一种鉴定长臂猿性别的PCR引物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种鉴定长臂猿性别的PCR引物、试剂盒及方法。本发明专利技术的引物对SRY233‑F1和SRY233‑R1对长臂猿性别鉴定具有很好的检测效果，检测效率高，灵敏度高，特异性强，较传统使用SRY1引物的鉴定方法更为特异和灵敏，是传统方法灵敏性的10倍，能对幼龄长臂猿快速且准确地进行性别鉴定。本发明专利技术方法对样品的采集简易，样品采集过程对长臂猿的损伤性小，只需采集长臂猿的血液便可进行实验，简便快速。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定长臂猿性别的PCR引物、试剂盒及方法
本专利技术属于生物检测鉴定
，具体涉及一种鉴定长臂猿性别的PCR引物、试剂盒及方法，该方法教传统SRY1作为引物进行性别鉴定方法具有特异性强、灵敏度高的优势。
技术介绍
长臂猿(Hylobatidae)是一类分布于东南亚地区的小型猿类，与黑猩猩、猩猩和大猩猩同属于类人猿(Ape)。通常营一夫一妻制家庭生活，3至5年繁殖一次，每胎1子，8岁左右性成熟。人工饲养的长臂猿会作为科学研究实验动物或者观赏动物，分别被引入到动物实验室或动物园。长臂猿在性成熟之前，性征表现不明显，通过外观难以鉴定其性别。在长臂猿的引种过程中，一般不直接引入成年长臂猿，因为生活环境与气候的改变，容易引发长臂猿的生理或心理健康疾病。故引种时，一般会选择幼年的长臂猿。为了长臂猿繁殖和育种的需要，在引种时会同时引入雄性长臂猿和雌性长臂猿。因此，对性发育尚未成熟的幼年长臂猿进行性别鉴定，是具有必要性的。长臂猿基因组与人类基因组相近。在药物研发过程中，以长臂猿为对象对药物效应动力学及药物代谢动力学的研究具有重要意义。对幼年长臂猿进行性别鉴定，可根据性别进行不同的针对性试验，有利于提高试验的效率和指向性。而现有鉴定幼年长臂猿的方法，在灵敏度、特异性方面均较差，所以建立一种特异性和灵敏度较高，且成本较低的快速鉴定长臂猿性别的方法具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鉴定长臂猿性别的PCR引物。本专利技术的另一目的在于提供一种鉴定长臂猿性别的试剂盒。本专利技术的再一目的在于提供一种鉴定长臂猿性别的方法。本专利技术所采取的技术方案是：一种鉴定长臂猿性别的PCR引物，其核苷酸序列如下所示：SRY233-F1：5’-GGGTCGCTTCACTCTATC-3’(SEQIDNO：1)，SRY233-R1：5’-GCTCTGGCACCTTTCAATT-3’(SEQIDNO：2)。一种鉴定长臂猿性别的试剂盒，该试剂盒含有上述所述的引物。进一步的，上试剂盒还含有内参引物，其核苷酸序列如下所示：β-actin-F：5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’(SEQIDNO：3)，β-actin-R：5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’(SEQIDNO：4)。一种鉴定长臂猿性别的方法，包括以下步骤：1)长臂猿基因组DNA的提取；2)以基因组DNA为模板，以上述所述SRY1-F2和SRY1-R2为引物、β-actin-F和β-actin-R为内参，进行PCR扩增；3)凝胶电泳检测PCR扩增效果，分析长臂猿的性别。进一步的，步骤2)中，所述的PCR扩增的体系为：进一步的，步骤2)中，所述的PCR扩增的反应程序为：98℃预变性5min，98℃变性10s，50℃退火15s，72℃延伸30s，72℃终延伸10min，共32个循环。本专利技术的有益效果是：1)本专利技术提供的方法可对长臂猿性别进行快速鉴定，鉴定结果不受年龄条件的限制。该方法为雌雄性征表现差异极小的幼龄长臂猿性别鉴定提供了一种技术手段，较传统使用SRY1引物扩增677bp片段的方法更为特异和灵敏，也为动物园及实验室的引种程序进行优化，避免了引种性别错误带来的饲养成本浪费。2)本专利技术的引物对SRY233-F1和SRY233-R1对长臂猿性别鉴定具有很好的检测效果，PCR扩增效率高，检测灵敏度高，特异性强。本专利技术较传统SRY1为引物的PCR反应扩增的灵敏性高10倍，能对幼龄长臂猿快速且准确地进行性别鉴定。3)本专利技术方法对样品的采集简易，样品采集过程对长臂猿的损伤性小，只需采集长臂猿的血液便可进行实验，简便快速。