生物标记物制造技术

本发明专利技术提供了胰岛素信号肽的结合剂和测定法。上述结合剂和测定法可用于预测、诊断、评估或监测对象的急性心脏疾病、葡萄糖代谢障碍以及糖尿病的方法中。还提供了可用于本发明专利技术的方法中的核苷酸、多肽、以及试剂盒。

Biomarkers

The present invention provides a binding agent and assay for an insulin signaling peptide. The binding agents and assays may be used in predicting, diagnosing, evaluating, or monitoring acute heart disease, glucose metabolism disorders, and diabetes in subjects. Nucleotides, polypeptides, and kits for use in the methods of the invention are also provided.

【技术实现步骤摘要】
生物标记物本申请是中国专利申请200980108620.4的分案申请，原申请的申请日是2009年3月12日，专利技术名称为“生物标记物”。
本专利技术涉及胰岛素信号肽(INS-SP)以及其在预后、诊断和监测生物事件障碍或状态方面的应用，其中上述生物事件疾病或状态导致标记物释放到循环(血循环，circulation)中。上述事件包括葡萄糖代谢障碍、糖尿病以及相关病症如心血管疾病，尤其是急性心脏疾病。
技术介绍
糖尿病是一种代谢病，其特征在于胰岛素分泌、胰岛素作用其中之一缺乏或全部缺乏。这些缺乏导致慢性高血糖症。糖尿病还具有许多相关病症(包括肥胖症)以及增加风险的心脏疾病(包括心血管疾病)。糖尿病在全世界影响1.7亿以上的人，并且预计在未来20年会加倍。糖尿病分为两种类型，称作I型糖尿病和II型糖尿病。I型糖尿病是一种自身免疫相关疾病，其中个体的免疫系统会破坏胰腺的β细胞。患有I型糖尿病的个体通常是胰岛素依赖的。他们呈现有限的胰岛素分泌(若有的话)。II型糖尿病是最常见形式，占90至95％的病例。大多数II型糖尿病对象并不是胰岛素依赖的，但呈现胰岛素分泌和胰岛素作用缺乏，从而导致高血糖症。高血糖症常常是温和的并具有难以识别的症状。因此，许多II型糖尿病对象许多年间都未被确诊。在任何特定时间，据估计，10至15％的群体可能具有发展成II型糖尿病的危险，但未被确诊。糖尿病最常见是基于用来评估葡萄糖代谢(葡萄糖处理，glucosehandling)的口服葡萄糖耐量试验来诊断。在隔夜空腹以后给予个体葡萄糖饮料以测试个体对葡萄糖的耐受性。该测试进行数小时以测量反应。不幸的是，葡萄糖耐量试验和空腹胰岛素水平测试缺乏敏感性，并且存在假阳性，其限制了它们作为糖尿病的预后指标的有用性。糖尿病是心血管疾病的重要的危险因子，会使心脏事件的风险增加两至三倍。尽管认识到需要诊断和预后工具来评估个体发展糖尿病、前体葡萄糖代谢障碍、以及相关病症如心血管疾病的风险，但并没有简单而准确的测试。本专利技术的一个目的是以一定方式来满足这些需要和/或至少为公众提供有用的选择。糖尿病和前体葡萄糖代谢障碍、或任何其它形式的血糖代谢障碍或胰岛素血异常的早期诊断和正在进行的评估是重要的，不仅用于处理糖尿病，而且用于处理相关病症，如心血管疾病。除为与血糖代谢障碍或胰岛素血异常有关的病症、疾病提供早期检测方法以外，例如，本专利技术还具有更广泛的应用(包括在心血管领域)。包括急性冠状动脉综合征(ACS)的急性心脏疾病涉及各种不同的心肌缺血事件：从不稳定型心绞痛到急性心肌梗死(AMI)。AMI表现为这些事件中最严重的事件，因而需要快速和准确的诊断。呈现两种或更多种所描述特点(缺血性胸部不适的病史、系列心电图(ECG)迹线的进化改变以及血浆心脏生物标记物的起落)的对象被明确确定为正经历AMI26。然而，相当一部分呈现疑似AMI的对象(40％-50％)并不具有ECG的系列变化、或典型的症状，因此更关注循环生物标记物浓度，以获得准确的诊断26,27。心肌梗死的准确的早期诊断便于立刻采用再灌注治疗，包括有效的经皮或溶栓血管再生成以及附属的抗凝血和抗血小板治疗。随着每小时的诊断和处理延迟，上述治疗在减小死亡率和发病率方面的有效性逐步降低2-4。鉴于在这种临床情况中需要加速决策，所以需要鉴定循环生物标记物，以提供急性心脏疾病(尤其是，例如AMI)的早期和具体诊断。目前的临床指南确实强调在鉴定心肌梗死和急性冠状动脉综合征中生物标记物测量的重要性26。许多生物标记物已被提出用于此目的，包括肌酸激酶-MB(CK-MB)、肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)、BNP、N-BNP(还称作NP-BNP)、BNP信号肽(BNP-SP)以及肌红蛋白，但对它们的使用存在限制。至血浆心脏生物标记物的可检测或异常升高的时间可以是6小时(肌红蛋白，CK-MB)至12小时(TnT、TnI、BNP、N-BNP)，其中最高水平直到损伤发作以后的24-48小时才发生，这对精确的诊断和治疗强加了延迟窗口1-4。此外，肌红蛋白和CK-MB均是非特异性的并且可以分泌自心外来源，尤其是在外伤或手术期间1。因而，已知标记物的长期诊断/预测能力缺乏特异性标记物的伴随能力，其中特异性标记物在临床表现的最初几小时内提供急性心脏疾病如急性心肌损伤的早期具体诊断。因此仍然需要早期标记物。本专利技术的另一个目的是提供急性心脏疾病的早期标记物，和/或至少向公众提供有用的选择。
技术实现思路
人胰岛素信号肽(INS-SP)是切割自胰岛素原(前胰岛素原)(1-110)SEQIDNO:1的24个氨基酸肽。人胰岛素的处理示于图4中。INS-SP(1-24)被分开显示在SEQIDNO:14中。本专利技术的申请人已首次发现，INS-SP以及其片段被释放到循环中。确定和提供了有用的循环生物标记物。先前认为，INS-SP仅在细胞内产生25。基于此发现，本专利技术的申请人在本专利技术的一个方面提供了用于在对象中预测、诊断、评估或监测生物事件或障碍的方法，其中上述事件或障碍与一种或多种INS-SP生物标记物释放到循环中有关，该方法包括测量在获自或源自对象的样品中一种或多种INS-SP生物标记物的水平，然后连同所述一种或多种生物标记物的各自的参考值范围对上述水平进行分析。在一种实施方式中，INS-SP生物标记物是INS-SP。在另一种实施方式中，INS-SP生物标记物是INS-SP片段。在一种优选实施方式中，INS-SP片段是人INS-SP(1-9)(SEQIDNO:16)。在另一种优选实施方式中，INS-SP片段是人INS-SP(15-24)SEQIDNO:18。在其它优选实施方式中，INS-SP片段包括人INS-SP(1-9)(SEQIDNO:16)或人INS-SP(15-24)SEQIDNO:18。在另一种实施方式中，该方法包括比较在获自或源自对象的一个或多个样品中INS-SP生物标记物、优选INS-SP片段的水平与来自对照的INS-SP生物标记物水平，其中测量水平与对照水平的偏差指示生物事件或障碍。在糖尿病对象如I型糖尿病对象中，或在患有另一种血糖代谢障碍(由降低的胰岛素分泌水平造成)的对象中，胰岛素水平将不同于正常水平，如INS-SP和/或INS-SP片段水平。此发现表明，INS-SP可用作上述病症的标记物。取决于对象的胰岛素状态，在对象中的INS-SP生物标记物水平将比正常水平更高或更低。在糖尿病对象，如II型糖尿病对象中，或在患有另一种胰岛素血异常(dysinsulinemia)的对象中，胰岛素水平将不同于正常水平，如INS-SP和/或INS-SP片段水平。此发现表明，INS-SP和/或INS-SP片段也可用作上述病症以及其它高胰岛素血状态(hyperinsulinemicstates)如代谢综合征的标记物。取决于对象的胰岛素状态，在对象中的INS-SP生物标记物水平将比正常水平更高或更低。因此，在另一个方面，本专利技术提供了用于预测、诊断、评估或监测糖尿病或糖尿病可能性(潜在糖尿病，diabetespotential)、以及特点在于血糖代谢障碍和/或胰岛素血异常的其它病症的方法，该方法包括测量在获自或源自对象的样品中一种或多种INS-SP生物标记物的水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰岛素信号肽(INS‑SP)结合剂。

【技术特征摘要】
2008.03.12 US 61/035,7701.一种胰岛素信号肽(INS-SP)结合剂。2.一种编码INS-SP片段的分离的核酸分子，其中，所述核酸选自：(a)IDNO:17或其变体或片段；(b)SEQIDNO:19或其变体或片段；(c)相对于SEQIDNO:17或SEQIDNO:19具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列；(d)长度为至少10个核苷酸、能够在严格条件下杂交于SEQIDNO:17或SEQIDNO:19或它们的变体或片段的序列；(e)(a)至(d)中任何一种的补体，条件是所述序列不是SEQIDNO:15。3.一种包含根据权利要求7所述的核酸分子的基因构建体，其包括载体、表达构建体、或宿主细胞。4.一种分离的INS-SP多肽，选自：(a)INS-SP(1-9)(SEQIDNO:16)或其变体或片段；(b)INS-SP(15-24)(SEQIDNO:18)或其变体或片段；(c)相对于SEQIDNO:16或SEQIDNO:18的多肽具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列；以及(d)由根据权利要求2所述的核酸分子编码的INS-SP多肽。5.根据权利要求4所述的多肽在制备抗INS-SP抗体中的应用。6.一种对来自对象的生物样品中的INS-SP的测定法，所述测定法包括利用任何已知方法检测和测量在所述样品中的INS-SP水平。7.一种对INS-SP的测定法，包括：(a)结合来自生物样品的一种或多种INS-SP；以及(b)测量结合INS-SP的水平。8.一种INS-SP测定法，用于在对象中预测、诊断或监测生物事件或障碍。9.一种用于在对象中预测、诊断或监测生物事件或障碍的方法，其中，所述事件或障碍与INS-SP释放到循环中有...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托弗·约瑟夫·彭伯顿，阿瑟·马克·理查兹，迈克尔·加里·尼科尔斯，蒂莫西·格兰特·扬德尔，
申请(专利权)人：奥塔哥创新有限公司，
类型：发明
国别省市：新西兰,NZ