环孢菌素的喹啉偶联物制造技术

本发明专利技术涉及环孢菌素与喹啉线粒体靶向基团的偶联物，及其医疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】环孢菌素的喹啉偶联物
本专利技术涉及环孢菌素与喹啉线粒体靶向基团的偶联物及其治疗用途。
技术介绍
缺血性疾病，特别是心肌梗死和中风是全世界死亡和残疾的主要原因。在缺血发作后，早期恢复血流是限制组织损伤的关键。然而，当血液供应恢复到缺血细胞时，新返回的血液可能不利地影响受损组织。这被称为再灌注损伤，并且通常在缺血发作后引起进一步的损伤和细胞死亡。因此，它是缓解和避免缺血/再灌注(I/R)损伤的治疗目标。目前没有有效的治疗处理缺血/再灌注损伤。环孢菌素A(CsA)是众所周知的免疫抑制药物。已经提出用于治疗缺血/再灌注损伤。然而，研究环孢菌素治疗缺血/再灌注的效果的实验模型和试验性试验产生高度可变的和仅仅边际效应。此外，由于化合物的毒性，给患者施用环孢菌素可能导致不良副作用。随后，WO2011/010084描述了通过使用与线粒体靶向基团偶联的环孢菌素选择性抑制线粒体亲环蛋白D(CyP-D)来治疗缺血/再灌注损伤。
技术实现思路
本专利技术来自一项令人惊讶的发现，即同未偶联的环孢菌素相比，或同与其它线粒体靶向基团偶联的环孢菌素相比，环孢菌素与喹啉线粒体靶向基团的偶联物与降低的毒性相关。环孢菌素与喹啉的偶联物也是亲环蛋白D的有效抑制剂，并在缺血/再灌注损伤的动物模型中显示神经保护性质。还已发现环孢菌素与喹啉的偶联物在神经变性病症的动物模型中表现出神经保护性质。因此环孢菌素与喹啉的偶联物是一种有望用于治疗神经变性病症和局部缺血/再灌注损伤的治疗方法的候选物。因此，本专利技术提供一种环孢菌素偶联物，其为式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：其中：-A代表-B代表甲基或乙基，-R2代表乙基或异丙基，-R4代表-CH2CH(CH3)CH3、-CH2CH(CH3)CH2CH3、-CH(CH3)CH3或-CH(CH3)CH2CH3，-以下各项之一：(a)R1和R1*中的一个代表-L1Z1且另一个代表氢，且R3代表氢、C1-C3烷基或C2-C4烯基；或(b)R1和R1*中的一个代表甲基且另一个代表氢，且R3代表-L3Z3；或(c)R1和R1*中的一个代表-L1Z1且另一个代表氢，且R3代表-L3Z3，-L1和L3独立代表C1-C6亚烷基部分、C2-C6亚烯基部分或-(CH2CH2O)n(CH2)m-部分，其中n代表1至3且m代表0至2，且-Z1和Z3独立代表未取代或被一个或多个选自以下的取代基取代的喹啉环：卤素原子、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR'基团、-COOR'基团、-CONR’R”基团和-NR'R”基团，其中R'和R”相同或不同且表示氢或C1-C6烷基。本专利技术还提供一种药物组合物，其包括本专利技术的偶联物和药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体本专利技术还提供本专利技术的偶联物用于治疗人体或动物体的用途。本专利技术还提供本专利技术的偶联物用于治疗或预防可通过抑制环孢菌素D而改善的疾病或紊乱的用途。本专利技术还提供了本专利技术的偶联物在制备用于治疗易于通过抑制亲环素D来改善的疾病或病症的药物中的用途。本专利技术还提供了治疗患有或易患能够通过抑制亲环蛋白D而改善的疾病或病症的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用本专利技术的偶联物。本专利技术还提供了本专利技术的偶联物作为实验测定试剂的非治疗用途。附图说明图1显示来自实施例2的结果，其中在小鼠中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。在预期的复发迹象发生之前不久，自第33天起以载体[乙醇氢化蓖麻油：磷酸盐缓冲盐水(1：1：18)]或1mg/kg化合物1对小鼠进行腹膜内注射。图1描绘了诱导复发后的平均每日临床评分，并显示化合物1具有神经保护性质。图2显示了实施例3的结果，其中进行了一系列实验以评价以下各项的毒性：(a)未修饰的环孢菌素A(CsA)，(b)与喹啉部分偶联的环孢菌素[化合物1]和(c)环孢菌素[参考化合物1]。图2中的100％表示在测定中没有效果。这些结果显示喹啉部分与环孢菌素的偶联显著降低了环孢菌素的毒性。当环孢菌素与其他线粒体靶向基团(例如氟吡汀)偶联时，没有观察到类似的毒性降低。图3显示了在WT和CypDKO动物分离的肝线粒体中，CsA和化合物1对CRC(PT)的剂量依赖性效应的定量，如实施例4所述。抑制百分比表示相对于DMSO处理的CRC增加，归一化为WT。*p<0.05(t检验)。图4A至4F涉及实施例5中的线粒体毒性评估。