附图说明图1为现有传统引物SRY1用于PCR扩增鉴定长臂猿性别的结果，标号219042和大的长臂猿为雌性，标号218663和小的长臂猿为雄性；图2为SRY233和SRY1为引物的PCR扩增结果，图中Marker为DL2000(2000bp、1000bp、750bp、500bp和250bp)；泳道1和2为本专利技术引物SRY233(SRY233-F1和SRY233-R1)扩增结果；泳道3和4为现有引物SRY1(SRY1-F2和SRY1-R2)的扩增结果；图3是以SRY1为引物、质粒pVAX-SRY1为模板的PCR扩增结果；M为DL2000(2000bp、1000bp、750bp、500bp和250bp)；1为104copies/mL的pVAX-SRY1质粒，2为103copies/mLpVAX-SRY1质粒，3为102copies/mLpVAX-SRY1质粒，4为101copies/mLpVAX-SRY1质粒，5为100copies/mLpVAX-SRY1质粒；图4是以SRY233为引物、质粒pVAX-SRY233为模板的PCR扩增结果；M为DL2000(2000bp、1000bp、750bp、500bp和250bp)；1为104copies/mL(copies/mL？请提供具体的单位)的pVAX-SRY233质粒，2为103copies/mLpVAX-SRY233质粒，3为102copies/mL的pVAX-SRY233质粒，4为101copies/mLpVAX-SRY233质粒，5为100copies/mLpVAX-SRY233质粒。具体实施方式实施例1一种鉴定长臂猿性别的PCR引物本专利技术经过对所设计的大量引物进行筛选后，发现引物对SRY233-F1和SRY233-R1区分长臂猿性别的效果最好，其碱基序列如下所示。SRY233-F1：5’-GGGTCGCTTCACTCTATC-3’(SEQIDNO：1)，SRY233-R1：5’-GCTCTGGCACCTTTCAATT-3’(SEQIDNO：2)。实施例2一种鉴定长臂猿性别的方法1)提取长臂猿基因组DNA；2)以基因组DNA为模板，以SRY233-F1和SRY233-R1为引物、β-actin-F和β-actin-R为内参，进行PCR扩增；其中，β-actin-F和β-actin-R的序列为：β-actin-F：5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’(SEQIDNO：3)，β-actin-R：5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’(SEQIDNO：4)。其中，PCR扩增体系为：PCR反应程序为：98℃，5min；98℃，10sec；50℃、15sec，72℃、30sec(32个循环)；72℃、10min。3)用凝胶电泳方法检测PCR扩增效果，并对检测结果进行分析，不同性别有明显的条带区别(见图2)。对比例：本对比例除了使用的引物为现有引物SRY1-F2和SRY1-R2，其他操作方法均与实施例2类似，具体操作步骤如下：1)提取长臂猿基因组DNA；2)以基因组DNA为模板，以现有引物SRY1-F2和SRY1-R2为引物、β-actin-F和β-actin-R为内参，进行PCR扩增；其中，SRY1-F2和SRY1-R2的序列为：SRY1-F2：5’-CGAACTCTGGCACCTTTCAA-3’(SEQIDNO：5)，SRY1-R2：5’-GTTACCCGATTGTCCTACAGCT-3’(SEQIDNO：6)。其中，PCR扩增体系为：PCR反应程本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定长臂猿性别的PCR引物，其核苷酸序列如下所示：SRY233‑F1：5’‑GGGTCGCTTCACTCTATC‑3’(SEQ ID NO：1)，SRY233‑R1：5’‑GCTCTGGCACCTTTCAATT‑3’(SEQ ID NO：2)。

【技术特征摘要】
1.一种鉴定长臂猿性别的PCR引物，其核苷酸序列如下所示：SRY233-F1：5’-GGGTCGCTTCACTCTATC-3’(SEQIDNO：1)，SRY233-R1：5’-GCTCTGGCACCTTTCAATT-3’(SEQIDNO：2)。2.一种鉴定长臂猿性别的试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有权利要求1所述的引物。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒还含有内参引物，其核苷酸序列如下所示：β-actin-F：5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’(SEQIDNO：3)，β-actin-R：5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’(SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄勉，植广林，袁子国，陈绚姣，左珂菁，王俊杰，黄海英，吴其锐，梁玉珍，陈谭子芃，
申请(专利权)人：广州动物园，
类型：发明
国别省市：广东,44