一株具有耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开一株具有耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus)PE4941，2017年5月10日保藏于广东微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60176；及其用于在盐胁迫下促进植物生长中的应用。本发明专利技术分离筛选的补血草内生细菌Bacillus flexus PE4941具有固氮、产生铁载体等多种促生特征，并能够耐受8％的NaCl，通过灌根回接补血草幼苗，具有盐胁迫下显著减缓盐害症状、增加生物量从而促进其生长的效果，有助于提高植物的耐盐性，减少化学肥料的使用。

【技术实现步骤摘要】
一株具有耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于微生物肥料及农作物逆境保护研究领域，涉及一株植物内生弯曲芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
土壤盐碱化是当前威胁全球农业生产及农作物产量的主要非生物胁迫因素之一，目前全球近50％的灌溉土地都受到不同程度的盐胁迫威胁，我国大约有9.9×107hm2的土地存在盐渍危害问题，而且受威胁面积正在逐年增加。如何改良和利用大面积的盐渍化土壤，以及保护并提高重要的经济农作物抵抗盐胁迫是当前国际上和生命科学领域亟待解决的重要科技问题。目前主要生物改良方法措施是培育并种植耐盐碱的作物，如种植甜菜、玉米、大豆，以及耐盐植物碱篷、柽柳等，此外还有耐盐转基因植物的研究，但是该类方法往往周期长、花费巨大，而且植物转基因方法还未被社会广泛接受认可。植物内生细菌是指存在于健康植物组织内部，不引起植物病害的一类新微生物资源。该类微生物定殖于植物体内，不易受到外界环境的影响，研究发现很多内生细菌具有固氮、溶磷、产生植物生长激素、铁载体、产生抗生素以及诱导植物抗性的功能，植物内生细菌在促进植物生长与逆境胁迫保护方面的作用潜力已经受到越来越多研究者的关注。盐生植物补血草是蓝雪科药用草本植物，该属被誉为盐碱地改造的“先锋植物”，同时含有多种黄酮和多糖等有效成份，具有清热解毒、抗衰老和抗癌等多种功效，是我国传统中药之一，临床药用价值大。但是目前野生补血草数量骤减，亟待保护。目前有关有益细菌促进野生补血草生长以及高盐胁迫下提高其抗逆能力方面还鲜有报道。微生物具有体积小、生长快、易控制等优势，因此从盐碱地生长的补血草体内发掘有益微生物菌种资源，对于促进野生药用草本植物补血草的生长与逆境保护具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述技术问题，提供一种具有耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌。本专利技术的另一目的是提供该内生细菌生产的植物促生剂。本专利技术的又一目的是提供该内生细菌在盐胁迫下促进植物生长中的应用。本专利技术的目的可通过如下技术方案实现：本专利技术提供一株具有耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌(Bacillusflexus)PE4941，2017年5月10日保藏于广东微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC60176。所述的耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌(Bacillusflexus)PE4941，其特征在于，所述菌种的16SrRNA基因序列如SEQIDNO.1所示。一种含有所述的保藏号为GDMCC60176的PE4941菌株的植物耐盐促生剂。所述的耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌在盐胁迫下促进植物生长中的应用，其中所述的植物为中华补血草。含有所述的保藏号为GDMCC60176的PE4941菌株的植物耐盐促生剂。是通过以下方法生产而成：1)将保藏编号为GDMCC60176的弯曲芽孢杆菌PE4941，接种于250ml的LB液体培养基中(10g胰蛋白胨，5g酵母粉，30gNaCl，pH7.2，1000ml水)；2)37℃，150rpm摇瓶培养48h后，待菌体生长至对数生长期时8000rpm离心收集菌体；3)用无菌水洗涤菌体两次后，无菌水调节菌体的OD值为0.5-0.6，菌体浓度为107-108cfu/mL，即为所述的耐盐促生剂。所述的含PE4941菌株的植物耐盐促生剂在盐胁迫下促进植物生长中的应用。所述的含PE4941菌株的植物耐盐促生剂在盐胁迫下促进中华补血草生长中的应用。所述的含PE4941菌株的植物耐盐促生剂用于盐胁迫的植物促生长的方法，其特征在于，用含PE4941菌体OD值为0.5-0.6的菌液(50ml)进行幼苗灌根处理，每周灌根一次，连续灌根四次。专利技术详述：本专利技术通过对药用草本植物中华补血草内生细菌分离和耐盐及促生长特征的筛选，获得一株较强耐盐促生活性的菌株，编号为PE4941。通过形态特征、生理生化以及16SrRNA基因测序与系统发育分析，确定了其分类学地位。通过盆栽实验验证，本专利技术提供的内生细菌BacillusflexusPE4941是一种具有促进中华补血草生长、显著提高其盐胁迫下的适应能力的方法，可发酵用于菌肥，提高植物耐盐能力。