桐花树叶正丁醇提取物及其制备和治疗结肠癌的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种桐花树叶正丁醇提取物及其制备方法，将桐花树叶加入乙醇浸泡得到桐花树叶乙醇总提物，将乙醇总提物中乙醇挥发后，加入石油醚进行萃取，获取下层水相，下层水相先加乙酸乙酯进行萃取，获得下层水相后加正丁醇继续萃取，获取上层正丁醇部位提取物，再经水浴干燥，即得。体外分子生物学实验研究表明，桐花树叶正丁醇提取物对人结肠癌HT‑29、SW480、DLD‑1细胞具有增殖抑制作用，并可明显抑制人结肠癌细胞HT‑29、SW480、DLD‑1的克隆形成，主要是通过调节多条凋亡信号通路中的相关蛋白诱导癌细胞凋亡。因此，桐花树叶正丁醇提取物在制备治疗结肠癌药物方面具有潜在应用前景，可用于制备抗结肠癌药物。

N-butanol extract of Tung flower leaf and preparation thereof and application for treating colon cancer

The invention discloses a Aegiceras corniculatum n-butanol extract and a preparation method thereof, the Aegiceras corniculatum soaking with ethanol from Aegiceras corniculatum ethanol extract, ethanol total extract ethanol volatile after adding petroleum ether extraction to obtain the lower aqueous phase, lower water before adding ethyl acetate extraction obtained after the addition of n-butanol to the lower aqueous phase extraction, obtaining upper n-butanol extract by water bath drying, namely. In vitro study of molecular biology showed that Aegiceras corniculatum n-butanol extract on human colon cancer HT 29, SW480, DLD can inhibit the proliferation of 1 cells, and can inhibit the cloning of human colon cancer cells HT, SW480, DLD 29 1 formation, mainly by regulating many apoptosis related protein signal in the pathway to induce apoptosis of cancer cells. Therefore, the n-butanol extract of Tung flower leaves has potential application in the preparation of colon cancer drugs, and can be used for the preparation of anti colon cancer drugs.

【技术实现步骤摘要】
桐花树叶正丁醇提取物及其制备和治疗结肠癌的应用
本专利技术属于桐花树
，尤其涉及一种桐花树叶正丁醇提取物及其制备和治疗结肠癌的应用。
技术介绍
桐花树(Aegicerascorniculatum)，又名黑榄，红葫，黑脚梗等，系紫金牛科蜡烛果属植物，是常见的红树植物，主要分布于我国广西、广东、福建及海南诸岛，印度，中南半岛，菲律宾以及澳大利亚也均有分布。桐花树是传统的中药，民间常用其树皮和叶子熬汁治疗哮喘、糖尿病和风湿等疾病。现代药理研究发现桐花树提取物具有细胞毒性、抗真菌、止泻、抗氧化与保肝等药理作用。虽然，目前已有从有桐花树茎和小枝的石油醚部位得到的衍生物具有抑制肝部肿瘤作用的报道，但对桐花树叶正丁醇部位提取物的抗癌研究尚未见有报道。植物的不同部位及其不同溶剂提取物中所含的化学成分是有差别的，如竹茹和竹叶，竹茹来源为禾本科植物青秆竹茎的中间层，竹叶来源为禾本科植物淡竹的叶，朱梅和周惠燕等的研究表明这两者所含化学成分是不一样的。结肠癌是结肠粘膜上皮在环境或遗传等多种致癌因素作用下发生的恶性病变，是常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在整个恶性肿瘤中位居第3位。2017年我国癌症中心发布的统计数据显示结肠癌等五大癌症作为肿瘤死亡的主要原因，约占全部肿瘤死亡病例的70％。无论是在城市还是农村，我国结肠癌的发病率都呈现上升的趋势。与三十年前相比，结肠癌标化死亡率上升了11.2％。基于我国日益增长的人口基数，庞大结肠癌患者群必将成为整个公共卫生事业的沉重负担。由于恶性肿瘤发病隐匿，结肠癌早期诊断率只有11％-15％，80％以上患者确诊时已属中晚期，而晚期结肠癌五年生存率低于20％。目前西医治疗结肠癌的方法主要有手术、放疗、化疗以及三者联合治疗等方案，但其毒副作用较大，且易引起肿瘤变异及耐药。因此，从中医药中寻求新型、安全有效的的治疗药物是目前治疗结肠癌的重要研究方向。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题是提供一种桐花树叶正丁醇提取物及其制备和治疗结肠癌的应用，以扩大桐花树的使用范围，为癌症治疗开辟新途径。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：桐花树叶正丁醇提取物在制备治疗结肠癌药物方面的应用。药物为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膏剂、合剂、混悬剂，该药物以桐花树叶正丁醇部位为活性成分，加入常规辅料按照常规工艺制成。结肠癌源于人结肠癌细胞HT-29、SW480、DLD-1。桐花树叶正丁醇提取物的制备方法，将桐花树叶加入乙醇浸泡得到桐花树叶乙醇总提物，将乙醇总提物中乙醇挥发后，加入石油醚进行萃取，获取下层水相，下层水相先加乙酸乙酯后加正丁醇继续萃取，获取上层正丁醇部位提取物，再经水浴干燥，即得。上述桐花树叶正丁醇提取物的制备方法，按以下操作进行：将桐花树叶晒干打成粗粉，加入25倍量95％乙醇浸泡7天；通过减压浓缩得到桐花树叶乙醇总提物，将乙醇总提物加纯水溶解成混悬液，挥发至无乙醇味后，加入石油醚进行萃取，获取下层水相，将下层水相加乙酸乙酯继续萃取，得到的下层水相继续加正丁醇继续萃取，获得上层正丁醇部位提取物，将上层正丁醇部位提取物水浴干燥，即得桐花树叶正丁醇提取物。上述制备方法得到的桐花树叶正丁醇提取物。为充分开发桐花树资源，专利技术人建立了一种桐花树叶正丁醇提取物的制备方法，将桐花树叶加入乙醇浸泡得到桐花树叶乙醇总提物，将乙醇总提物中乙醇挥发后，加入石油醚进行萃取，获取下层水相，下层水相先加乙酸乙酯后加正丁醇继续萃取，获取上层正丁醇部位提取物，再经水浴干燥，即得。体外分子生物学实验研究表明，桐花树叶正丁醇提取物对人结肠癌HT-29、SW480、DLD-1细胞具有增殖抑制作用，并可明显抑制人结肠癌细胞HT-29、SW480、DLD-1的克隆形成，主要是通过调节多条凋亡信号通路中的相关蛋白诱导癌细胞凋亡。因此，桐花树叶正丁醇提取物在制备治疗结肠癌药物方面具有潜在应用前景，可用于制备抗结肠癌药物。深入开发桐花树叶正丁醇提取物可以扩大桐花树的使用范围，为癌症治疗开辟新途径。附图说明图1是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物对结肠癌细胞增殖抑制作用的结果图。图2是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物对人结肠癌细胞活性影响的平板克隆形成实验结果图。图3是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物对人结肠癌细胞活性影响的结果柱状图。图4是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物诱导结肠癌细胞(HT-29、SW480)凋亡结果的流式细胞仪图。图5是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物诱导结肠癌细胞人结肠癌细胞(HT-29、SW480)凋亡结果的柱状图。图6是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物诱导结肠癌细胞(DLD-1)凋亡结果的流式细胞仪图。图7是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物诱导结肠癌细胞人结肠癌细胞(DLD-1)凋亡结果的柱状图。图8是本专利技术桐花树叶正丁醇提取物调节凋亡信号通路蛋白表达的结果图。具体实施方式一、桐花树叶正丁醇部位提取物(NACL)的制备1.药材：桐花树叶采于广西防城港，经广西北部湾海洋研究中心许铭本鉴定为金牛科蜡烛果属植物桐花树的叶子。2.提取与分离：将桐花树叶晒干打成粗粉(2500g)，加入25倍量(62.5L)95％乙醇浸泡7天；通过减压浓缩得到桐花树叶乙醇总提物，将乙醇总提物加纯水溶解成混悬液，挥发至无乙醇味后，加入石油醚进行萃取，获取下层水相，将下层水相加乙酸乙酯继续萃取，得到的下层水相继续加正丁醇继续萃取，获得上层正丁醇部位提取物，将上层正丁醇部位提取物水浴干燥，即得桐花树叶正丁醇提取物。二、桐花树叶正丁醇部位提取物药效学研究1.实验材料细胞株——人结肠癌细胞HT-29，SW480，DLD-1由中国科学院细胞库提供。药材——桐花树叶主要试剂和耗材——主要试剂——凋亡试剂盒(PharmingenFITCAnnexinVApoptosisDetectionKit1)：美国RayBiotech公司；细胞增殖检测试剂盒(MTS)：美国promega公司；结晶紫染色液：中国碧云天公司；氯仿、异丙醇、无水乙醇、水合氯醛等为国产分析纯试剂。主要耗材——25cm2细胞培养瓶：美国BD公司；6cm细胞培养皿、10cm细胞培养皿：美国BD公司；细胞6孔板、24孔板、96孔板：美国BD公司；15毫升离心管、50毫升离心管：美国BD公司；冻存管：美国BD公司；移液管：美国corning公司；枪头盒、EP管、PCR管：美国AXYGEN公司；主要仪器——电动移液器、可调式移液器、低温高速离心机：德国Eppendorf公司生产；细胞培养孵箱、生物安全柜、液氮罐：美国Thermo科学公司；-80℃生物超低温冰箱：美国Thermo科学公司；超净工作台：苏州金净公司；37℃细菌培养箱、烤箱：中国精宏公司；倒置荧光显微镜：日本OLYMPUS公司；掌上离心机：美国ThermoFisherScientific公司；高压灭菌锅、-20℃生物冰箱、4℃生物冰箱：中国海尔公司；碎冰制冰机：日本Sanyo公司；计算机：中国联想公司；Nanodrop2000分光光度计：美国ThermoScientific公司；电磁搅拌器、酶联免疫检测仪：美国ThermoScientific公司。2.实验方法2.1细胞增殖实验(MTS)(1)待细胞处于对数生长期时，用真空泵吸走细胞培养基，加入DPBS清洗细胞，弃掉DPBS后本文档来自技高网...

【技术保护点】
桐花树叶正丁醇提取物在制备治疗结肠癌药物方面的应用。

【技术特征摘要】
1.桐花树叶正丁醇提取物在制备治疗结肠癌药物方面的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物为胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膏剂、合剂、混悬剂。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述结肠癌源于人结肠癌细胞HT-29、SW480、DLD-1。4.一种桐花树叶正丁醇提取物的制备方法，其特征在于将桐花树叶加入乙醇浸泡得到桐花树叶乙醇总提物，将乙醇总提物中乙醇挥发后，加入石油醚进行萃取，获取下层水相，下层水相先加乙酸乙酯后加正丁醇继续萃取，获取上层正丁醇部位提取物，再...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗花，邓家刚，侯小涛，郝二伟，杜正彩，易湘西，谢滟，谭德超，冯小慧，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西,45