乳糖酶溶液及使用其的乳制品制造技术

本发明专利技术提供一种热稳定性优异的乳糖酶溶液。乳糖酶溶液中，基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约120kDa的乳糖酶级分的比例为20％以上。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】乳糖酶溶液及使用其的乳制品
本专利技术涉及乳糖酶溶液及使用其的乳、乳制品等。
技术介绍
乳糖(lactose)不耐受症是指：由于先天性地无法顺利分解乳糖，因此会因乳制品等食品中的乳糖而呈现腹痛、腹泻等诸多症状的状态。乳糖为由半乳糖及葡萄糖构成的二糖。为了应对乳糖不耐受症，在食品制造业中进行的是：利用酶乳糖酶使牛奶等中所含的乳糖预先分解为半乳糖和葡萄糖。为了将牛奶等的乳糖分解而使用的乳糖酶溶液一直以来通过以下方式来制造，即，培养乳糖酶产生微生物，从细胞内提取乳糖酶，除去源自培养物的夹杂物而进行纯化，然后添加稳定剂，进行过滤灭菌。专利文献1(日本特公昭60-18394号公报)中公开了由Kluyveromyceslactis的某菌株的培养物制造乳糖酶的制造法的专利技术。根据该方法，在使酵母菌体自消化后，将所得的粗酶溶液通入DEAE纤维素柱，并利用食盐浓度梯度进行溶出时，得到2个活性种类(乳糖酶A及乳糖酶B)。并且，公开了这两个活性种类除了pH稳定性略有不同以外，包括温度稳定性在内的各种性质几乎没有差异，酶制剂可由它们的混合物构成。另外，根据Kluyveromyceslactis的乳糖酶的基因解析，推断出该乳糖酶为包含1025氨基酸的多肽、且分子量为117，618(非专利文献1)。进而，专利文献1记载的乳糖酶的最佳温度为40～50℃，并且记载了在pH7.0下在50℃、10分钟时失活45％，在55℃、10分钟时失活100％。但是，并未记载使用该酶使实际上乳中所含的乳糖分解的情况。因此，对于在原料乳中添加乳糖酶时的活性降低、尤其是在乳中施加40℃以上的热负荷时的酶失活的问题并无任何记载。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特公昭60-18394号公报专利文献2：日本特表2004-534527号公报专利文献3：日本特表2009-517061号公报非专利文献非专利文献1：Pochetal.，Gene1992Sep1；118(1)：55-63
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术的目的在于提供热稳定性优异的乳糖酶溶液。用于解决课题的手段本专利技术人等发现在乳糖酶中通过提高在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中形成约120kDa的条带的级分的比例，从而使乳糖酶具有高热稳定性，从而完成了本专利技术。因此，根据本专利技术，提供以下技术方案。[1]一种乳糖酶溶液，其特征在于，基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约120kDa的乳糖酶级分的比例为20％以上；[2]根据[1]所述的乳糖酶溶液，其特征在于，上述120kDa的乳糖酶级分的比例与基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约80kDa的乳糖酶级分的比例之和为30％以上；[3]根据[1]所述的乳糖酶溶液，其特征在于，基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约50kDa的乳糖酶级分的比例为70％以下；[4]根据[1]～[3]中任一项所述的乳糖酶溶液，其特征在于，上述约120kDa的乳糖酶级分的比例与上述约80kDa的乳糖酶级分的比例之和除以基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约50kDa的乳糖酶级分的比例所得的值为0.5以上；[5]根据[1]～[4]中任一项所述的乳糖酶溶液，其特征在于，其用于制造乳制品；[6]一种乳制品，其含有[1]～[5]中任一项所述的乳糖酶溶液；[7]一种原料乳的处理方法，其特征在于，将[1]～[5]中任一项所述的乳糖酶溶液添加到原料乳中，并使该原料乳中所含的乳糖在1～60℃下分解；[8]一种乳糖酶溶液的制造方法，其特征在于，包括：培养工序，对微生物进行培养；回收工序，从利用上述培养工序得到的培养物中回收乳糖酶；以及纯化工序，对利用上述回收工序所回收的乳糖酶进行纯化，其中，上述纯化工序包括1次或多次进行盐析处理及脱盐处理的工序；[9]根据[8]所述的乳糖酶溶液的制造方法，其特征在于，上述盐析处理包括：饱和工序，使盐析剂在上述回收的乳糖酶中10～90％饱和；放置工序，在上述饱和工序后将乳糖酶在4～40℃放置1～80小时；[10]根据[8]或[9]所述的乳糖酶溶液的制造方法，其特征在于，上述盐析处理在pH4～9下进行。专利技术效果根据本专利技术，可提供即使在添加到原料乳中并施加40℃以上的热负荷的情况下乳糖分解活性也不易降低的乳糖酶溶液。附图说明图1为表示各种乳糖酶溶液的SDS-PAGE的结果的图。泳道1＝实施例1-1、泳道2＝实施例1-2、泳道3＝比较例1-1、泳道4＝比较例1-2、泳道5＝比较例2、泳道6＝比较例3、泳道M＝分子量标准品。予以说明，泳道1及2、泳道3及4表示基于不同的Lot的结果。图2为表示在原料乳中添加乳糖酶溶液而在43℃、2小时的乳糖分解反应后的SDS-PAGE(面板A)及Western印迹(面板B)的结果的图。在各面板中，泳道1＝实施例1-1、泳道2＝实施例1-2、泳道3＝比较例1-1、泳道4＝比较例1-2、泳道5＝比较例2、泳道6＝比较例3、泳道M＝分子量标准品。图3A为表示在原料乳中添加乳糖酶溶液而使其在37、40、43、46及49℃反应时的乳糖量的经时变化的图。关于图中的图标，□表示实施例1的结果，○表示比较例1的结果，▲表示比较例2的结果，△表示比较例3的结果。图3B为表示在原料乳中添加乳糖酶溶液而使其在37、40、43、46及49℃反应时的乳糖分解率的经时变化的图。关于图中的图标，□表示实施例1的结果，○表示比较例1的结果，▲表示比较例2的结果，△表示比较例3的结果。图4为表示120kDa级分的比例不同的乳糖酶溶液的SDS-PAGE的结果的图。泳道1＝实施例1、泳道2＝实施例2、泳道3＝实施例3、泳道4＝实施例4、泳道5＝实施例5、泳道6＝比较例1、泳道M＝分子量标记物。图5为表示在原料乳中添加120kDa级分的比例不同的乳糖酶溶液而使其在49℃反应时的乳糖量(面板A)及乳糖分解率(面板B)的经时变化的图。关于图中的图标，□表示实施例1的结果，◇表示实施例2的结果，▲表示实施例3的结果，×表示实施例4的结果，*表示实施例5的结果，○表示比较例1的结果。具体实施方式本专利技术中所使用的乳糖酶为源自酵母(Kluyveromyces属)的乳糖酶。这些乳糖酶的绝大部分是最佳pH为pH＝6～pH＝8的所谓中性乳糖酶。作为Kluyveromyces属的乳糖酶产生酵母，可列举例如Kluyveromyceslactis、Kluyveromycesfragillis、Kluyveromycesmarxianus等。本专利技术的乳糖酶溶液理想地具有10～100,000NLU/g的乳糖酶活性。“NLU”为NeutralLactaseUnit。活性的测定方法如以下所示。利用使基质邻硝基苯基-β-吡喃半乳糖苷(ONPG)成为邻硝基苯酚及半乳糖的水解来测定。反应通过碳酸钠的添加而结束。所形成的邻硝基苯酚在碱性介质中成为黄色，吸光度的变化被用于测定酶活性(以NLU/g表示)。该步骤被公示于“美国食品化学物质规格集(FCC；FoodChemicalsCodex)第4版、1996年7月1日、第801～802页/乳糖酶(中性)(β-半乳糖苷酶)活性中。本专利技术所使用的乳糖酶溶液可以为按照以下的方法从微生物中回收并纯化后的乳糖酶溶液。本专利技术的乳糖酶溶液的制造方法经过以下的4个工序。即，(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乳糖酶溶液，其特征在于，基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约120kDa的乳糖酶级分的比例为20％以上。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.05 JP 2014-2473081.一种乳糖酶溶液，其特征在于，基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约120kDa的乳糖酶级分的比例为20％以上。2.根据权利要求1所述的乳糖酶溶液，其特征在于，所述120kDa的乳糖酶级分的比例与基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约80kDa的乳糖酶级分的比例之和为30％以上。3.根据权利要求1所述的乳糖酶溶液，其特征在于，基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约50kDa的乳糖酶级分的比例为70％以下。4.根据权利要求1～3中任一项所述的乳糖酶溶液，其特征在于，所述约120kDa的乳糖酶级分的比例与所述约80kDa的乳糖酶级分的比例之和除以基于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的分子量约50kDa的乳糖酶级分的比例所得的值为0.5以上。5.根据权利要求1～4中任一项所述的乳糖酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤智子，吉川润，堀口博文，
申请(专利权)人：合同酒精株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP