一种肾小球和肾小管复合损伤的猕猴慢性肾病模型的建立方法技术

本发明专利技术公开了阿霉素和/或顺铂联合本发明专利技术涉及阿霉素与顺铂联合使用在制备用于筛选治疗慢性肾病的动物模型中的用途，其中阿霉素的施用剂量为1～2mg/Kg/次，顺铂的施用剂量为2mg/kg/天；所述动物为灵长类动物。本发明专利技术还公开了一种制备慢性肾病的动物模型的方法。本发明专利技术方法可以有效建立伴有小球和小管间质复合损伤的猕猴慢性肾病动物模型，而且制备方法安全，可以用于相关药物的筛选，应用前景优良。

Method for establishing chronic kidney disease model of rhesus monkey with combined damage of glomerulus and renal tubule

The present invention discloses adriamycin and / or cisplatin combined with adriamycin and cisplatin combined with the present invention relates to the use in the preparation of animal model for screening purposes for the treatment of chronic kidney disease in the application, doxorubicin dose of 1 ~ 2mg/Kg/, the application dose of cisplatin for 2mg/kg/ days; the animal primate animal. The invention also discloses a method for preparing an animal model of chronic kidney disease. The method of the invention can effectively establish an animal model of chronic kidney disease of macaque with small ball and tubule interstitial damage, and the preparation method is safe, and can be used for the screening of related drugs, and has good application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种肾小球和肾小管复合损伤的猕猴慢性肾病模型的建立方法
本专利技术涉及慢性肾病的动物模型的建立，具体地，是伴有小球和小管间质复合损伤的猕猴慢性肾病动物模型的建立。
技术介绍
各种病理因素导致的慢性肾病(CKD)是人类心血管疾病、早衰及终末期肾病的主要风险因素之一。成年人慢性肾病发病率为8％-12％。西方国家，慢性肾病患病率在65岁以上老年人中达到25％；中国11.5％左右，城市(13％)高于农村(10％)。在CKD患者中，仅8.7％被诊断，4.9％患者得到治疗。CKD具有发病率高、伴发心血管病患病率高、病死率高；对CKD的知晓率低、防治率低、伴发心血管病知晓率低“三高三低”特点。随我国人群饮食结构和生活习惯的改变，其他的继发性慢性肾病正不断增多，如糖尿病肾病、高血压肾病等使慢性肾病的防治工作面临严峻挑战。目前针对慢性肾病的应用基础研究实验对象主要是啮齿类动物，研究结果的应用有很大局限性，非人灵长类动物作为目前动物界最高等种群，在解剖结构、生理代谢及免疫系统等与人类有高度相似性，大概有98.5％的基因与人类具有同源性，是级别最高的非人慢性肾病模型使用物种，但利用非人灵长类动物建立模拟人类慢性肾病发生发展过程的慢性肾病模型不多，尤其兼顾肾小球和肾小管损伤模型很少，目前文献仅报道猴免疫缺陷病毒SHIV诱导，因SHIV存在人源性感染的风险，安全性差，因此有必要探索新的、安全的方法建立此类模拟人类慢性肾病模型，为后期研究打下良好的模型基础。
技术实现思路
本专利技术的技术方案是提供了一种伴有小球和小管间质复合损伤的慢性肾病动物模型的构建方法。本专利技术提供了阿霉素和/或顺铂在制备用于筛选治疗慢性肾病的动物模型中的用途，其中阿霉素的施用剂量为1～2mg/Kg/次，顺铂的施用剂量为2mg/kg/天；所述动物为灵长类动物。其中，使用阿霉素和顺铂时，阿霉素和顺铂的给药方式为：先给予阿霉素，每周1次，第1-4周剂量分别为4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg和2mg/kg；停药1周后，开始加用顺铂，每间隔一周1次给药，连续4次，剂量为2mg/kg，加顺铂同时给予阿霉素，剂量为2mg/kg。其中，使用阿霉素或顺铂时，阿霉素的给药方式为：先给予阿霉素，每周1次，第1-4周剂量分别为4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg和2mg/kg；停药1周后，每间隔一周1次给药，连续4次，剂量为2mg/kg；顺铂的给药方式为：给药2次，第1次给药后60天再给一次，给药剂量为5mg/kg。其中，所述阿霉素为静脉注射施药；所述的顺铂为腹腔注射施药。其中，所述的动物模型是伴有小球和小管间质复合损伤的猕猴动物慢性肾病动物模型。本专利技术还提供了前述慢性肾病的动物模型的制备方法，它是将阿霉素和/或顺铂施用于灵长类动物，其中阿霉素的施用剂量为1～2mg/Kg/次，顺铂的施用剂量为2mg/kg/天。其中，使用阿霉素和顺铂时，阿霉素和顺铂的给药方式为：先给予阿霉素，每周1次，第1-4周剂量分别为4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg和2mg/kg；停药1周后，开始加用顺铂，每间隔一周1次给药，连续4次，剂量为2mg/kg，加顺铂同时给予阿霉素，剂量为2mg/kg。其中，使用阿霉素或顺铂时，阿霉素的给药方式为：先给予阿霉素，每周1次，第1-4周剂量分别为4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg和2mg/kg；停药1周后，每间隔一周1次给药，连续4次，剂量为2mg/kg；顺铂的给药方式为：给药2次，第1次给药后60天再给一次，给药剂量为5mg/kg。其中，所述阿霉素为静脉注射施药；所述的顺铂为腹腔注射施药。其中，所述灵长类动物为猕猴。本专利技术还提供了一种筛选治疗慢性肾病的药物的方法，包括如下步骤：a、按照前述的方法建立的慢性肾病模型；b、将候选物施用于a步骤所述的慢性肾病模型；c、用慢性肾病动物模型评价潜在的治疗慢性肾病的药物。本专利技术方法可以有效建立伴有小球和小管间质复合损伤的猕猴慢性肾病动物模型，而且制备方法安全，可以用于相关药物的筛选，应用前景优良。由于灵长类动物本身的特殊性，采用药物的方式建立慢性肾病动物模型非常困难，本专利技术采用特定的药物剂量和给药次数，成功制备得到了猕猴慢性肾病动物模型，效果显著。根据本专利技术的上述内容，按照本专利技术相关领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。附图说明图1建模第120天时肾小球HE、Masson和PASM染色。蓝染胶原纤维主要表达于肾小囊壁层周边，肾小球系膜区也呈不同程度蓝染。除正常组外，余三组蓝色较深，范围较广，阿霉素组和联合组更加明显。PASM染色见黑色银染颗粒主要沉积于肾小球内系膜区，显示系膜轻-中度局灶节段性硬化不伴系膜基质增生、系膜局部增厚。联合组较阿霉素组和顺铂组更典型，局部足细胞肿胀、空泡样变性。阿霉素组、顺铂组肾小球内皮细胞、系膜细胞无明显增生、血管腔无明显受压、未见到明显炎性细胞浸润，联合组局部肾小球血管腔扩张，×400。图2建模第120天时肾小管HE、Masson和PASM染色。阿霉素组肾小管部分管腔缩小、肾小管上皮细胞增高、管周胶原纤维化；顺铂组大部分肾小管管腔扩张，肾小管上皮细胞水肿变性及空泡样变性明显、管周胶原纤维化。联合组肾小管管腔缩小，呈中-重度萎缩、肾小管上皮细胞增高、管周胶原纤维化。阿霉素组、顺铂组及联合组管周无明显银染颗粒沉积，间质内无明显炎性细胞浸润，×400。具体实施方式实施例1本专利技术动物模型的制备1材料和方法1.1主要材料和试剂雌性猕猴12只，购自四川宜宾横竖生物科技有限公司。初始体重4.5±0.5kg，猕猴单笼喂养，专用饲料喂养，每日2次，每次饲料后加一个苹果，清洁饮水。PASM试剂盒来(货号36-47，北京环宇金鹰科技)、Masson试剂盒(货号D026，南京建成)、阿霉素冻干粉(产品编码：1599494734，山东普德药业)、顺铂(产品编号：A14200156601，齐鲁制药)，余为常规化学分析纯试剂。1.2建模和分组雌性猕猴12只，体重(4.5±0.5kg)，分4组，每组3只。分别为正常组、阿霉素组、顺铂组和阿霉素+顺铂联合组。联合组给药方式为阿霉素静脉给药，每周1次，第1-4周剂量分别为4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg和2mg/kg，停药1周，开始加用顺铂，每间隔一周1次给药，连续4次，腹腔注射，剂量为2mg/kg，加顺铂同时给予阿霉素，剂量为2mg/kg；阿霉素组同联合组阿霉素给药方法；顺铂组腹腔注射5mg/kg，第60天时再重复一次。在给药第0、30、60、90、120天检测血清肌酐、尿素氮、肾小球滤过率、总蛋白、白蛋白、肝功血钙、磷指标。1.3猕猴肾组织HE、Masson和PASM染色给药第120天，肾脏穿刺活检，常规石蜡包埋切片，片厚5μm，进行肾组织HE、Masson和PASM染色。1.3.1HE染色：常规二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后水洗2次，每次3分钟。苏木素染色5分钟，1％盐酸乙醇分化、1/400氨水反蓝后水洗，伊红2分钟，水洗后梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片后镜下观察肾皮质肾小球皮质部位肾小管病理变化。1.3.2Masson染色：石蜡切片脱蜡至水，依次自来水和蒸馏水洗。苏木精本文档来自技高网...

【技术保护点】
阿霉素和/或顺铂在制备用于筛选治疗慢性肾病的动物模型中的用途，其中阿霉素的施用剂量为1～2mg/Kg/次，顺铂的施用剂量为2mg/kg/天；所述动物为灵长类动物。

【技术特征摘要】
1.阿霉素和/或顺铂在制备用于筛选治疗慢性肾病的动物模型中的用途，其中阿霉素的施用剂量为1～2mg/Kg/次，顺铂的施用剂量为2mg/kg/天；所述动物为灵长类动物。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：使用阿霉素和顺铂时，阿霉素和顺铂的给药方式为：先给予阿霉素，每周1次，第1-4周剂量分别为4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg和2mg/kg；停药1周后，开始加用顺铂，每间隔一周1次给药，连续4次，剂量为2mg/kg，加顺铂同时给予阿霉素，剂量为2mg/kg。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：使用阿霉素或顺铂时，阿霉素的给药方式为：先给予阿霉素，每周1次，第1-4周剂量分别为4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg和2mg/kg；停药1周后，每间隔一周1次给药，连续4次，剂量为2mg/kg；顺铂的给药方式为：给药2次，第1次给药后60天再给一次，给药剂量为5mg/kg。4.根据权利要求1-3任意一项所述的用途，其特征在于：所述阿霉素为静脉注射施药；所述的顺铂为腹腔注射施药。5.根据权利要求1-4任意一项所述的用途，其特征在于：所述的动物模型是伴有小球和小管间质复合损伤的猕猴动物慢性肾病动物模型。6.一种制备慢性肾病的动物模型的方法，其特征在于：它是将阿霉...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊均明，陈波，王丽，王正武，谭睿陟，
申请(专利权)人：樊均明，陈波，
类型：发明
国别省市：四川,51