一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法技术

本发明专利技术涉及食品中有害成分的检测领域，特别涉及一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法：利用HClO4溶液对质量为m的待测食品进行生物胺的提取处理，得到体积为V的上清液；在上清液中加入等体积的正己烷溶液进行萃取，重复1-2次，弃去上层有机相部分，得到净化后的提取液；将净化后的提取液进行柱前衍生化，得到衍生化的提取液；采用超高效合相色谱仪检测衍生化的提取液中生物胺的含量，得到提取液中所含生物胺的质量浓度。本发明专利技术采用超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量，并以超临界二氧化碳与正己烷/异丙醇/氨水溶液的混合体系为流动相，其黏度低，传质性能好，所以分析时间快、溶剂载量少、环境污染小。

A method for determination of biogenic amines in foods by ultra high performance liquid chromatography

The present invention relates to the field of detection of harmful ingredients in food, in particular to a method of combination of ultra high performance chromatography method for the determination of biogenic amines in food: the quality of food processing for extraction measurement of biogenic amines of M obtained by HClO4 solution, the volume of V was supernatant; hexane solution in the supernatant added etc. the volume of extraction, repeated 1-2 times, discarding the organic part of the upper, to obtain the extract after purification; the extract was purified by pre column derivatization, derivatization of the obtained extract; using ultra high performance chromatography and derivative content of biogenic amines in the extract, extraction concentration biogenic amine medium contained. The invention adopts ultra efficient combination chromatography method for the determination of biogenic amines in food, and in supercritical carbon dioxide with hexane / isopropanol / mixture of ammonia solution as mobile phase, the low viscosity, mass transfer performance, so the analysis time, solvent load less and less environmental pollution.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品中有害成分的检测领域，具体而言，涉及一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法。
技术介绍
生物胺是一类具有生物活性的含氮有机化合物的总称，可以看作是氨分子中1-3个氢原子被烷基或芳基取代后形成的低分子量生物碱。根据结构，可以将生物胺分成脂肪族（腐胺、尸胺、精胺、亚精胺等）、芳香族（酪胺、苯乙胺等）和杂环族（组胺、色胺等）三大类。生物胺参与机体正常代谢，是激素类、生物碱、核酸和蛋白质合成的重要前体物质，大多数具有强烈的生理活性，如促进生长、增强代谢活力和调节血压等。生物胺主要由氨基酸脱羧作用形成，少部分通过醛或酮的胺化作用形成，各种动植物组织细胞中都含有少量的生物胺。作为食品新鲜度的重要指标，生物胺主要由分泌氨基酸脱羧酶的微生物代谢形成，尤其是蛋白质含量丰富的食品，如发酵香肠和鱼肉制品、奶酪、发酵豆制品和饮料（啤酒，苹果酒、葡萄酒等）。生物胺不仅是食物香气的重要来源，也是N-亚硝基化合物合成的前体。当人体摄入过量生物胺时，极易引起神经系统和心血管系统损伤。目前，食品中生物胺的测定方法较多，在灵敏度、精密度、特异性、检测成本和所耗时间等方面各有利弊。其中，毛细管电泳法（CZE）具有无需衍生直接检测的优点，且具有较高的灵敏度，其分离速度快、仪器简单，但样品前处理有一定的局限，不能引入过多有机溶剂，限制了液液萃取法（LLE）的应用；酶生物传感器法，简便快速、检测限较低、特异性强，但目标酶筛选困难且容易失活，导致成本较高、重现性差；薄层色谱法（TLC）成本低、操作简单、快速，但灵敏度稍低，只能用于生物胺定性与半定量测定；高效液相色谱（HPLC）或气相色谱法（GC）准确性好，分离度和灵敏度较高，但分析时间长、有机溶剂载量大，成本高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法，以解决上述的问题。在本专利技术的实施例中提供了一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法，包括以下步骤：利用HClO4溶液对质量为m的待测食品进行生物胺的提取处理，得到体积为V的上清液；在所述上清液中加入等体积的正己烷溶液进行萃取，重复1-2次，弃去上层有机相部分，得到净化后的提取液；将所述净化后的提取液进行柱前衍生化，得到衍生化的提取液；采用超高效合相色谱仪检测所述衍生化的提取液中生物胺的含量，得到提取液中所含生物胺的质量浓度；所述超高效合相色谱仪的检测条件为：色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.8μm，填料为高强度硅胶颗粒；流动相为超临界二氧化碳与正己烷/异丙醇/氨水溶液的混合体系，正己烷：异丙醇：氨水的体积比为65-75:25-35:0.10-0.20；采用梯度洗脱，其中，超临界二氧化碳在不同时间段的体积百分比为：0-0.2min为96%-100%，0.2-5.0min为68%-72%，5.0-7.2min为96%-100%；分析时间：6.5-8.5min；柱温：40-60℃；进样量：0.5-10μl；流速：1.5-2.5ml/min；检测波长为254nm；通过以下公式计算得到待测食品中生物胺的含量为：（质量浓度*V）/m。优选地，所述生物胺包括精胺、亚精胺、腐胺、尸胺、色胺、苯乙胺、组胺和酪胺中的一种或多种。优选地，所述提取处理具体为：取质量m为3.0-6.0g的待测样品，加入10ml的0.4mol/L的HClO4，旋涡振荡5-10min，离心，收集上清液。优选地，采用0.4mol/L的HClO4提取待测食品中的生物胺两次，收集上清液。优选地，将所述净化后的提取液用0.4mol/L的HClO4定容至25ml。优选地，所述柱前衍生化处理方法具体为：取所述净化后的提取液1.0ml、2mol/L氢氧化钠溶液200μl、饱和碳酸氢钠溶液300μl和10mg/ml丹磺酰氯的丙酮溶液1ml，振荡混匀，于35-45℃避光反应40-50min，每隔8-10min振荡一次；加入100μl的氨水终止反应，室温下避光静置20-40min，取乙腈定容至5.0ml，振荡混匀，经0.22μm滤膜过滤后供色谱分析。优选地，所述超高效合相色谱仪检测时：所述进样量为5.0μl。优选地，所述超高效合相色谱仪检测时：波长补偿范围为350-450nm。优选地，所述超高效合相色谱仪检测时：备压为1800-2200psi。本专利技术实施例提供的一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法，采用超高效合相色谱法（ultra-performanceconvergencechromatography，UPC2）测定食品中生物胺含量，并以超临界二氧化碳与正己烷/异丙醇/氨水溶液的混合体系为流动相，其黏度低，传质性能好，所以分析时间快、溶剂载量少、环境污染小。附图说明图1示出了本专利技术实施例4中生物胺混标色谱图；图2示出了本专利技术实施例4中鱼露样品中生物胺的色谱图。具体实施方式下面通过具体的实施例子对本专利技术做进一步的详细描述。本专利技术实施例中提供了一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法，包括以下步骤：利用HClO4溶液对质量为m的待测食品进行生物胺的提取处理，得到体积为V的上清液；在所述上清液中加入等体积的正己烷溶液进行萃取，重复1-2次，弃去上层有机相部分，得到净化后的提取液；将所述净化后的提取液进行柱前衍生化，得到衍生化的提取液；采用超高效合相色谱仪检测所述衍生化的提取液中生物胺的含量，得到提取液中所含生物胺的质量浓度；所述超高效合相色谱仪的检测条件为：色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.8μm，填料为高强度硅胶颗粒；流动相为超临界二氧化碳与正己烷/异丙醇/氨水溶液的混合体系，正己烷：异丙醇：氨水的体积比为65-75:25-35:0.10-0.20；采用梯度洗脱，其中，超临界二氧化碳在不同时间段的体积百分比为：0-0.2min为96%-100%，0.2-5.0min为68%-72%，5.0-7.2min为96%-100%；分析时间：6.5-8.5min；柱温：40-60℃；进样量：0.5-10μl；流速：1.5-2.5ml/min；检测波长为254nm；通过以下公式计算得到待测食品中生物胺的含量为：（质量浓度*V）/m。本专利技术实施例提供的一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用HClO4溶液对质量为m的待测食品进行生物胺的提取处理，得到体积为V的上清液；在所述上清液中加入等体积的正己烷溶液进行萃取，重复1‑2次，弃去上层有机相部分，得到净化后的提取液；将所述净化后的提取液进行柱前衍生化，得到衍生化的提取液；采用超高效合相色谱仪检测所述衍生化的提取液中生物胺的含量，得到提取液中所含生物胺的质量浓度；所述超高效合相色谱仪的检测条件为：色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.8μm，填料为高强度硅胶颗粒；流动相为超临界二氧化碳与正己烷/异丙醇/氨水溶液的混合体系，正己烷：异丙醇：氨水的体积比为65‑75:25‑35:0.10‑0.20；采用梯度洗脱，其中，超临界二氧化碳在不同时间段的体积百分比为：0‑0.2min为96%‑100%，0.2‑5.0min为68%‑72%，5.0‑7.2min为96%‑100%；分析时间：6.5‑8.5min；柱温：40‑60℃；进样量：0.5‑10μl；流速：1.5‑2.5ml/min；检测波长为254nm；通过以下公式计算得到待测食品中生物胺的含量为：（质量浓度*V）/m。...

【技术特征摘要】
1.一种超高效合相色谱法测定食品中生物胺含量的方法，其
特征在于，包括以下步骤：
利用HClO4溶液对质量为m的待测食品进行生物胺的提取处
理，得到体积为V的上清液；在所述上清液中加入等体积的正己烷
溶液进行萃取，重复1-2次，弃去上层有机相部分，得到净化后的
提取液；
将所述净化后的提取液进行柱前衍生化，得到衍生化的提取液；
采用超高效合相色谱仪检测所述衍生化的提取液中生物胺的含
量，得到提取液中所含生物胺的质量浓度；
所述超高效合相色谱仪的检测条件为：
色谱柱的直径为3.0mm、柱长为100mm、填料粒径为1.8μm，
填料为高强度硅胶颗粒；流动相为超临界二氧化碳与正己烷/异丙醇
/氨水溶液的混合体系，正己烷：异丙醇：氨水的体积比为
65-75:25-35:0.10-0.20；采用梯度洗脱，其中，超临界二氧化碳在不
同时间段的体积百分比为：0-0.2min为96%-100%，0.2-5.0min为
68%-72%，5.0-7.2min为96%-100%；分析时间：6.5-8.5min；柱温：
40-60℃；进样量：0.5-10μl；流速：1.5-2.5ml/min；检测波长为254
nm；
通过以下公式计算得到待测食品中生物胺的含量为：（质量浓度
*V）/m。
2.根据权利要求1所述的超高效合相色谱法测定食品中生物
胺含量的方法，其特征在于，所述生物胺包括精胺、亚精胺、腐胺、
尸胺、色胺、苯乙胺、组胺和酪胺中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的超高效合相色谱法测定食品中生物
胺含量的方法，其特征在于，所述提取处理具体为：...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚霄，齐宁利，陈珂，林丽静，李积华，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44