群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法技术

本发明专利技术提供了一种群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法。本发明专利技术首先提供了一种防腐保鲜剂，含有群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素nisin，用于食品的防腐保鲜。本发明专利技术还提供一种群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法，将食品浸泡于群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素配成的复配溶液中，所述的复配溶液中群体感应淬灭酶的活性为6.6×10

Group induction quenching enzyme and bacteriocin combined antiseptic preservation method

The invention provides a combined antiseptic and fresh-keeping method of group induction quenching enzyme and bacteriocin. The invention first provides an antiseptic antistaling agent, which comprises a group induction quenching enzyme and nisin nisin, and is used for the antisepsis and freshness preservation of food. The invention also provides a quorum quenching enzymes and bacteriocin preservation methods combined antiseptic, compound solution food soaked in quorum quenching enzymes and nisin into the mixed solution, wherein the quorum quenching enzymes is 6.6 * 10

【技术实现步骤摘要】
群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法
本专利技术涉及食品保鲜
，具体地说，涉及一种群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法。
技术介绍
群体感应(Quorumsensing,QS)是细菌通过产生、分泌和感知信号分子调节相关基因表达，从而控制一系列生理过程的一种信号交流机制。QS系统能调控细菌的多种行为例如致病性、生物被膜的形成、对抗菌物质的拮抗，对真核宿主细胞的防御响应等。近年来研究发现食品中微生物的某些行为(产生腐败酶，产生抗菌物质，生物被膜形成，通过竞争获得新特性或抗生素抗性)及微生物之间的相互影响及交流受QS调控，QS可能参与食品腐败。由于腐败菌的腐败行为可能受QS调控，因此通过阻断QS系统可以控制细菌中食品腐败相关基因的表达，最终控制腐败。群体感应淬灭酶能够破坏细菌的QS信号分子结构从而对其QS系统进行阻断，是一种有效的QS阻断方法。革兰氏阴性菌的QS信号分子通常为N-酰基高丝氨酸内酯(AHL),而AHL内酯酶是一种高度特定性的酶，它能够破坏AHLs的高丝氨酸内酯环，具有广泛的底物活性，因此能够被用于阻断革兰氏阴性菌的QS系统。据报道，来源于芽孢杆菌AI96(Bacillussp.AI96)的AHL内酯酶AiiAAI96对多种AHLs底物都具有水解活，且它与其它来源于Bacillus的AHL内酯酶相比具有更稳定的理化性质，AiiAAI96在pH8.0、10～40℃的条件下能维持接近100％的活性，在pH8.0，70℃条件下1h处理后能维持60％活性，并且能抵抗蛋白酶的水解作用，将AiiAAI96口服斑马鱼，能显著减少嗜水气单胞菌对斑马鱼的致病力。目前，将AHL内酯酶应用于食品防腐的研究还未见报道。乳酸菌细菌素由于其高效、安全、无毒、可被人体消化等的优点，使其成为天然生物防腐剂的研究热点。目前乳酸菌细菌素中只有乳酸链球菌素(Nisin)被批准添加到食品中。食品腐败特别是水产品的腐败主要由革兰氏阴性菌引起，而nisin对革兰氏阳性菌有非常强的抑制作用，对革兰氏阴性菌的抑制作用非常弱，因此它在食品腐败中的应用存在一定的局限性。将作用于革兰氏阴性菌的AHL内酯酶和作用于革兰氏阳性菌的nisin联合使用理论上可以达到更强的食品防腐效果，然而群体感应淬灭酶单独使用以及它与nisin复合使用应用于食品防腐方面的研究还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法。为了实现本专利技术目的，本专利技术首先提供一种防腐保鲜剂，其含有群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素。优选地，本专利技术的防腐保鲜剂是将群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素制成pH值为6.0-8.0的混合溶液；混合溶液中，群体感应淬灭酶的终浓度为6.6×10-2U/mL-66U/mL，乳酸链球菌素的终浓度为1800-2300IU/ml。优选地，本专利技术防腐保鲜剂中的群体感应淬灭酶的终浓度为6.6×10-1U/mL-6.6U/mL，乳酸链球菌素的终浓度为1900-2200IU/ml。更优选地，本专利技术防腐保鲜剂中的群体感应淬灭酶的终浓度为6.6×10-2U/mL，6.6×10-1U/mL或6.6U/mL，乳酸链球菌素的终浓度为2000IU/ml。最优选地，本专利技术防腐保鲜剂中的群体感应淬灭酶的终浓度为6.6U/mL，乳酸链球菌素的终浓度为2000IU/ml。进一步地，将群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素制成pH为7.0的混合溶液；混合溶液的溶剂为0.1M和pH7.0的磷酸盐缓冲溶液。本专利技术提供了上述防腐保鲜剂在食品防腐保鲜中的应用。本专利技术提供了群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法，是将待保鲜的食品在本专利技术上述的防腐保鲜剂液中浸泡处理。所述的食品为水产品或非水产品的肉类。浸泡处理时间为3-5min。本专利技术的群体感应淬灭酶和细菌素联合防腐保鲜方法还包括将浸泡后的食品取出沥干，0-4℃储藏或真空包装。本专利技术在不使用任何化学防腐剂的情况下，结合了群体感应淬灭酶对革兰氏阴性菌起主要作用和nisin对革兰氏阳性菌起主要作用的特点，对低温食品特别是水产品的防腐保鲜提供了一种新的方法。该技术不仅可以明显延长真空包装鲟鱼片4℃冷藏的货架期延长5天，有效减少贮藏过程中挥发性盐基氮和生物胺的积累，还可以延缓鱼肉色泽、气味、质构等感官品质的下降。附图说明图1真空包装鲟鱼片4℃贮藏过程中总菌数的变化.A,0.1MpH7.0磷酸盐缓冲液处理组；B,C,D分别为6.6,6.6×10-1,6.6×10-2U/mL淬灭酶处理组；E,F,G分别为6.6,6.6×10-1,6.6×10-2U/mL淬灭酶与2000IU/mLnisin复合处理组；H为2000IU/mLnisin处理组。A～H图例适用于图2至图7。图2真空包装鲟鱼片4℃贮藏过程中气单胞菌数的变化。图3真空包装鲟鱼片4℃贮藏过程中耐冷菌数的变化。图4真空包装鲟鱼片4℃贮藏过程中肠科菌菌数的变化。图5真空包装鲟鱼片4℃贮藏过程中感官分值的变化。图6真空包装鲟鱼片4℃贮藏过程中TVB-N的变化。图7真空包装鲟鱼片4℃贮藏过程中生物胺的变化。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。本专利技术实施例采用的乳酸链球菌素(Nisin)，购于浙江新银象生物工程有限公司，效价为1×106IU/g。群体感应淬灭酶购于北京挑战生物技术有限公司，N-酰基高丝氨酸内酯酶酶活为1000U/g。下文将其简称为淬灭酶。实施例1利用群体感应淬灭酶和细菌素对鲟鱼片的防腐保鲜1、含有群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素的防腐保鲜剂的制备淬灭酶酶活的测定方法采用琼脂平板扩散法。将3-oxo-C8-HSL溶于1×PBSpH8.0缓冲液中，使其终浓度为1mg/L。酶活反应体系：将20μL酶液，179uL的1×PBSpH8.0缓冲液和1μL的3-oxo-C8-HSL的溶液混合，摇匀。30℃温育30min后，反应体系中加入50μL10％的SDS溶液终止反应。在用平板扩散法检测中，ATmm琼脂用手术刀切割成4×60mm的胶条，用牙签将检测菌KYC55间隔4mm点接于胶条上，将10μL的反应终止的酶反应液滴定至胶条一端，30℃培养24h后计数变蓝点数，计算距离，按标准曲线公式计算3-oxo-C8-HSL消耗。对照组加酶液和缓冲液后，先加SDS溶液再加信号分子。标准曲线制备，将3-oxo-C8-HSL溶于1×PBSpH8.0缓冲液中，终浓度为1mg/L。分别向1×PBSpH8.0的缓冲液中添加10、5、1、0.5、0.1和0.05μL的3-oxo-C8-HSL的溶液，用1×PBSpH8.0的缓冲液将体系补充至200μL，摇匀。30℃温育30min后，反应体系中加入50μL10％的SDS溶液终止反应。用牙签将检测菌KYC55间隔4mm点接于胶条上，将10μL反应终止的反应液滴至胶条一端，30℃培养24h后计数变蓝点数，计算距离(mm)，以加入3-oxo-C8-HSL物质量为纵轴(y)，以扩散距离为横轴(x)，建立回归方程，计算3-oxo-C8-HSL消耗量。并以回归方程为基础建立酶活计算公式。酶活(U/mL)单位定义：在30℃条件下1min分解1nmol3-oxo本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防腐保鲜剂，其特征在于，含有群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素。

【技术特征摘要】
1.一种防腐保鲜剂，其特征在于，含有群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素。2.如权利要求1所述的防腐保鲜剂，其特征在于，将群体感应淬灭酶和乳酸链球菌素制成pH为6.0-8.0的混合溶液；混合溶液中，群体感应淬灭酶的终浓度为6.6×10-2U/mL-66U/mL，乳酸链球菌素的终浓度为1800-2300IU/ml。3.如权利要求2所述的防腐保鲜剂，其特征在于，群体感应淬灭酶的终浓度为6.6×10-1U/mL-6.6U/mL，乳酸链球菌素的终浓度为1900-2200IU/ml。4.如权利要求2所述的防腐保鲜剂，其特征在于，群体感应淬灭酶的终浓度为6.6×10-2U/mL，6.6×10-1U/mL或6.6U/mL，乳酸链球菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：李平兰，桂萌，武瑞赟，张璐，胡锦蓉，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11