一种从银杏叶中高效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法技术

一种从银杏叶中效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法，取银杏叶清洁干净，粉碎，银杏叶加水混合装入发酵罐，在121℃杀菌，随后进行蒸汽爆破；而后加入黑曲霉发酵；而后加入混合酶液，加入量为反应底物的2％‑5％，在25‑30℃条件下反应时间为3‑6小时；随后加入β‑葡萄糖苷酶，加入量为反应底物的1％，反应条件为42℃条件下pH为4.3，反应时间为5小时；随后加入蛋白酶1％，25‑30℃条件下，反应时间为3‑4小时；升温95℃ 10min，随后加入提取剂进行黄酮的提取，12000g离心20min，取上清浓缩后，采用乙醇浸提提取，收得乙醇洗脱液，浓缩，采用冷冻干燥，得到产品。

Method for efficiently extracting flavone from Ginkgo leaves and converting into aglycone flavone

An efficiency of extraction of Flavonoids from leaves of Ginkgo biloba and into aglycone flavonoids from ginkgo leaf type, clean, crushed and mixed with water in Ginkgo biloba fermentation tank, at 121 DEG C for sterilization, followed by steam explosion; then adding Aspergillus niger fermentation; and then adding the mixed enzyme liquid, adding substrate 2% in 5%, 25 under 30 DEG C reaction time is 3 6 hours; then adding beta glucosidase, adding substrate 1%, reaction conditions of 42 DEG C under the condition of pH is 4.3, the reaction time was 5 hours; then adding protease 1%, 25 under 30 DEG C, reaction time is 3 hours 4; temperature 95 DEG C 10min extraction, extraction of flavonoids were then added agent, 12000g centrifugal 20min, Torikami Kiyo concentrated after extraction by ethanol yield ethanol eluent, concentrated by freeze drying, Get product.

