基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法及构建牙髓牙本质复合体结构的生物支架材料技术

本发明专利技术涉及口腔医学领域，具体而言，涉及一种基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法及构建牙髓牙本质复合体结构的生物支架材料。该方法，首先制备牙髓组织细胞外基质材料；其次将牙髓组织细胞外基质注射材料与干细胞混合，得到混合材料；最后将这种混合材料与蛋白因子复合。从而获得牙髓牙本质复合体的再生复合体结构，实现牙髓牙本质复合体的完整再生。通过将DPEM制备成可注射用材料，改善了DPEM制备过程中脱细胞制备时间、异种核酸残留量将进一步减少。将该DPEM注射材料中在牙髓‑牙本质交界表面添加了生长因子，有效调控细胞的粘附、迁移与分布，从而促进牙髓牙本质复合体的再生，实现牙髓组织的完整再生。

Regeneration method based on dental pulp dentin complex and biological scaffold material for constructing dental pulp dentin complex structure

The invention relates to the field of oral medicine, in particular to a regeneration construction method based on a dental pulp dentin complex and a biological scaffold material for constructing a dental pulp dentin complex structure. This method first prepared pulp tissue extracellular matrix materials; secondly the pulp tissue extracellular matrix material and the injection of stem cell mixed, mixed materials; finally the mixed material and protein composite. Thus, the regenerative complex structure of dental pulp dentin complex can be obtained, and the complete regeneration of dental pulp dentin complex can be achieved. By preparing DPEM into injectable material, the preparation time of DPEM and the amount of heterologous nucleic acid residues in the preparation process will be further reduced. The injection of DPEM material in dental pulp dentin junction surface added growth factors, effective regulation of cell adhesion, migration and distribution, so as to promote the regeneration of pulp dentin complex, to achieve a complete regeneration of the pulp tissue.

【技术实现步骤摘要】
基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法及构建牙髓牙本质复合体结构的生物支架材料
本专利技术涉及口腔医学领域，具体而言，涉及一种基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法及构建牙髓牙本质复合体结构的生物支架材料。
技术介绍
目前，组织工程方法是未来实现牙髓组织再生的理想技术手段。异种牙髓组织来源的细胞外基质材料被认为是促进牙髓组织再生的有效支架材料。猪源性的牙髓组织细胞外基质材料(dentalpulpextracellularmatrix，DPEM)，具有良好的重血管化潜能，能够有效促进牙髓组织的再生。然而，牙髓牙本质复合体的构建研究是牙髓组织再生研究的关键，目前尚无法形成完整的牙髓牙本质复合体结构。尽管已经在如何构建形成完整的牙髓牙本质复合体结构的方法上投入了大量的研究，却仍旧没有一种方法能够在牙髓组织再生的时候，完整的构建出牙髓牙本质复合体。并且目前也尚未有该种针对牙髓牙本质复合体的生物支架材料。因此，研究能够完整地构建牙髓牙本质复合体的方法迫在眉睫。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种牙髓牙本质复合体的再生构建方法，其能够形成完整的牙髓牙本质复合体结构。本专利技术的目的在于提供一种用于构建牙髓牙本质复合体的生物支架材料，其能够有效促进牙髓组织的完整再生。为了实现上述目的，本专利技术实施例采用的技术方案如下：一种基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法，包括：制备牙髓组织细胞外基质注射材料；将牙髓组织细胞外基质注射材料与干细胞混合，得到混合材料；以及将混合材料与蛋白因子复合。一种构建牙髓牙本质复合体结构的生物支架材料，通过上述的基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法制备得到。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法及构建牙髓牙本质复合体结构的生物支架材料，首先制备牙髓组织细胞外基质注射材料；其次将牙髓组织细胞外基质注射材料与干细胞混合，得到混合材料；最后将这种混合材料与蛋白因子复合。从而制得了完整的牙髓牙本质复合体结构，能够有效促进牙髓组织的再生。将DPEM制备成可注射用材料，将改善DPEM制备过程中脱细胞制备时间、异种核酸残留量将进一步减少；将该DPEM注射材料中在牙髓-牙本质交界表面添加了生长因子，有效调控细胞的粘附、迁移与分布，从而促进牙髓牙本质复合体的再生，实现牙髓组织的完整再生。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。在本专利技术的描述中，需要说明的是，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。下面对本专利技术实施例提供的基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法及构建牙髓牙本质复合体结构的生物支架材料进行具体说明。本专利技术提供的基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法。包括以下步骤：S1、制备牙髓组织细胞外基质注射材料。具体地包括：S1.1、对完整的牙髓组织进行切片；具体地，先完整取出猪源性的牙髓组织；将上述的完整取出的新鲜的猪源性的牙髓组织，片切成片，已备后续的使用。其中，猪源性的牙髓组织，具有良好的重血管化潜能，能够有效促进牙髓组织的再生。将猪源性的牙髓组织用于构建牙髓牙本质复合体，能够有效地促进牙髓组织再生。具体的，在本实施例中，选取新鲜的猪源性的牙髓组织，并将其完整取出片切成片待用。S1.2、对切片后的牙髓组织进行清洗；具体的清洗步骤包括：S1.2.1、第一次超声清洗；超声是一种频率大于25000Hz的声能，将其应用于牙髓组织的清洗，能够有效地为后续的去除核酸组织起到保障的作用。S1.2.2、十二烷基硫酸钠溶液清洗；十二烷基硫酸钠溶液又称SDS。SDS是一种白色或淡黄色微粘物，工业上常用于洗涤剂和纺织工业。属阴离子表面活性剂。易溶于水，与阳离子、非离子复配对性好，具有良好的乳化、发泡、渗透、去污和分散性能。SDS是一种已知的能够使蛋白质变性的去污剂。它用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。它也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸：蛋白复合物。在较高温度下，破坏蛋白质与DNA的结合，使DNA释放出来。在乳液聚合反应中，可充当两相溶液的乳化剂。选用上述的十二烷基硫酸钠溶液能够进一步为后续的去除核酸组织起到保障的作用。S1.2.3、聚乙二醇辛基苯基醚溶液清洗，即TritonX-100，是一种非离子型表面活性剂(或称去污剂)。分子量为646.86(C34H62O11)。它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。免疫细胞化学中TritonX-100常用浓度为1％和0.3％，其中1％的TritonX-100常用于漂洗组织标本，0.3％的TritonX-100则常用于稀释血清，0.1％的TritonX-100常用于LAMP(环介导等温扩增)，配制BSA等。但通常是先配制成30％的TritonX-100储备液，临用时稀释至所需浓度。聚乙二醇辛基苯基醚溶液能够在水中帮助分解蛋白酶；但是，必须使用尽可能低的浓度否则会污染样品，污染还会影响MS分析。该产品通常还作为聚合乳液的配方使用。选用上述的聚乙二醇辛基苯基醚溶液清洗能够进一步为后续的去除核酸组织起到保障的作用。S1.2.4、第二次超声清洗。从而能够进一步地对牙髓组织进行清洗。保证牙髓组织的清洁程度。S1.3、对清洗后的牙髓组织去除核酸组织，得到牙髓组织细胞外基质。牙髓组织细胞外基质(dentalpulpextracellularmatrix)，简称DPEM，不仅为细胞提供机械支撑作用，也是细胞附着和分化的底物，为细胞附着提供信号，促进细胞的生长。细胞外基质还可以作为一种必须的信号分子，通过基质-细胞间的相互作用影响着细胞的生长和功能的同时，还可以通过调节细胞迁移、分化和分布。对得到的牙髓组织细胞外基质(dentalpulpextracellularmatrix)，简称DPEM，已在小型猪颌骨内得以验证，证实该材料具有良好的重血管化潜能，能够有效促进牙髓组织的再生。S1.4、对牙髓组织细胞外基质材料进行研磨；在本实施例中对牙髓组织细胞外基质进行研磨的具体方式是不限定的。通过对牙髓组织细胞外基质进行研磨，能够为后续的实验步骤做到有效的保证。S1.5、对研磨后的牙髓组织细胞外基质消毒处理。对研磨后的牙髓组织细胞外基质消毒处理是在双抗中消毒处理。双抗，又称青链霉素混合液，青链霉素混合液(100X)(Penicillin-StreptomycinSolution)双抗，是专门用于细胞培养的，可以直接添加到细胞培养液内。青霉素-链霉素溶液(100X)中，青霉素的含量为10000U/ml，链霉素的含量为10mg/ml。在细胞培养液中推荐的青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素的工作浓度为0.1mg/ml。双抗起的作用：抗生素，抑制细菌生长；避免细胞污染。S2、将所述牙髓组织细胞外基质注射材料与干细胞混合，得到混合材料。S2.1、将牙髓组织细胞外基质注射材料与干细胞混合前，还对干细胞进行离心。S2.2对所述干细胞进行离心后，还对离心后的干细胞进行重悬。干细胞是机体各种组织细胞的最初来源，具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能，能够应用于新组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法，其特征在于，包括：制备牙髓组织细胞外基质注射材料；将所述牙髓组织细胞外基质注射材料与干细胞混合，得到混合材料；以及将所述混合材料与生长因子复合。

【技术特征摘要】
1.一种基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法，其特征在于，包括：制备牙髓组织细胞外基质注射材料；将所述牙髓组织细胞外基质注射材料与干细胞混合，得到混合材料；以及将所述混合材料与生长因子复合。2.如权利要求1所述的基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法，其特征在于，制备牙髓组织细胞外基质注射材料的步骤包括：对完整的牙髓组织进行切片；对切片后的所述牙髓组织进行清洗；对清洗后的所述牙髓组织去除核酸组织，得到牙髓组织细胞外基质；对所述牙髓组织细胞外基质进行研磨；以及对研磨后的所述牙髓组织细胞外基质消毒处理。3.如权利要求2所述的基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法，其特征在于，所述牙髓组织为猪源性的牙髓组织。4.如权利要求2所述的基于牙髓牙本质复合体的再生构建方法，其特征在于，对切片后的所述牙髓组织进行清洗的步骤包括：第一次超声清洗；十二烷基硫酸钠溶液清洗；聚乙二醇辛基苯基醚溶液清洗；以及第二次超声清洗。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈岗，黄海涛，权慧欣，肖迪，陈剑锋，于勇，
申请(专利权)人：大连医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21