一种耐高温、耐酸接合酵母菌株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及酿酒微生物技术领域，具体涉及一种耐高温、耐酸接合酵母菌株及其应用。本发明专利技术接合酵母（Zygosaccharomyces sp）菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14070。本发明专利技术接合酵母新菌株的同时具有耐高温、高酸的能力，耐受最高温度为58℃，耐受最低pH值为2.2，并能在环境温度为48℃，pH为2.2的条件下正常发酵，产乙醇量为2.59%，可维持夏季正常生产，可减少污染生酸，具有广阔的应用前景和极大的应用价值。

High temperature resistant acid resisting yeast strain and application thereof

The invention relates to the technical field of wine making microorganisms, in particular to a high temperature resistant acid resisting yeast strain and an application thereof. The present invention Zygosaccharomyces (Zygosaccharomyces SP) strains preserved in general microbial culture collection center China Management Committee for the preservation of CGMCC No.14070. At the same time, the invention has the ability to engage in new strains of yeast with high acid tolerance, high temperature, the maximum temperature of 58 degrees, the lowest tolerance value of pH is 2.2, and when the environment temperature is 48 DEG C, pH 2.2 for normal fermentation conditions, ethanol production capacity of 2.59%, summer can maintain normal production, can reduce pollution acid, has a wide application prospect and great value.

【技术实现步骤摘要】
一种耐高温、耐酸接合酵母菌株及其应用
本专利技术涉及酿酒微生物
，具体涉及一种耐高温、耐酸接合酵母菌株及其应用。
技术介绍
乙醇是酿造酒中最重要也是最主要的成分之一，中国白酒中乙醇含量高达40％～55％(v/v)；黄酒中为14％～20％；啤酒中为2％～5％。酵母是产生乙醇的主要微生物，也是酿造酒工业中不可缺少的微生物。白酒不同产区特定的气候环境是影响白酒酿造微生物群系及其代谢的关键因素。微生物群系是贯穿影响白酒酿造“一曲、二泥、三发酵”三方面的主体因素，而特定多样的自然环境又影响了微生物群系的构架、代谢及其风味物质的形成。所以，气候环境是影响白酒品质的关键因素之一。尤其是在夏季，由于夏季气温高和现有设备条件的限制，入窖温度无法控制，有害微生物迅速繁殖，因而升温过猛，酸度大幅度上升，酵母发酵力低下，导致产酒率低、酒质差等问题。因此现有酿酒工艺中，夏季气温达到32℃以上，则入池温度达可到27-30℃，顶温最高可达35℃，这时生产的酒水味道苦，出酒率下降，酒醅酸度高，下次发酵就会掉排，就只能停产。而现有的降温控酸的方法均治标不治本，无法达到理想的效果，且会增加生产成本，因此，寻找一种能够耐高温、耐酸的酿酒微生物，是亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种能够耐高温、耐酸的白酒发酵接合酵母。本专利技术一种耐高温、耐酸接合酵母菌株，是由四川剑南春集团有限责任公司的酒曲中分离得到的接合酵母新菌株，该接合酵母(Zygosaccharomycessp)菌株已于2017年04月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101)，保藏号为CGMCCNo.14070。上述一种耐高温、耐酸接合酵母菌株，所述菌株的DNA序列如SEQIDNO：1所示。上述耐高温、耐酸接合酵母菌株，该菌株的细胞学特征为：菌体为圆形；菌落呈奶白色，不透明，表面湿润光滑，边缘整齐不扩散。上述耐高温、耐酸接合酵母菌株，该菌株生理生化特征为：能发酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、蜜二糖五种糖；不能利用硝酸钾和硫酸铵氮源；不能代谢产生类淀粉化合物；具有产酯功能；不能分泌脲酶，不能分解环境中的尿素。上述耐高温、耐酸接合酵母菌株，所述菌株耐受最高温度为58℃，耐受最低pH值为2.2，并能在环境温度为48℃，pH为2.2的条件下正常发酵，产乙醇量为2.59％。本专利技术还提供一种酒曲，所述酒曲含有上述耐高温、耐酸接合酵母菌株。上述耐高温、耐酸接合酵母菌株在夏季酿酒生产中的应用。进一步的，上述耐高温、耐酸接合酵母菌株在夏季酿酒生产中的应用，是指在夏季高温、高酸环境下酿造白酒生产中的应用。上述酒曲在夏季酿酒生产中的应用。进一步的，上述酒曲在夏季酿酒生产中的应用，是指在夏季高温、高酸环境下酿造白酒生产中的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术接合酵母新菌株的同时具有耐高温、高酸的能力，耐受最高温度为58℃，耐受最低pH值为2.2，并能在环境温度为48℃，pH为2.2的条件下正常发酵，产乙醇量为2.59％，是一株能在高温、高酸环境下产乙醇的新菌株，本专利技术为解决夏季白酒生产中因环境温度高、窖池酸度高、酵母发酵力低下而导致产酒率低、酒质差的问题提供了一种新的选择，其可维持夏季正常生产，可减少污染生酸，具有广阔的应用前景和极大的应用价值。附图说明图1为本专利技术接合酵母(Zygosaccharomycessp)菌株形态图。具体实施方式下面结合具体实施例进一步详细描述本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不局限于以下所述。实施例1菌株筛选1、菌株的初筛材料：四川剑南春(集团)有限责任公司使用的酒曲培养基：麦芽汁培养基：取大麦芽一定量，粉碎，加4倍于麦芽量的水，在55～60℃水浴中保温糖化，不断搅拌，经3～4h后，至糖化液与碘液反应不显蓝色为止。煮沸后过滤，将滤液稀释至6°Bé，备用。麦芽汁琼脂培养基：将麦芽汁培养基加入2％琼脂，于115℃灭菌20min，制成麦芽汁琼脂培养基。YPD：葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母膏1％，蒸馏水配制，自然pH，121℃高压灭菌20min。YEPD：葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母膏1％，琼脂2％，蒸馏水配制，自然pH，121℃高压灭菌20min。试验方法：称取一定量发酵了24h的酒曲，置于装有150mL麦芽汁培养基的三角瓶中，28℃，200rpm富集培养24h。将培养液10倍稀释至10-6，取10-6的稀释液1mL，麦芽汁琼脂培养基倾注平板，28℃培养24h，待菌落长出后，挑取菌落形态不一的疑似酵母单菌落于YEPD培养基中，编号并划线纯化，重复纯化2～3次，直至平板上的菌落都为同一形态。挑去单一菌落制成水浸片，于电子显微镜下观察菌体细胞形态，酒曲酵母分离纯化完成。共分离纯化出四株不同形态的酵母菌，编号为1#、2#、3#、4#。2、耐高温酵母的筛选(1)用接种环分别将1#、2#、3#、4#四株酵母按相同的接种量接种到装有100mL麦芽汁培养基的250mL三角瓶中，置于摇床，28℃，200rpm培养过夜，进行活化。(3)对活化后的菌液进行镜检确认无污染后，将1#、2#、3#、4#的菌液用无菌水稀释10倍，分别取200μL稀释液接种到2mL的YPD培养基中，接种后四株菌分别在55℃、58℃的水浴锅中培养5h。(4)用无菌水将高温培养过的酵母进行梯度稀释，分别取100μL原液、10-1、10-2、10-3稀释液，涂布于YEPD平板，28℃培养1～2d。待单菌落长出后计数。结果如表1所示。表1耐高温酵母筛选实验结果注：表中“多”表示“多不可计”。由表1可知，1#、2#、3#菌株均能耐受的最高温度为58℃，且在此高温条件下长势良好，致死温度为59℃。4#菌株能耐受的最高温度低于55℃，其耐高温能力明显低于1#、2#、3#。因此，选择1#、2#、3#菌株进行后续试验。3、耐酸酵母的筛选(1)用乳酸调节YPD培养基的酸度，获得pH分别2.0、2.1、2.2、2.6、3.3、3.5的YPD培养基，将经高温初筛后的1#、2#、3#菌株进行活化后，按相同接种量分别接种于上述YED培养基中，于28℃培养2～3天。(2)将培养的菌液按10倍梯度稀释到10-4，取稀释度为10-2、10-4、及原液各100μL的稀释液，分别涂布于YEPD平板上，28℃培养2～3d，待菌落长出后计数，筛选耐酸能力最强的菌株。结果如表2所示。表2耐酸、耐高温酵母筛选实验结果注：表中“多”表示“多不可计”。由表2可知，1#菌株耐酸能力最强，其次是2#菌株，均可耐受pH为2.2的酸度，但1#菌株的耐受能力明显高于2#；最后是3#菌株，可耐受pH为2.6的酸度，且在此酸度条件下其长势较好，耐受性较强。其中1#、2#的致死pH为2.1。因此，根据耐高温和耐酸实验选育出的1#、2#菌株为耐酸、耐高温能力强的菌株。4、目标菌株产乙醇能力测定4.1目标菌株正常发酵最低pH用乳酸调节麦芽汁培养基的酸度，获得pH分别2.2、2.4、2.5、2.6、2.8、3.5的麦芽汁培养基，分装于250ml三角瓶中，每个瓶子装100ml，115℃灭菌20min。将经高温、高酸初筛后的1#、2#菌株进行活化后，按相同的的接种量分别接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐高温、耐酸接合酵母菌株，其特征在于，所述接合酵母（Zygosaccharomyces sp）菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.14070。

【技术特征摘要】
1.一种耐高温、耐酸接合酵母菌株，其特征在于，所述接合酵母（Zygosaccharomycessp）菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.14070。2.根据权利要求1所述的一种耐高温、耐酸接合酵母菌株，其特征在于，所述菌株的DNA序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1或2所述的一种耐高温、耐酸接合酵母菌株，其特征在于，所述菌株的菌体为圆形；菌落呈奶白色，不透明，表面湿润光滑，边缘整齐不扩散。4.根据权利要求1或2所述的一种耐高温、耐酸接合酵母菌株，其特征在于，所述菌株能发酵葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、蜜二糖五种糖；不能利用硝酸钾和硫酸铵氮源；不能代谢产生...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐姿静，唐清兰，张奶英，刘孟华，周利，樊科权，徐占成，
申请(专利权)人：四川剑南春集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川,51