在DIV8-9大鼠皮层神经元(A，E)和分离的大鼠肝线粒体(B-D，F)中测量线粒体参数。A，B：(A)使用ImageXpressMicroXL在装载有四甲基罗丹明甲基酯(TMRM)的神经元中和(B)使用荧光读板仪在装载罗丹明-123的分离线粒体中测量线粒体膜电位。将值归一化为DMSO(100％)和FCCP(2μM，0％)处理的样品。*p<0.05(单因素方差分析)。C，D：使用Oroboros高分辨率氧合图，在谷氨酸盐和苹果酸盐存在下从大鼠肝脏分离的线粒体中测量O2消耗。与基础的DMSO对照为对比，化合物显示了对基础、渗漏(寡霉素，2.5μM)和最大解偶联呼吸(FCCP，滴定以产生最大效果)的影响。*p<0.05(配对t检验)。E，F：使用荧光素酶测定法测量皮质神经元中的ATP水平(E)和在底物和ADP存在下的分离线粒体的ATP产量(F)。使用碘乙酸(IAA，1mM)和寡霉素(oligo，2.5μM)分别显示糖酵解和线粒体ATP合成的贡献。*p<0.05(t检验)。图5A和5B显示了如实施例6所述的细胞内CypA结合评估。用空载体转导的CRFK细胞(实心方形)或TRIM-CypA(空心圆形)，在DMSO的存在或药物浓度增加下以VSV-假型、GFP-表达的HIV-1载体进行感染。A：CsA，B：化合物1。在感染后48小时通过流式细胞术测量病毒感染。数据是三次独立实验的平均值。图6A至6D显示实施例8的结果，化合物1显示出比CsA更低的免疫抑制活性。体外有丝分裂，将4x10-5个细胞的正常小鼠脾细胞与(A)5μg/ml刀豆蛋白；(B)有丝分裂CD3/CD28单克隆抗体；或(C)来自MOG残基35-55肽免疫的小鼠的脾细胞，在5μg/mlMOG肽存在下与载体或化合物共同培养A、B2或4C天，然后加入1μCi3H-胸苷，并在16-20小时后收获，并通过β闪烁计数评估氚标记的胸苷掺入。结果表示一式三份样品的平均值±SEM。D：低剂量的化合物1在体内没有表现出免疫抑制活性。在第0天将25μl的2.5％恶唑酮(OX)或丙酮：橄榄油(4:1)载体(AOO)施用于ABH小鼠的耳朵皮肤。在第3天，取下3-4只小鼠/组的引流耳廓淋巴结，并在1μCi3H-胸苷的存在下培养5x105个细胞过夜。用0.1ml载体或0.1-10mg/kg化合物1或50mg/kgCsA处理动物。结果表示至少一式四份样品的平均值±SEM。图7显示了实施例9的结果。图7A显示了平均转棒活动性，其表示用载体(白色柱)或化合物1(灰色柱)处理之前(第27天)或之后(第45天)，在加速旋转杆上掉落/不能停留之前的平均值±SEM时间。***与载体治疗相比的P<0.001。图7B显示用化合物1mg/kg治疗复发性EAE后在脊髓中的轴突含量，测量为针对总蛋白质含量调整的神经丝水平。在第0天和第7天用含本文档来自技高网...

【技术保护点】
环孢菌素偶联物，其为式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.20 GB 1414806.81.环孢菌素偶联物，其为式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：其中：-A代表-B代表甲基或乙基，-R2代表乙基或异丙基，-R4代表-CH2CH(CH3)CH3、-CH2CH(CH3)CH2CH3、-CH(CH3)CH3或-CH(CH3)CH2CH3，-以下各项之一：(a)R1和R1*中的一个代表-L1Z1而另一个代表氢，且R3代表氢、C1-C3烷基或C2-C4烯基；或者(b)R1和R1*中的一个代表甲基而另一个代表氢，且R3代表-L3Z3；或者(c)R1和R1*中的一个代表-L1Z1而另一个代表氢，且R3代表-L3Z3，-L1和L3独立代表C1-C6亚烷基部分、C2-C6亚烯基部分或-(CH2CH2O)n(CH2)m-部分，其中n代表1～3，m代表0～2，且-Z1和Z3独立代表未取代或被一个或多个选自以下各项的取代基取代的喹啉环：卤素原子、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、-OR'基团、-COOR'基团、-CONR’R”基团和-NR'R”基团，其中R'和R”相同或不同且表示氢或C1-C6烷基。2.根据权利要求1所述的偶联物，其特征在于，A代表B代表甲基，R2代表乙基且R4代表-CH2CH(CH3)CH3。3.根据权利要求1或2所述的偶联物，其特征在于，R1代表-L1Z1，R1*代表氢且R3代表氢、C1-C3烷基或C2-C4烯基。4.根据权利要求3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·塞尔伍德，大卫·贝克，杰奥杰·绍巴德凯，迈克尔·罗兰·杜琴，朱莉娅·玛丽·希尔，贾斯廷·尼尔·达雷尔·沃恩，
申请(专利权)人：UCL商业有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB