase high performance liquid phase chromatography. Compared with the prior art, the invention of antioxidant peptide bamboo shrimp, which has strong antioxidant activity, and bamboo shrimp as raw materials, wide source, low cost, solve the problem of waste produced bamboo shrimp in the process, the theoretical significance, to further improve the economic value of bamboo shrimp. In addition, the invention will combined with ultrasonic treatment and protease, improve the hydrolysis rate, fully extract the active ingredients in the raw materials, increase the extraction rate and extraction method, the extraction of the effective component will not treat mild, causing damage, at the same time through separation and purification, multiple stepwise selection, obtain reliable structure of bamboo shrimp antioxidant peptide.

【技术实现步骤摘要】
一种竹节虾抗氧化肽及其制备方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种竹节虾抗氧化肽及其制备方法。
技术介绍
竹节虾(Penaeusjaponicus)学名日本对虾，隶属于十足目、对虾科，是世界上三大养殖虾类中养殖面积和产量最大的对虾养殖品种，因其色彩艳丽且呈斑节状，故而得名，有“虾后”之誉。竹节虾不仅个体大，而且肉质鲜美，是海产品中的精品，因此很适合做寿司虾等产品。目前，竹节虾大多数被加工成去头速冻虾肉制品，用于内销或出口，以致在加工过程中大约有35％的虾头下脚料产生，其中，虾头肉约占虾头下脚料重量的30％。由于虾头中含胃囊、口器等砂石硬质成分，无法直接食用，因此，如何对竹节虾加工中的虾头副产物进行深加工以提高产品附加值是目前亟待解决的问题。目前国内外学者对竹节虾的研究大多集中于育苗、养殖、生物学形态和习性等方面，如申请号为201410346224.8(公开号为CN104115772A)的中国专利技术专利《一种竹节虾的淡水养殖池管理方法》。抗氧化性是近年来国内外科学工作者对多肽生物活性研究中的一个新课题，来源于食物蛋白的抗氧化肽，不但具有良好的抗氧化活性，而且安全性极高，因而在保健食品以及生物医药领域的应用前景十分广阔。例如：专利号为ZL201210230756.6(授权公告号为CN103524596A)的中国专利技术专利《一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途》、专利号为ZL201310152590.5(授权公告号为CN103194519A)的中国专利技术专利《一种豌豆蛋白酶解制备抗氧化肽的方法及应用》等专利均公开了食物蛋白来源的抗氧化肽。然而，目前未有利用竹节虾虾头提取分离抗氧化肽的研究报道，而对竹节虾虾头的抗氧化成分进行研究，不仅能充分利用竹节虾虾头下脚料，提高竹节虾的产品附加值，而且对拓展抗氧化肽的研究具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一个技术问题是针对现有技术而提供一种抗氧化活性强的竹节虾抗氧化肽。本专利技术所要解决的第二个技术问题是针对现有技术而提供一种上述竹节虾抗氧化肽的制备方法。本专利技术所要解决的第三个技术问题是针对现有技术而提供一种提高竹节虾抗氧化肽在生物体内稳定性的方法。本专利技术解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种竹节虾抗氧化肽，其特征在于，所述竹节虾抗氧化肽的氨基酸序列为Gly-Asn-Gly-Leu-Pro。本专利技术解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为：一种如上所述的竹节虾抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)原料预处理：将竹节虾虾头清洗干净，去除脂质成分，匀浆绞成浆液备用；(2)超声波辅助酶解：向上述浆液加入超纯水制成溶液料液比为1:6～14w/v，调节pH值至中性，加入中性蛋白酶，45～65℃下超声波辅助酶解20～60min，酶解结束后，沸水灭活，离心取上清液得酶解溶液；(3)超滤处理：将上述酶解溶液经超滤分离后，得分子量大于10kDa组、分子量范围为5～10kDa组、分子量范围为3～15kDa组以及分子量小于3kDa组，冻干后分别测定各组的DPPH清除率及还原力；(4)凝胶柱处理：在滤膜超滤分离后获得的各组中，选取DPPH清除率最高的组分加超纯水配制成溶液，脱盐后，经SephadexG-25凝胶柱分离纯化，收集各峰，冻干后测定各组的DPPH清除率；(5)反相高效液相色谱处理：在凝胶柱分离后获得的各组中，选取DPPH清除率最高的组分加超纯水配制成溶液，经滤膜过滤后用反相高效液相进行分离纯化，收集各洗脱峰，浓缩后分别测定各组的DPPH清除率，其中DPPH清除率最高的组即为所需的竹节虾抗氧化肽。作为优选，所述步骤(2)中，超声频率为10～30kHz。作为优选，所述步骤(4)中，洗脱液为超纯水，流速为1.0mL·min-1。作为优选，所述步骤(5)中，反相高效液相色谱的色谱条件为：采用C18色谱柱4.6×250mm，5μm，A相为含0.1％三氟乙酸的乙腈，B相为含0.1％三氟乙酸的超纯水，柱温25℃，流速1.0mL·min-1，洗脱过程为：0％～100％B洗脱8min，15％～85％B洗脱17min，30％～70％B洗脱10min，0％～100％B洗脱5min。本专利技术解决第三个技术问题所采用的技术方案为：一种提高如上所述的竹节虾抗氧化肽在生物体内稳定性的方法，其特征在于，将所述竹节虾抗氧化肽和鸡卵清蛋白分别配置成同浓度的溶液，在配置的竹节虾抗氧化肽溶液中加入鸡卵清蛋白溶液，且鸡卵清蛋白溶液与该竹节虾抗氧化肽溶液的体积比为1:4～6。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术提供了一种全新的竹节虾抗氧化肽，其具有较强的抗氧化活性且DPPH清除率可达85％以上，可广泛应用于各种抗氧化产品中；本专利技术以竹节虾虾头为原料，来源广，成本低，解决了竹节虾加工过程中产生的下脚料问题，对进一步提高竹节虾的经济价值具有的理论意义，此外，本专利技术将超声波处理和蛋白酶酶解结合，提高水解率，充分提取原料中的有效成分，提高得率，且提取方式温和，不会对待提取的有效成分造成破坏，同时通过多重分离纯化、逐步筛选，获得结构可靠的竹节虾抗氧化肽。附图说明图1为本专利技术实施例1中一定时间段内不同水解蛋白酶的水解度变化示意图；图2为本专利技术实施例1中一定时间段内不同水解蛋白酶的DPPH清除率变化示意图；图3为本专利技术实施例1中超声温度对竹节虾虾头酶解产物DPPH清除率和水解度的影响；图4为本专利技术实施例1中超声时间对竹节虾虾头酶解产物DPPH清除率和水解度的影响；图5为本专利技术实施例1中超声频率对竹节虾虾头酶解产物DPPH清除率和水解度的影响；图6为本专利技术实施例1中料液比对竹节虾虾头酶解产物DPPH清除率和水解度的影响；图7为本专利技术实施例1中超声时间和超声温度对酶解产物DPPH清除率影响的响应分析结果图；图8为本专利技术实施例1中超声频率和超声温度对酶解产物DPPH清除率影响的响应分析结果图；图9为本专利技术实施例1中料液比和超声温度对酶解产物DPPH清除率影响的响应分析结果图；图10为本专利技术实施例1中超声频率和超声时间对酶解产物DPPH清除率影响的响应分析结果图；图11为本专利技术实施例1中料液比和超声时间对酶解产物DPPH清除率影响的响应分析结果图；图12为本专利技术实施例1中料液比和超声频率对酶解产物DPPH清除率影响的响应分析结果图；图13为本专利技术实施例1中SHP4组分的SephadexG-25层析图；图14为本专利技术实施例1中SHP4组分的SephadexG-25层析后各峰的DPPH清除率；图15为本专利技术实施例1中SHP4-II组分的反相高效液相分离图谱；图16为本专利技术实施例1中SHP-D组分的反相高效液相分离图谱；图17为本专利技术实施例2中SHP-D组分一级质谱总离子流图；图18为本专利技术实施例2中SHP-D组分分离纯化后的多肽质谱图。具体实施方式以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。实施例1：竹节虾抗氧化肽的制备1.1原料与试剂原料：竹节虾虾头，购自舟山海圣生物有限公司。试剂：胰蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶以及中性蛋白酶，上述蛋白酶均购于广西南宁庞博生物工程有限公司；Gly、Gly-Gly-Gly、维生素B12、抑肽酶、细胞色素C、牛血清白蛋白，乙腈(色谱级)、三氟乙酸(色谱级)、甲酸(色谱级)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种竹节虾抗氧化肽，其特征在于，所述竹节虾抗氧化肽的氨基酸序列为Gly‑Asn‑Gly‑Leu‑Pro。

【技术特征摘要】
1.一种竹节虾抗氧化肽，其特征在于，所述竹节虾抗氧化肽的氨基酸序列为Gly-Asn-Gly-Leu-Pro。2.一种如权利要求1所述的竹节虾抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)原料预处理：将竹节虾虾头清洗干净，去除脂质成分，匀浆绞成浆液备用；(2)超声波辅助酶解：向上述浆液加入超纯水制成溶液，料液比为1:6～14w/v，调节pH值至中性，加入中性蛋白酶，45～65℃下超声波辅助酶解20～60min，酶解结束后，沸水灭活，离心取上清液得酶解溶液；(3)超滤处理：将上述酶解溶液经超滤分离后，得分子量大于10kDa组、分子量范围为5～10kDa组、分子量范围为3～15kDa组以及分子量小于3kDa组，冻干后分别测定各组的DPPH清除率；(4)凝胶柱处理：在滤膜超滤分离后获得的各组中，选取DPPH清除率最高的组加超纯水配制成溶液，脱盐后，经SephadexG-25凝胶柱分离纯化，收集各峰，冻干后测定各组的DPPH清除率；(5)反相高效液相色谱处理：在凝胶柱分离后获得的各组中，选取DPPH清除率最高的组分加超纯水配制成溶液，经滤膜过滤后用反相...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丽，方旭波，陈小娥，黄湛媛，朱亚珠，
申请(专利权)人：浙江国际海运职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33