分离菌株为弯曲芽孢杆菌，代号为PE4941，该菌株于2017年5月10日在广东省微生物菌种保藏中心登记保藏，保藏编号为GDMCC60176。同时本专利技术提供了该弯曲芽孢杆菌的16SrRNA基因序列(1400bp)，具体如SEQIDNO.1所示。此外，本专利技术提供了弯曲芽孢杆菌PE4941的菌悬液制备方法，具体步骤为：挑取在LB固体平板上生长24-48h的弯曲芽孢杆菌PE4941单菌落，接种于250ml的LB液体培养基中(10g胰蛋白胨，5g酵母粉，30gNaCl，pH7.2，1000ml水)，37℃，150rpm摇瓶培养48h后，待菌体生长至对数生长期时8000rpm离心收集菌体，用无菌水洗涤菌体两次后，无菌水调节菌体的OD值为0.5-0.6，菌体浓度为107-108cfu/mL。同时提供了上述菌悬液的施肥方法，包括以下步骤：采用营养土与蛭石以体积比4:1混合得到盆栽基质，然后于121℃灭菌一小时，冷却后分装至盆栽花盆中(9cm长×9cm宽×9cm高)，每盆约200g。选取颗粒饱满、大小一致的补血草种子，经表面消毒(75％乙醇15秒，0.1％HgCl6-7分钟)，放进灭菌土壤中进行育苗，待种子发芽长出两片真叶后选取生长一致的幼苗进行盆栽试验，每盆一棵苗，幼苗在温室生长(25℃；12h光照/12h黑暗处理)，用OD值为0.5-0.6的菌液(50ml)进行幼苗灌根处理，每周灌根一次，连续灌根4次后用200mM的NaCl溶液进行盐胁迫处理。通过盆栽试验，验证了盐胁迫下弯曲芽孢杆菌PE4941对中华补血草幼苗的生长具有明显的促进作用，株高和鲜重分别提高了1.4和1.93倍。有益效果：与现有技术相比，本专利技术分离筛选的补血草内生细菌BacillusflexusPE4941具有固氮、产生铁载体等多种促生特征，并能够耐受8％的NaCl，通过灌根回接补血草幼苗，具有盐胁迫下显著减缓盐害症状、增加生物量从而促进其生长的效果，有助于提高植物的耐盐性，减少化学肥料的使用。附图说明图1.菌株PE4941在LB平板上培养48小时的菌落照片图2.基于16SrRNA基因构建的菌株PE4941系统发育树图3.接菌与不接菌补血草幼苗在高盐胁迫条件下生长状态的比较图4.高盐及无盐胁迫条件下接菌与不接菌补血草幼苗鲜重的比较图5.高盐及无盐胁迫条件下接菌与不接菌补血草幼苗株高的比较生物材料保藏信息耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌PE4941，分类命名为弯曲芽孢杆菌(Bacillusflexus)，保藏于广东微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼广东微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC60176，保藏日期为2017年5月10日。具体实施例实施例1：1.内生菌分离植物样本采集自江苏沿海滩涂的盐碱地，植物采集带回实验室后于48小时内完成菌株分离。样品先用自来水冲洗干净，去除表面的泥土和附着物，然后将植物样品剪成2cm×2cm大小，在无菌超净工作台中用5％浓度的次氯酸钠浸泡样本3-5min，然后加入无菌的2.5％的硫代硫酸钠处理10min，用无菌水清洗表面消毒的植本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株具有耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus)PE4941，2017年5月10日保藏于广东微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60176。

【技术特征摘要】
1.一株具有耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌(Bacillusflexus)PE4941，2017年5月10日保藏于广东微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC60176。2.根据权利要求1所述的耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌(Bacillusflexus)PE4941，其特征在于，所述PE4941菌株的16SrRNA基因序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌(Bacillusflexus)PE4941，其特征在于，所述PE4941菌株在LB固体平板生长良好，在生长48h后，菌落为圆形、较湿润、直径约2-3mm，近白色，不透明。4.一种含有权利要求1所述的保藏号为GDMCC60176的PE4941菌株的植物耐盐促生剂。5.根据权利要求1所述的耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌PE4941在盐胁迫下促进植物生长中的应用。6.根据权利要求5所述的耐盐能力的植物内生弯曲芽孢杆菌PE4941的应用，其特征在于，所述的植物为中华补血草。7.根据权利要求4所述的植物耐盐促...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦盛，王田田，冯维维，邢珂，王玉，丁鹏，蒋继宏，
申请(专利权)人：江苏师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32