【技术实现步骤摘要】
一种从银杏叶中高效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法
本专利技术涉及银杏黄酮提取
，尤其涉及一种从银杏叶中高效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法。
技术介绍
银杏黄酮即银杏叶提取物，它能够增加脑血管流量，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，扩张冠状动脉，防止心绞痛及心肌梗塞，防止血栓形成，提高机体免疫能力。对冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压病人均十分有益。但是，在银杏叶提取物中经常会掺杂银杏酸。银杏酸具有潜在的致敏和致突变作用、和强烈的细胞毒性,可引起严重的过敏反应、基因突变、神经损伤,导致恶心和胃灼热、过敏性休克、过敏性紫癜、剥脱性皮炎、消化道黏膜过敏、痉挛和神经麻痹等不良反应。因此，在提取方法中去除这些杂质是必须的。银杏叶提取物的生产工艺有很多，国外多采用有机溶剂法，有代表性的工艺是德国Schwabe公司的一系列专利DE2117419、DE1767098、DE3940092；以及意大利Indena公司的专利工艺EP0360556，这些工艺的共同特点是生产过程中使用大量的有机溶剂，如丙酮、乙醇、四氯化碳、正己烷、甲乙酮、正丁醇等，工艺的优点是产品质量好且稳定，缺点是生产成本极高，生产工艺安全性差、对环境影响大。国内外目前都主要以银杏叶为原料提取银杏黄酮。分离纯化银杏黄酮的方法很多，包括溶剂浸提法、超临界法、超声波法、微波辅助提法、微波法、高速逆流法、大孔树脂吸附法法、聚酰胺柱层析法、和酶法等，其中最成熟和最常用的提取工艺是溶剂浸提法。例如CN102805755A涉及一种从从银杏叶中提取高品质银杏黄酮的制备方法。用去离子水从银杏叶中提取粗提液，经过滤后醇沉除杂、澄清剂除杂、富集银杏黄酮和内酯，利用极性、弱极性的大孔树脂进行初分离。树脂脱除银杏酸最终银杏提取物产品。该专利技术的技术优势在于：a)联合使用不同性能的大孔树脂来富集银杏黄酮和内酯、脱出银杏酸，使产品品质明显提高，保证了产品。b)简化生产工艺，缩短生产周期，使生产成本有所降低。c)使用了无毒无害的有机溶剂及天然澄清剂，大大降低了产品中有毒有害物质的残留量，提高了产品的品质。但是在分离过程中需要醇沉除杂、澄清剂除杂步骤复杂。CN101463051A中公开了一种用碳酸钙提取银杏黄酮的制备工艺，包括：(1)称取原料银杏叶，将其粉碎；加水为银杏叶重量的6～8倍，同时加入银杏叶重量0.5～1.5％的碳酸钙，煮沸1～1.5小时后过滤，得一次水提液，即为一次提取；同样方法，进行二次提取，得二次水提液；合并一次、二次水提液，即得合并液；(2)将合并液在60～70℃温度下真空浓缩至合并液体积的0.5～0.6倍，加入乙醇，至乙醇度为40～50％，充分搅拌，静置3～4小时后过滤；加水稀释过滤液，使得乙醇度为15～20％，用稀硫酸调至pH值为3.0，得稀释滤液，将稀释滤液用DM131树脂柱吸附；(3)将乙醇度为20％的乙醇水溶液用稀硫酸调至pH值为3.0，洗脱树脂柱杂质，再用水冲洗至中性；(4)最后，用乙醇度为70％的乙醇水溶液洗脱有效成分，然后将洗脱液在60～70℃温度下真空浓缩、干燥，即得银杏黄酮提取物。该方法需要大量使用酸液，同时产量也不是很高，而且工艺复杂不利于工业化规模化生产。CN1166675A中公开了一种生产高活性银杏叶提取物的工艺，其特征在于所述的工艺包括以下步骤：(1)在待处理的银杏叶中加入萃取剂亚硫酸钠或亚硫酸氢钠，添加量按w/w比例为0.001-0.5，并补充水至100；(2)按w/w，将干净的银杏叶按原料与萃取剂之比为1∶5-20，投料浸提萃取，浸提温度30-100℃，处理30分钟-20小时，浸提过程中间歇搅拌原料，控制降温速度1-10℃/小时，然后留取料液，再加入5-20倍于银杏叶的萃取剂进行第二次提取，合并两次料液；(3)将步骤(2)得到的料液过滤，去除200目以下的杂质，料液冷却至30℃以下；(4)将步骤(3)得到的料液流经树脂吸附柱精制纯化，用水洗涤去除杂质后，再用30％-95％的低级醇冲洗树脂柱，得到洗脱液；(5)将步骤(4)所述的洗脱液在温度50℃以下真空浓缩，回收溶剂，得到浓缩液；(6)将步骤(5)得到的浓缩液干燥，和(7)将步骤(6)得到的产品采用反相高效液相色谱法定量分析银杏黄酮、萜内酯、原花青素和银杏酚酸。该方法同样产量不高，在制备工艺上也较为复杂，有巨大的改进空间。另外，在现有技术中提取剂通常具有较大的毒性，对人的身体也有较大危害，在生产过程中也有潜在的危险。