用于恶性肿瘤的RNA干扰组合物和方法技术

本发明专利技术提供用于分配治疗受试者的恶性肿瘤的活性剂的组合物。所述组合物含有以人GST‑π作为靶标的RNAi分子、以人p21作为靶标的RNAi分子、和药学上允许的担体。所述担体包含纳米粒子，所述纳米粒子由可离子化脂质、结构脂质、一种或多种脂质稳定剂、和用于降低纳米粒子的免疫原性的脂质构成。本发明专利技术还提供通过施予治疗有效量的RNAi组合物来预防或治疗恶性肿瘤的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于恶性肿瘤的RNA干扰组合物和方法
本专利技术涉及由基于核酸的分子构成的治疗剂和生物药物领域。具体而言，本专利技术涉及用于递送RNA干扰剂的组合物和方法，所述RNA干扰剂用于对恶性肿瘤的相关疾病和症状进行预防、治疗或疗效改善。序列表本申请包括以电子版形式提交的序列表ASCII文件，该文件创建于2016年1月2日，文件名为ND5123179WO_SL.txt，大小为140,959字节，其全部内容通过参考并入本说明书中。
技术介绍
KRAS基因突变可能与例如肺腺癌、粘液腺癌、胰腺导管癌、和结肠直肠癌等恶性肿瘤相关。最近的观察表明，该KRAS突变与谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)蛋白水平的升高有关。在不拘泥于任何特定理论的前提下，已经发现，当细胞中的GST-π受到阻遏时，出乎意料地，细胞周期调控蛋白p21的水平显著升高。细胞周期调控蛋白p21的功能之一在于抑制细胞凋亡。例如，p21可能具有保护细胞、使其免于被化疗剂诱导凋亡的效果(体内和体外)。例如，参见GartelandTyner,2002,MolCancerTher.,2002,1(8):639-49；AbbasandDutta,2009,NatRevCancer.,2009,9(6):400-14。p21由CDKN1A基因编码，属于CIP/KIP家族。p21可通过与细胞周期蛋白-CDK复合物结合而发挥作用，在Gl期和G2/M期抑制细胞周期的进程。例如，p21基因被肿瘤阻遏基因p53激活。当p53由于DNA损伤而被激活时，其激活p21，从而使细胞周期停滞在Gl期和G2/M期。GST-π是谷胱甘肽S-转移酶(IUBMBEC2.5.1.18)家族的6个同工酶之一，其通过催化疏水性和亲电子性的化合物与还原型谷胱甘肽缀合而参与解毒。作为多态性基因，GST-π基因(GSTPl)编码多种高活性、功能各异的GSTPl变体蛋白，这些蛋白被认为作用于异物代谢(xenobioticmetabolism)。GSTPl还可能与癌症易感性有关，并在肿瘤细胞中大量表达。例如，参见AliyaS.etal.MolCellBiochem.,2003Nov；253(1-2):319-327。在人体中，谷胱甘肽S-转移酶-π由GSTPl基因编码。例如，参见BoraPS,etal.(Oct1991)J.Biol.Chem.,266(25):16774-16777。GST-π同工酶还被发现催化GSH与某些烷基化抗癌剂的缀合，这暗示了GST-π的过量表达可能会导致肿瘤细胞的耐受性。在患有各种胃肠道恶性肿瘤(包括胃癌、食道癌、结肠癌、胰腺癌、肝细胞癌和胆管癌)的患者中，观察到GST-π的血清水平升高。80％以上患有III期或IV期胃癌的患者、甚至约50％的II期或II期患者中，GST-π的血清水平升高。例如，参见NiitsuY,etal.Cancer,1989Jan15；63(2):317-23。GST-π被发现作为用于预测口腔癌患者化疗后肿瘤复发的标志物有用。例如，参见HirataS.etal.Cancer,1992Nov15:70(10):2381-7。在人结肠直肠癌中，KRAS突变通过激活AP-1来诱导GST-π的过量表达。例如，参见Miyanishietal.,Gastroenterology,2001；121(4):865-74。GST-π的表达在各种癌细胞中升高，这可能与对于某些抗癌剂的耐受性有关。例如，参见Banetal.,CancerRes.,1996,56(15):3577-82；Nakajimaetal.,JPharmacolExpTher.,2003,306(3):861-9。已经公开了GST-π阻遏剂可诱导细胞凋亡。然而，这些组合物和技术也会导致自体吞噬，并且需要各种药剂的协同作用。例如，参见US2014/0315975Al。另外，尚未发现阻遏GST-π会使肿瘤缩小或减轻。例如，在GST-π过量表达的癌症中，虽然观察到了其他的效果，但阻遏GST-π并未影响肿瘤重量。例如，参见Hokaiwadoetal.,Carcinogenesis,2008,29(6):1134-1138。当前，急需用于治疗恶性肿瘤患者的方法和组合物，例如可抑制GST-π和p21的表达的siRNA序列、化合物和构建体。为了解决上述课题，需要用于预防或治疗恶性肿瘤的方法和组合物。并且，持续需求用于预防、治疗或减轻恶性肿瘤的RNAi分子、其他构建体和组合物。
技术实现思路
