一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612及其应用和制备方法技术

本发明专利技术公开了一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612及其应用和制备方法，属于微生物领域。本发明专利技术提供的阴城假单胞菌YC1612，其保藏编号为CCTCC NO:M 2017173。该菌能够产卤醇脱卤酶，在亲核试剂的参与下可以催化环氧化物开环制备手性环氧化物和β‑取代醇。当以N3‑为亲核试剂，催化邻甲基苯基缩水甘油醚开环反应时，(S)‑邻甲基苯基缩水甘油醚的ee值可达到98％，生成的(R)‑1‑叠氮‑3‑(2‑甲基苯氧基)‑2‑丙醇的ee值达到96.8％。其可在生物催化环氧化物选择性开环制备手性环氧化物和β‑取代醇中的进行应用，具有重要应用前景。

Pseudomonas putida YC1612 for producing halogen alcohols and its application and preparation method

The invention discloses a Pseudomonas putida YC1612 which produces a halogen producing enzyme and an application and a preparation method thereof, belonging to the field of microorganisms. Eumseong Pseudomonas YC1612 provided by the invention, the preservation number is CCTCC NO:M 2017173. The bacteria can produce dehalogenase, the nucleophile can participate in catalytic ring opening of epoxides to prepare chiral epoxides and beta substituted alcohols. When the N3 nucleophilic catalysis ortho methyl phenyl glycidyl ether ring opening reaction, (S) ortho methyl phenyl glycidyl ether EE value can reach 98%, the 1 generation (R) azide 3 (2 methylphenoxy) 2 propanol the EE value reached 96.8%. The open loop system in the biocatalytic preparation of chiral epoxides and epoxide selectivity of beta substituted alcohols in application, has important application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612及其应用和制备方法
本专利技术涉及微生物领域，具体而言，涉及一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612及其应用和制备方法。
技术介绍
卤醇脱卤酶(HalohydrinDehalogenase，HHDHs,EC4.5.1.X)也叫卤醇-卤化氢裂解酶，属于短链脱氢酶/还原酶家族，多存于1,3-二氯丙醇，表卤醇等众多重要的环境污染物的生物降解途径中。卤醇脱卤酶可以广泛应用于合成环氧化物以及β-取代醇。其中叠氮化醇、氰取代醇以及硝基醇是合成氨基醇的前体；手性氨基醇在生物制药领域是一类很重要的化合物，可用来合成多种生物活性物质。异硫氰酸取代醇和噁唑烷酮在农用化学试剂、医药和高分子化学领域中有着广泛应用，其介导的生物催化反应具有反应条件温和、立体选择性高和不需要辅酶等优点。卤醇脱卤酶因为在污水治理中的应用前景以及在合成手性药物中间体中的应用而得到广泛的重视，但是对于卤醇脱卤酶的研究在国内外均处于起步阶段。迄今为止已利用卤代醇或表氯醇为限制性碳源从土壤中筛选获得卤代醇降解菌株，仅仅包括AgrobacteriumradiobacterAD1、Corynebacteriumsp.N-1074、Arthrobactersp.、ArthrobactererithiiH10a、Mycobacteriumsp.GP1、Parvibaculumlavamentivorans、Agromycesmediolanus和Tistrellamobilis等。生物催化剂是不对称生物合成的核心，其来源多样性在很大程度上决定了生物催化反应的多样性。卤醇脱卤酶酶源的匮乏，制约了卤醇脱卤酶立体选择性生物催化在手性β-取代醇合成中的开发应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612(PseudomonasumsongensisYC1612)。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2017173，保藏日期为2017年4月10日。该菌株产卤醇脱卤酶，其可作为卤醇脱卤酶的酶源，有大大地拓展了卤醇脱卤酶立体选择性生物催化在手性β-取代醇合成中的开发应用。本专利技术的另一目的在于提供上述阴城假单胞菌YC1612的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种卤醇脱卤酶的制备方法，该制备方法通过上述阴城假单胞菌YC1612制备得到卤醇脱卤酶。本专利技术是这样实现的：一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612，其保藏编号为CCTCCNO:M2017173。上述的阴城假单胞菌YC1612的应用。一种卤醇脱卤酶的制备方法，该制备是利用上述的阴城假单胞菌YC1612制备得到卤醇脱卤酶。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的产生卤醇脱卤酶的新菌株即阴城假单胞菌YC1612(PseudomonasumsongensisYC1612)，保藏编号为CCTCCNO:M2017173。该菌株能够产卤醇脱卤酶，在亲核试剂的参与下可以催化环氧化物开环生成手性环氧化物和β-取代醇。以N3-为亲核试剂，催化邻甲基苯基缩水甘油醚开环反应时，(S)-邻甲基苯基缩水甘油醚的ee值可达到98％，生成的(R)-1-叠氮-3-(2-甲基苯氧基)-2-丙醇的ee值达到96.8％。其可在生物催化环氧化物选择性开环制备手性环氧化物和β-取代醇中的进行应用，也可用于制备卤醇脱卤酶，作为卤醇脱卤酶酶源，具有重要应用前景。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例2提供的阴城假单胞菌YC1612的菌落形态图；图2为本专利技术实施例4提供的以苯基缩水甘油醚为底物生物转化后的产物的液相色谱图；图3为本专利技术实施例5提供的以邻甲基苯基缩水甘油醚为底物生物转化后的产物的液相色谱图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的一种产卤醇脱卤酶阴城假单胞菌及其应用和制备方法进行具体说明。一方面，本专利技术提供了一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612(PseudomonasumsongensisYC1612)，其保藏编号为CCTCCNO:M2017173。该菌株的具体保藏信息如下：阴城假单胞菌YC1612，分类学命名为PseudomonasumsongensisYC1612，已于2017年4月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:M2017173。该阴城假单胞菌YC1612由从江苏盐城滩涂等地的土样中分离得到，其产卤醇脱卤酶，具有较高的脱卤活性。经进一步的分析鉴定，该阴城假单胞菌YC1612菌落形态为：菌落呈灰白色，边缘整齐，圆形，隆起，表面光滑，不透明(如图1所示)；光学显微镜下观察呈杆状，革兰氏染色呈阴性。该菌株能够产卤醇脱卤酶，在亲核试剂的参与下可以催化环氧化物开环生成手性环氧化物和β-取代醇。以N3-为亲核试剂，催化邻甲基苯基缩水甘油醚开环反应时，(S)-邻甲基苯基缩水甘油醚的ee值可达到98％，生成的(R)-1-叠氮-3-(2-甲基苯氧基)-2-丙醇的ee值达到96.8％。其可在生物催化环氧化物选择性开环制备手性环氧化物和β-取代醇中的进行应用，也可用于制备卤醇脱卤酶，作为卤醇脱卤酶酶源，具有重要应用前景。另一方面，本专利技术提供了上述阴城假单胞菌YC1612的应用。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述应用是将阴城假单胞菌YC1612用于制备手性环氧化物和β-取代醇。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述应用是在亲核试剂参与下进行催化反应，以制备手性环氧化物和β-取代醇。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述亲核试剂具体为N3-、NO2-或CN-。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述应用具体为：以环氧化物为底物，以上述阴城假单胞菌YC1612经发酵获得含卤醇脱卤酶菌体细胞为催化剂，以含有亲核试剂的缓冲溶液为反应体系，进行转化反应，得到手性环氧化物和β-取代醇。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述应用具体为：以邻甲基苯基缩水甘油醚或苯基缩水甘油醚为底物，以上述阴城假单胞菌YC1612经发酵获得含卤醇脱卤酶菌体细胞为催化剂，以含10-40mM叠氮化钠的pH为5.0-7.5的缓冲溶液为反应体系，于25-40℃下进行转化反应，于反应液中萃取手性环氧化物和叠氮醇。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，在上述反应体系中，上述底物添加量为10-50mM，上述含卤醇脱卤酶菌体细胞添加量为20-60g/L。再一方面，本专利技术提供了一种卤醇脱卤酶的制备方法，该制备方法是利用上述的阴城假单胞菌YC1612制备得到卤醇脱卤酶。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法包括：将上述阴城假单胞菌YC1612种子液接种至发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO:M 2017173。

【技术特征摘要】
1.一种产卤醇脱卤酶的阴城假单胞菌YC1612，其特征在于，其保藏编号为CCTCCNO:M2017173。2.权利要求1所述的阴城假单胞菌YC1612的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用是将阴城假单胞菌YC1612用于制备手性环氧化物和β-取代醇。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用是在亲核试剂参与下进行催化反应。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述亲核试剂具体为N3-、NO2-或CN-。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用具体为：以环氧化物为底物，以所述阴城假单胞菌YC1612经发酵获得含卤醇脱卤酶菌体细胞为催化剂，以含有亲核试剂的缓冲溶液为反应体系，进行转化反应，得到手性环氧化物和β-取代醇。7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用具体为...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛锋，窦琳霞，童琦，修元松，高健，黄和，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32