一种同时测定牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定中药中牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮含量的方法，所述方法包括：1)分别取牛蒡苷、甘草酸铵和胡薄荷酮标准品及含有牛蒡子、甘草、荆芥穗(或荆芥)中药材的供试品溶于甲醇水溶液中，分别制成标准溶液及供试品溶液；2)分别取等体积的标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得供试品中牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量。本发明专利技术为含有牛蒡子、甘草和荆芥穗(或荆芥)的中药、及其提取物或制剂中的牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量测定提供了一种快速、准确的方法。

Method for simultaneously measuring content of burdock glycoside, glycyrrhizic acid and Hu MINT

The invention discloses a method for simultaneous determination of arctiin in traditional Chinese medicine, glycyrrhizic acid and pulegone content, the method comprises the following steps: 1) were collected from arctiin, ammonium glycyrrhizinate and pulegone standard and containing Fructus Arctii, licorice root, Schizonepeta spike (or Schizonepeta herb) samples dissolved in the methanol water solution, were made from the standard solution and the test solution; 2) were taken as standard solution volume and the sample solution was injected into the HPLC, and determination of standard solution and the test solution and peak area calculation, the test content of arctiin, licorice acid and pulegone. The present invention contains burdock, licorice and Schizonepeta spike (or Schizonepeta) content of traditional Chinese medicine, and arctiin, extract or preparation of glycyrrhizic acid and pulegone provides a fast and accurate method for the determination of.

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮含量的方法
本专利技术涉及一种同时测定中药提取物及其制剂中牛蒡苷、甘草酸、胡薄荷酮含量的方法，属于中药

技术介绍
咽炎，在中医中属“喉痹”范畴。现代医学认为咽炎是由溶血性链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌等病原体感染引起的咽部粘膜的急性炎症。中医认为多因热邪毒侵袭咽喉，内伤于肺，相博不去，致咽喉肿痛；或邪热壅盛，由肺卫传里，热邪循经灼伤咽喉而成喉痹。临床主要表现为咽部红肿、疼痛、干痒不适及异物感，常伴发热。本病是以咽喉疼痛，咽部红肿或有颗粒突起，喉核肿胀不明显，全身有风热症状主要临床表现的咽部急性炎症。西医治疗多以抗生素为主，但多有毒副作用，而且易产生耐药性，而中医中药治疗，具有疗效好，副作用小的特点。传统中医认为：急性咽炎(急喉痹)分为风寒外侵、风热袭肺、肺卫热盛三型。临床则多见风热袭肺、肺卫热盛两型。风热袭肺型表现为咽痛，口微渴，发热，微恶寒，咽部轻度充血、水肿，舌边尖红，苔薄白，脉浮数。治宜疏风清热，解毒利咽。肺卫热盛型表现为咽痛较剧，口渴多饮，咳嗽、痰粘稠，发热，大便偏于干，小便短赤，咽部充血较甚，舌质红，苔薄黄，脉数有力。治宜泄热解毒，利咽消肿。消毒散载于宋代《小儿药证直诀》，原方为“牛蒡子二两、甘草半两、荆芥穗一分。”主治：“疮疹未出，或已出未能匀遍。及治大人、小儿上膈壅热，咽喉肿痛，胸膈不利”；其制法及用法为“上同为粗末，每服三钱，水一盏半，煎至一盏，温服，不拘时。”历代主要医书中均有该方剂记载，如明代《活幼心方》等。荆芥穗含挥发油1.69％，其中主要成分均为胡薄荷酮(pule-gone)，薄荷酮(menthone)，异薄荷酮(isomenthone)和异胡薄荷酮(isopulegone)，薄荷醇(menthol)，辣薄荷酮(piperitone)，辣薄荷烯酮(piperitenone)，葎草烯(humulene)，丁香烯(caryophyllene)，β-蒎烯(β-pinene)等。而这些成分很容易挥发，传统工艺中，通过加热，很容易导致该类成分的损失。甘草中含有甘草甜素(glycyrrhizin，即甘草酸glycyrrhinicacid,C42H62O16)6～14％，为甘草的甜味成分，是一种三萜皂甙。甘草酸水解产生一分子甘草次酸(glycyrrheticacid即glycyrrhetinicacid,C30H46O4)及二分子葡萄糖醛酸(glycuronicacid,C6H10O7)。并含少量甘草黄甙(即甘草甙liquiritin,C21H22O9,为一种黄烷醇flavanone的甙，其甙元名甘草素liquiritigenin,,C15H12O4和甘草苦甙glycyamarin)、异甘草黄甙(iso-liquiritin,,C21H24O9)、二羟基甘草次酸(dihydroxyglycyrrheticacid即grabricacid,C30H46O5)、甘草西定(licoricidin,,C25H32O5,即3’，6-二异戊烯－2’，4’，5-三羟基异黄烷)、甘草醇(glycyrol,C21H18O6)、5-0-甲基甘草醇(5-0-methylglycerol,C22H20O6)、异甘草醇(iso-glycyrol,C21H18O6)等。牛蒡子中含牛蒡甙(arctiin)，水解生成牛蒡甙元(arctigenin)及葡萄糖(glucose)。又含罗汉松脂酚(matairesinol)，络石甙元(trachelogenin)，倍半木质素(sesquiligenan)及脂肪油，其中脂肪酸成分有：花生酸(arachicacid)，硬脂酸(steraicacid)，棕榈酸(palmiticacid)和亚油酸(linoleicacid)等。《中国药典》(2015版)中，分别有牛蒡子中牛蒡苷、甘草中甘草酸、荆芥(穗)中胡薄荷酮的含量测定方法，但尚未见有同时测定牛蒡苷、甘草酸及胡薄荷酮含量的方法，为了更好地开发利用“消毒散”这一经典古方，本专利技术对其质量控制进行了深入研究，并建立了同时测定牛蒡苷、甘草酸及胡薄荷酮含量的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够快速、准确地同时测定“消毒散”提取物及制剂中牛蒡苷、甘草酸及胡薄荷酮含量的方法，具体地提供一种用高效液相色谱法测定“消毒散”提取物及制剂中牛蒡苷、甘草酸及胡薄荷酮含量的方法。本专利技术所述方法包括：1)分别取牛蒡苷、甘草酸铵和胡薄荷酮标准品及含有牛蒡子、甘草、荆芥穗(或荆芥)中药材的供试品溶于甲醇水溶液中，分别制成标准溶液及供试品溶液；2)分别取等体积的标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得供试品中牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量。其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶；流动相为甲醇-乙腈-水溶液。本专利技术方法中，作为优选的实施方案，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为≤5μm，进一步优选为5μm，4μm，3.5μm。本专利技术所述流动相为甲醇-乙腈-水溶液，优选为10％～15％甲醇及10％～90％的乙腈的水溶液梯度洗脱。所述梯度溶液以体积百分比计，如下表所示：本专利技术所述的一种同时测定牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮含量的方法，可以用于任何包含牛蒡子、甘草、荆芥(穗)三味药材的中药复方，及其提取物，及其各种药物剂型，如片剂、胶囊、口服液、注射剂、颗粒剂等成药中牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮含量的同时测定。作为优选的实施方案，所述小儿咽宁口服液中牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量测定方法，包括：1)供试品溶液的制备：精密量取小儿咽宁口服液3ml，置25ml容量瓶中，加入70％甲醇水溶液至刻度，摇匀，滤过，即得。2)对照品溶液的制备：分别取牛蒡苷、甘草酸铵、胡薄荷酮对照品适量，加70％甲醇水溶液溶解，制成每1ml分别含含0.5mg、0.1mg、0.2mg的对照品溶液。3)含量测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，按外标法计算样品中牛蒡苷、甘草酸、胡薄荷酮的含量。其中，固定相为250×4.6mm,5μm的碳十八烷基键合硅胶柱，流动相如下表所示梯度洗脱。检测波长分别为：280nm(牛蒡苷)、237nm(甘草酸)、252nm(胡薄荷酮)，理论塔板数按牛蒡苷峰计算不低于3000。附图说明图1是牛蒡苷、甘草酸铵、胡薄荷酮标准品HPLC色谱图。图中1.牛蒡苷；2.甘草酸铵；3.胡薄荷酮。图2是小儿咽宁口服液样品HPLC色谱图。图中1.牛蒡苷；2.甘草酸；3.胡薄荷酮。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术再做进一步的详细说明，但不应将此理解为本专利技术仅限于以下实施例，凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1小儿咽宁口服液(深圳海王医药科技研究院有限公司制备，批号：20160401)中牛蒡苷、甘草酸、和胡薄荷酮的含量测定1)色谱条件及系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250×4.6mm,5μm)；以流动相为甲醇-乙腈-磷酸水溶液为流动相，如下表所示梯度洗脱。检测波长分别为：280nm(牛蒡苷)、237nm(甘草酸)、252nm(胡薄荷酮)，理论塔板数按牛蒡苷峰计算不低于3000。2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量同时测定方法，所述方法包括：1)分别取牛蒡苷、甘草酸铵和胡薄荷酮标准品及含有牛蒡子、甘草、荆芥穗或荆芥中药材的供试品溶于甲醇水溶液中，分别制成标准溶液及供试品溶液；2)分别取等体积的标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得供试品中牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量；其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为≤5μm；流动相为甲醇‑乙腈‑酸水溶液，所述甲醇‑乙腈‑酸水溶液为：以体积百分比计，5％～15％甲醇‑10％～90％乙腈的梯度溶液。

【技术特征摘要】
1.一种牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量同时测定方法，所述方法包括：1)分别取牛蒡苷、甘草酸铵和胡薄荷酮标准品及含有牛蒡子、甘草、荆芥穗或荆芥中药材的供试品溶于甲醇水溶液中，分别制成标准溶液及供试品溶液；2)分别取等体积的标准溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪中，然后测定标准品溶液和供试品溶液的峰面积并进行计算，即得供试品中牛蒡苷、甘草酸和胡薄荷酮的含量；其中，所述高效液相色谱仪的固定相为碳十八烷基键合硅胶，所述碳十八烷基键合硅胶的粒径为≤5μm；流动相为甲醇-乙腈-酸水溶液，所述甲醇-乙腈-酸水溶液为：以体积百分比计，5％～15％甲醇-10％～90％乙腈的梯度溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的碳十八烷基键合硅胶的粒径为5μm或4μm或3.5μm。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的碳十八烷基键合硅胶的粒径为5μm。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的酸水为磷酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸之一种，酸的体积浓度为0.01％～0.5％。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的酸水为体积浓度0.05％磷酸。6.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭道鹏，王晶，江东龙，卢禁，曾伟珍，
申请(专利权)人：深圳海王医药科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44