最后，黄酮类化合物在动物体内的代谢途径不同，仅有甙元型黄酮可以直接被吸收进入动物血液，而大部分糖甙型的黄酮化合物在人体内不能通过小肠壁进入到血液中，而仅有小部分黄酮在结肠微生物的作用下，水解成甙元才能进入血液。因此，黄酮糖甙在动物体内的生物利用率远远低于甙元型黄酮。因此，改善黄酮的构型，提高其在血液中的吸收率是提高黄酮类产物生物利用率的重要途径。目前，对黄酮配糖体的构型转化主要有化学法和生物法，国内外许多研究者采用化学法水解黄酮糖苷，还有黄酮的醚化、酯化、酰基化等化学衍生化反应，也可以改变黄酮的特性。但这些方法在反应过程中往往屏蔽了黄酮化合物的主要官能团——酚羟基，对抗氧化产生不良影响。同时，这些方法副产品较多，易造成环境污染。因此，为了使得黄酮在人体内吸收的效果更好，开发一种高效的转化黄酮为甙元型黄酮也是当务之急。
技术实现思路
本专利技术提供了一种从银杏叶中效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法，主要包括粉碎，灭菌，蒸汽爆破，酶解，提取，乙醇处理，浓缩，干燥等这几个步骤。具体的，本专利技术提供了一种从银杏叶中效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法，取银杏叶清洁干净，粉碎成为20-100目，银杏叶加水混合，加水量40％-60％；混合物装入发酵罐，在121℃杀菌，随后进行蒸汽爆破；接种黑曲霉，108个/mL种子液接种量为100mL/100kg，发酵条件为30℃3d；而后加入混合酶液，加入量为反应底物的2％-5％，在25-30℃条件下反应时间为3-6小时；随后加入β-葡萄糖苷酶，加入量为反应底物的1％，反应条件为42℃条件下pH为4.3，反应时间为5小时；随后加入蛋白酶1％，25-30℃条件下，反应时间为3-4小时；升温95℃10min，随后加入提取剂进行黄酮的提取，12000g离心20min，取上清浓缩后，采用乙醇浸提提取，收得乙醇洗脱液，浓缩，采用冷冻干燥，得到产品。本专利技术另外一方面，所述蒸汽爆破采用饱和水蒸气为工作介质，压力为0.73MPa，保压时间为70秒。本专利技术另外一方面，所述混合酶液为纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶这三种酶液的组合；具体的组成比例为纤维素酶：半纤维素酶：果胶酶＝2:1:5。本专利技术另外一方面，所述的提取剂为4％柠檬酸钠，pH为8.0。提取条件为按照银杏叶重量与萃取剂之比为1∶2-4，投料浸提提取，提取温度30-100℃，处理1-5小时，浸提过程中间歇10min搅拌原料即可。本专利技术另外一方面，所述的生产原料可以是银杏鲜叶或经干燥的银杏叶，所述的叶不需要经过粉碎。本专利技术另外一方面，将乙醇洗脱液在真空条件下浓缩。本专利技术另外一方面，所述黑曲霉为保藏号CCTCCM2012515。本专利技术另外一方面，所述的生产工艺采用冷冻干燥或喷雾干燥或真空干燥将浓缩液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从银杏叶中效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法，主要包括粉碎，灭菌，蒸汽爆破，发酵，酶解，提取，乙醇处理，浓缩，干燥等步骤。

【技术特征摘要】
1.一种从银杏叶中效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法，主要包括粉碎，灭菌，蒸汽爆破，发酵，酶解，提取，乙醇处理，浓缩，干燥等步骤。2.一种从银杏叶中效率提取黄酮并转化为甙元型黄酮的方法，取银杏叶清洁干净，粉碎成为20-100目，银杏叶加水混合，加水量40％-60％；混合物装入发酵罐，在121℃杀菌，随后进行蒸汽爆破；接种黑曲霉，108个/mL种子液接种量为100mL/100kg，发酵条件为30℃3d；而后加入混合酶液，加入量为反应底物的2％-5％，在25-30℃条件下反应时间为3-6小时，随后加入β-葡萄糖苷酶，加入量为反应底物的1％，反应条件为42℃条件下pH为4.3，反应时间为5小时；随后加入蛋白酶1％，25-30℃条件下，反应时间为3-4小时；升温95℃，10min，随后加入提取剂进行黄酮的提取，12000g离心20min，取上清浓缩后，采用乙醇浸提提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：何福林，袁志辉，陈小明，蒋琼凤，赵昌会，张瑞，刘伟，唐静，杨芳，
申请(专利权)人：湖南科技学院，
类型：发明
国别省市：湖南,43