大豆耐盐基因GmCHS5及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种大豆耐盐蛋白GmCHS5和大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，属于基因工程领域。本发明专利技术提供了一种含有所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的表达载体pDL28‑HA‑GmCHS5‑GFP。本发明专利技术利用植物基因工程技术，通过根瘤农杆菌介导的方法将基因转入大豆中，GmCHS5过量表达的转基因大豆根耐盐能力显著提升。转基因大豆经过200mM的高浓度盐水处理，转基因大豆根的鲜重是野生型盐处理组的1.20倍，是基因沉默组的2.08倍，表明GmCHS5过量表达的转基因大豆根耐盐能力显著提升。

【技术实现步骤摘要】
大豆耐盐基因GmCHS5及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及大豆耐盐基因GmCHS5及其应用。
技术介绍
土壤盐渍化是一个全球性的生态问题，全世界接近20％的灌溉土壤受到盐渍化的威胁，且耕地盐渍化状况日趋严峻。其中，我国约有3460万公顷的土地遭受盐渍化危害，约占全国可耕地面积的25％。土壤中高浓度的盐分导致植物生长减缓甚至死亡，是限制作物产量的主要非生物逆境因子之一。如何减轻盐胁迫对农业生产的影响，从而使大面积的盐碱地、荒漠化土地和丰富的盐水资源可以为农业生产所利用，这是未来农业发展所面临的一个重要课题。土壤中盐胁迫涉及多种基因和大分子的协调作用，主要通过Na+对植物造成损伤。Na+进入细胞后引起过氧化物的积累，过量的活性氧化物会损害蛋白质、核酸以及其它大分子的结构与功能，甚至导致细胞死亡目前，研究耐盐胁迫的主要方法是耐盐植物盐胁迫下相关基因的表达产物蛋白的研究日益受到重视，通过对基因敲除突变体或转基因重组体与野生型个体间蛋白图谱的差异进行对比分析，从而实现对新基因的功能分析。目前，公开的耐盐基因很多，例如，耐盐基因CcSOS1具有菊花耐盐功能(CN102559702A)、OsPEX11基因具有提高水稻耐盐性中的应用(CN105838722A)，耐盐基因TaOPR具有提高小麦耐盐性中的应用(CN102121008A)、耐盐基因TaSOD2具有提高小麦耐盐性中的应用(CN104328128A)。但是目前大豆耐盐基因报道较少，其中较为常见的为大豆耐盐基因GmCIPK2(CN104726476A)和大豆耐盐基因GmCBL3(CN104726479A)，但是这两种基因具体是在提高拟南芥的耐盐性方面有较好的生物学功能。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供提供大豆耐盐基因GmCHS5及其应用，使所述基因或重组载体能够有效提高大豆的耐盐性。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种大豆耐盐蛋白GmCHS5，具有如序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。本专利技术提供了所述的大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，具有如序列表中SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。本专利技术提供了一种含有所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP。本专利技术提供了所述的编码基因或所述的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP在培育抗盐植物中的应用。优选的，所述抗盐植物包括大豆。优选的，所述大豆包括中黄35品种。本专利技术还提供了一种提高大豆耐盐性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)克隆大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，得到大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因；2)将所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因构建重组载体，将得到的重组载体转化入宿主菌中，筛选阳性菌，提取阳性质粒；3)将所述步骤2)得到的阳性质粒构建真核表达载体；4)将所述步骤3)得到的真核表达载体转化入大豆宿主。优选的，所述步骤1)中克隆用的引物对具有序列表中SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核苷酸序列。优选的，所述步骤4)中转化的方法为农杆菌转化。本专利技术提供了一种大豆耐盐蛋白GmCHS5，具有如序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。本专利技术提供了所述的大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，具有如序列表中SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。本专利技术提供了一种含有权利要求2所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP。本专利技术利用植物基因工程技术，通过根瘤农杆菌介导的方法将基因转入大豆中，GmCHS5过量表达的转基因大豆根耐盐能力显著提升。经过200mM的高浓度盐水处理后，转基因大豆根的鲜重是野生型盐处理组的1.20倍，是基因沉默组的2.08倍。附图说明图1为本专利技术构建的表达载体图谱；图2为实施例4中各实验组盐胁迫表型结果。具体实施方式本专利技术提供了一种大豆耐盐蛋白GmCHS5，具有如序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。本专利技术中，所述一种大豆耐盐蛋白GmCHS5的制备方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的蛋白合成方法即可。本专利技术提供了所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，具有如序列表中SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。本专利技术中，所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的合成方法没有特限制，采用本领域技术人员所熟知的合成方法即可。本专利技术中，所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的获得方法，优选采用根据大豆的cDNA为模板扩增得到。所述扩增用引物优选为OECHS5-F和OECHS5-R。所述OECHS5-F优选为具有序列表中SEQIDNo.3所示的核苷酸序列的引物。所述OECHS5-R优选为具有序列表中SEQIDNo.4所示的核苷酸序列的引物。本专利技术提供了一种含有所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP。本专利技术中，含有所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP构建方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的构建方法即可。本专利技术提供了所述的编码基因或所述的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP在培育抗盐植物中的应用。本专利技术中，所述抗盐植物优选包括大豆。所述大豆优选包括中黄35品种。本专利技术还提供了一种提高大豆耐盐性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)克隆大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，得到大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因；2)将所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因构建重组载体，将得到的重组载体转化入宿主菌中，筛选阳性菌，提取阳性质粒；3)将所述步骤2)得到的阳性质粒构建真核表达载体；4)将所述步骤3)得到的真核表达载体转化入大豆宿主。本专利技术先克隆大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，得到大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因。本专利技术中，所述步骤1)中克隆用的引物对优选具有序列表中SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核苷酸序列。得到大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因后，本专利技术将所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因构建重组载体，将得到的重组载体转化入宿主菌中，筛选阳性菌，提取阳性质粒。本专利技术中，所述构建重组载体的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的构建方法即可。所述转化的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的转化方法即可。所述筛选阳性菌和提取阳性质粒的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的方案即可。得到阳性质粒后，本专利技术将所述阳性质粒构建真核表达载体。本专利技术中，所述构建真核表达载体的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的构建方法即可。得到真核表达载体后，本专利技术将所述的真核表达载体转化入大豆宿主。本专利技术中，所述转化的方法优选为农杆菌转化。得到转化后的大豆宿主后，本专利技术优选对大豆宿主进行验证。所述验证的方法优选采用基因敲除的方法验证。所述基因敲除的方法优选包括一下步骤：a.构建基因沉默载体；b.将所述基因沉默载体侵染有真核表达载体转化的转基因大豆根中；c.将所述基因沉默载体侵染的转基因大豆根与未被侵染的转基因大豆根同时进行盐处理，统计两者的根部鲜重；若基因沉默的盐处理组与基因沉默的对照组相比，转基因大豆根的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大豆耐盐蛋白GmCHS5，具有如序列表中SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种大豆耐盐蛋白GmCHS5，具有如序列表中SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因，具有如序列表中SEQIDNo.2所示的核苷酸序列。3.一种含有权利要求2所述大豆耐盐蛋白GmCHS5的编码基因的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP。4.权利要求2所述的编码基因或权利要求3所述的表达载体pDL28-HA-GmCHS5-GFP在培育抗盐植物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抗盐植物包括大豆。6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述大豆包括中黄35品种。7.一种提高大...

【专利技术属性】
技术研发人员：皮二旭，赵沁怡，李洋洋，朱成敏，黄盈盈，杜立群，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33