本专利技术提供涉及以人GST-π作为靶标的RNAi分子、及以人p21作为靶标的RNAi分子的组合物和方法。所述组合物还含有药学上允许的担体。本专利技术涉及用于恶性肿瘤的生物药物和治疗剂的分子和组合物。具体而言，本专利技术涉及用于提供下述纳米粒子的化合物、组合物和方法，所述纳米粒子将活性剂或药物化合物递送及分配至细胞、组织、器官和患有恶性肿瘤的受试者。本专利技术包括对有需要的受试者的恶性肿瘤的一种或多种症状进行预防、治疗或改善的方法。所述方法可包括向受试者施予有效量的以GST-π和p21作为靶标的RNAi分子的组合物。本专利技术包括以下实施方式：组合物，其含有以人GST-π作为靶标的RNAi分子、以人p21作为靶标的RNAi分子、和药学上允许的担体。上述RNAi分子可在反义链自3’端起第2～8位含有一个或多个2’-脱氧核苷酸。上述担体可包含包封RNAi分子的脂质体纳米粒子。所述脂质体纳米粒子能够包封RNAi分子，并且，在人血清中暴露1小时后，所述脂质体纳米粒子保持至少80％的包封的RNAi分子。所述脂质体纳米粒子的大小可为10～1000nm或10～150nm。组合物具有恶性肿瘤治疗活性，所述恶性肿瘤可位于任何器官或组织，包括肺、结肠、肾脏、胰腺、肝脏、骨、皮肤、或肠。脂质体纳米粒子可由可离子化脂质、结构脂质、一种或多种脂质稳定剂、和用于降低纳米粒子的免疫原性的脂质构成。可离子化脂质可选自由化合物81、化合物71、化合物57、化合物84、化合物49，化合物76、化合物78、和化合物102组成的组。本专利技术还包括用于预防、治疗或改善有需要的受试者的恶性肿瘤的一种或多种症状的方法。所述方法可包括向受试者施予有效量的上述组合物。在一些实施方式中，恶性肿瘤可能与KRAS突变相关，而上述方法还包括对受试者的肿瘤细胞进行鉴定，所述肿瘤细胞具有以下至少一者：(i)KRAS基因突变、和(ii)KRAS蛋白表达水平异常。在某些实施方式中，恶性肿瘤可过量表达GST-π。RNAi分子可降低受试者中的GST-π和p21的表达。在一些实施方式中，上述施予可使受试者中的GST-π和p21的表达降低至少5％、且持续至少5天。上述施予还可使受试者的恶性肿瘤的体积缩小至少5％、或至少10％、或至少20％、或至少>30％、或至少>40％、或至少>50％。本申请的方法可减轻恶性肿瘤的一种或多种症状，或者延迟或终止恶性肿瘤的发展。在某些实施方式中，施予可减缓受试者的恶性肿瘤细胞的生长。施予可使受试者的恶性肿瘤细胞的生长减缓至少2％、或至少5％、或至少10％、或至少15％、或至少20％。在一些实施方式中，恶性肿瘤可为肠癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、纤维肉瘤、肺腺癌、粘液腺癌、胰腺导本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物，其含有以人GST‑π作为靶标的RNAi分子、以人p21作为靶标的RNAi分子、和药学上允许的担体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.26 JP 2014-266198;2015.06.24 US 62/184,2411.组合物，其含有以人GST-π作为靶标的RNAi分子、以人p21作为靶标的RNAi分子、和药学上允许的担体。2.如权利要求1所述的组合物，其中，以GST-π作为靶标的RNAi分子均具有序列号131的反义链和序列号157的有义链。3.如权利要求1所述的组合物，其中，以p21作为靶标的RNAi分子均具有序列号341的反义链和序列号355的有义链。4.如权利要求1所述的组合物，其中，以GST-π作为靶标的RNAi分子均具有序列号156的反义链和序列号182的有义链。5.如权利要求1所述的组合物，其中，以p21作为靶标的RNAi分子均具有序列号343的反义链和序列号357的有义链。6.如权利要求1所述的组合物，其中，所述RNAi分子的双链区中的一个或多个核苷酸经过修饰或化学修饰。7.如权利要求6所述的组合物，其中，经过修饰或化学修饰的核苷酸为2’-脱氧核苷酸、2’-O-烷基取代核苷酸、2’-脱氧-2’-氟代核苷酸、硫代磷酸酯核苷酸、锁核苷酸、或它们的任何组合。8.如权利要求1所述的组合物，其中，所述RNAi分子在反义链自5’端起第2～8位含有一个或多个2’-脱氧核苷酸。9.如权利要求1所述的组合物，其中，所述RNAi分子的反义链在多个位点处具有脱氧核苷酸，所述多个位点为下述之一：自反义链5’端起第4、6、8位；自反义链5’端起第3、5、7位；自反义链5’端起第1、3、5、7位；自反义链5’端起第3～8位；或自反义链5’端起第5～8位。10.如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物以小于50pM的IC50抑制GST-πmRNA的表达，且以小于50pM的IC50抑制p21mRNA的表达。11.如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物的单次施予将GST-πmRNA的体内表达水平抑制至少25％。12.如权利要求1所述的组合物，其中，所述担体包含包封RNAi分子的脂质体纳米粒子。13.如权利要求1所述的组合物，其中，所述担体包含包封RNAi分子的脂质体纳米粒子，并且，在人血清中暴露1小时后，所述脂质体纳米粒子保持至少80％的包封的RNAi分子。14.如权利要求1所述的组合物，其中，所述担体包含大小为10～1000nm或10～150nm的脂质体纳米粒子。15.如权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物具有恶性肿瘤治疗活性。16.如权利要求15所述的组合物，其中，所述恶性肿瘤位于肺、结肠、肾脏、胰腺、肝脏、骨、皮肤、或肠。17.如权利要求1所述的组合物，其中，所述担体包含的脂质体纳米粒子含有可离子化脂质、结构脂质、一种或多种脂质稳定剂、和用...

【专利技术属性】
技术研发人员：应文斌，新津洋司郎，味吞宪二郎，B·马杰蒂，王丽，刘继华，R·亚达米，
申请(专利权)人：日东电工株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP