胚培养基和胚培养方法以及胚培养方法的应用技术

本发明专利技术提供了一种胚培养基和胚培养方法以及胚培养方法的应用，涉及植物工程的技术领域。本发明专利技术提供的胚培养基通过不断的尝试和改良而确定，本发明专利技术提供的胚培养基结合本发明专利技术提供的胚培养方法，能够有效提高胚的成熟率，尤其是能够提高高加索三叶草与白三叶杂交F1代杂交胚的成熟率，有利于高加索三叶草与白三叶的远缘杂交育种。

Embryo culture medium and embryo culture method and embryo culture method

The invention provides an embryo culture medium and an embryo culture method, and the application of embryo culture methods, relating to the technical field of plant engineering. Determine the base through trial and improvement of the invention provides the embryo culture, the invention provides a method of embryo culture medium combination provided by the invention can effectively improve the embryo culture, embryo maturation rate, especially to improve the Caucasian clover and white clover hybrid F1 hybrid embryo maturation rate, is conducive to the breeding of distant hybridization between the Caucasus clover and white clover.

【技术实现步骤摘要】
胚培养基和胚培养方法以及胚培养方法的应用
本专利技术涉及植物工程
，尤其是涉及一种胚培养基和胚培养方法以及胚培养方法的应用。
技术介绍
胚，是由受精卵发育而成的新一代植物体的雏型，是种子重要的组成部分。由胚发育最终形成幼苗的过程，是得到新一代植株非常重要的一个过程。然而对于某些植物，胚的成熟率极低，很难发育成幼苗。因此，在这种情况下，就需要人为进行胚的离体培养，以提高胚的成熟率。目前常用的胚离体培养基，大多含有激素，对于植株的正常发育会产生一定的影响。因此，找到合适的胚离体培养基以提高胚的成熟率，具有重要的指导意义。除了胚自然成熟率低现象的存在，在植物远缘杂交育种中，最常面临的问题就是杂种胚败育，其成熟率很低或难以发育成幼苗，导致最终不能获得杂交种。以三叶草属牧草为例，三叶草属牧草具有品质优良、营养丰富、固氮能力强等多种优点，尤以具有强抗逆性的六倍体高加索三叶草品种，和具有强固氮能力的四倍体大兴安岭野生白三叶为例，为了培育出结合双亲优良性状的三叶草新品种，以高加索三叶草为母本、白三叶为父本进行远缘杂交，但人工杂交后，其F1代杂交胚的成熟率极低，很难得到成熟幼苗。因此，通过培养基的改良以提高高加索三叶草与白三叶杂交F1代杂交胚的成熟率，获得杂种F1代植株，具有重要的意义。因此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种胚离体培养基，本专利技术的第二个目的在于提供一种胚培养方法，本专利技术的第三个目的在于提供所述胚培养方法的应用，以缓解现有技术中存在的胚成熟率低的技术问题。本专利技术提供的一种胚培养基，所述胚培养基包括：KCl，终浓度为58.5-71.5mg/mL；KNO3，终浓度为72-88mg/mL；Ca(NO3)·4H2O，终浓度为270-330mg/mL；MgSO4·7H2O，终浓度为648-792mg/mL；NaH2PO4·H2O，终浓度为14.85-18.15mg/mL；Na2SO4，终浓度为180-220mg/mL；ZnSO4·7H2O，终浓度为2.7-3.3mg/mL；KI，终浓度为0.747-0.913mg/mL；H3BO3，终浓度为1.35-1.65mg/mL；Na2MoO4·2H2O，终浓度为0.225-0.275mg/mL；CoCl2·6H2O，终浓度为0.0225-0.0275mg/mL；CuSO4·5H2O，终浓度为0.0225-0.0275mg/mL；肌醇，终浓度为90-110mg/mL；VB5，终浓度为4.5-5.5mg/mL；VB1，终浓度为0.9-1.1mg/mL；VB6，终浓度为0.9-1.1mg/mL；CH，终浓度为2.25-2.75mg/mL；泛酸钙，终浓度为0.09-0.11mg/mL；FeSO4·7H2O，终浓度为25.065-30.635mg/mL以及Na2EDTA·2H2O，终浓度为33.525-40.975mg/mL。进一步的，所述胚培养基包括：KCl，终浓度为62-68mg/mL；KNO3，终浓度为76-84mg/mL；Ca(NO3)·4H2O，终浓度为285-315mg/mL；MgSO4·7H2O，终浓度为684-756mg/mL；NaH2PO4·H2O，终浓度为15.675-24.75mg/mL；Na2SO4，终浓度为190-210mg/mL；ZnSO4·7H2O，终浓度为2.85-3.15mg/mL；KI，终浓度为0.7885-0.8715mg/mL；H3BO3，终浓度为1.425-1.575mg/mL；Na2MoO4·2H2O，终浓度为0.2375-0.2625mg/mL；CoCl2·6H2O，终浓度为0.0238-0.0263mg/mL；CuSO4·5H2O，终浓度为0.0238-0.0263mg/mL；肌醇，终浓度为95-105mg/mL；VB5，终浓度为4.75-5.25mg/mL；VB1，终浓度为0.95-1.05mg/mL；VB6，终浓度为0.95-1.05mg/mL；CH，终浓度为2.375-2.625mg/mL；泛酸钙，终浓度为0.09-0.105mg/mL；FeSO4·7H2O，终浓度为26.4575-29.2425mg/mL以及Na2EDTA·2H2O，终浓度为35.3875-39.1125mg/mL。进一步的，所述胚培养基包括：KCl，终浓度为65mg/mL；KNO3，终浓度为80mg/mL；Ca(NO3)·4H2O，终浓度为300mg/mL；MgSO4·7H2O，终浓度为720mg/mL；NaH2PO4·H2O，终浓度为16.5mg/mL；Na2SO4，终浓度为200mg/mL；ZnSO4·7H2O，终浓度为3mg/mL；KI，终浓度为0.83mg/mL；H3BO3，终浓度为1.5mg/mL；Na2MoO4·2H2O，终浓度为0.25mg/mL；CoCl2·6H2O，终浓度为0.025mg/mL；CuSO4·5H2O，终浓度为0.025mg/mL；肌醇，终浓度为100mg/mL；VB5，终浓度为5mg/mL；VB1，终浓度为1mg/mL；VB6，终浓度为1mg/mL；CH，终浓度为2.5mg/mL；泛酸钙，终浓度为0.1mg/mL；FeSO4·7H2O，终浓度为27.85mg/mL以及Na2EDTA·2H2O，终浓度为37.25mg/mL。进一步的，所述胚为高加索三叶草与白三叶远缘杂交F1代的胚。另外，本专利技术还提供了一种胚培养方法，所述胚培养方法应用了所述的胚培养基。进一步的，所述胚培养方法包括将胚消毒后，接种于离体培养基上，进行离体培养；所述离体培养基通过在所述胚培养基添加蔗糖和琼脂制得。进一步的，所述离体培养的温度为25～29℃，所述离体培养的光照时间为11～12h，所述离体培养的光照强度为18000～22000μmol/m2·s。进一步的，所述离体培养基中，所述蔗糖的含量为2％，所述琼脂的含量为0.7％。进一步的，所述胚为高加索三叶草与白三叶远缘杂交F1代的胚。另外，本专利技术还提供了所述的胚培养方法在高加索三叶草与白三叶杂交育种中的应用。本专利技术提供的胚培养基通过不断的尝试和改良而确定，本专利技术提供的胚培养基结合本专利技术提供的胚培养方法，能够有效提高胚的成熟率，尤其是能够提高高加索三叶草与白三叶杂交F1代杂交胚的成熟率，有利于高加索三叶草与白三叶的杂交育种。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供了一种胚培养基，包括：KCl，KNO3，Ca(NO3)·4H2O，MgSO4·7H2O，NaH2PO4·H2O，Na2SO4，ZnSO4·7H2O，KIH3BO3，Na2MoO4·2H2O，CoCl2·6H2O，CuSO4·5H2O，肌醇，VB5，VB1，VB6，CH，泛酸钙，FeSO4·7H2O以及Na2EDTA·2H2O。其中，KCl的终浓度为58.5-71.5mg/mL，例如可以为58.5、59.8、61.75、63.05、65、66.95、68.25、70.2或者71.5mg/mL。KNO3，终浓本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胚培养基，其特征在于，所述胚培养基包括：KCl，终浓度为58.5‑71.5mg/mL；KNO3，终浓度为72‑88mg/mL；Ca(NO3)·4H2O，终浓度为270‑330mg/mL；MgSO4·7H2O，终浓度为648‑792mg/mL；NaH2PO4·H2O，终浓度为14.85‑18.15mg/mL；Na2SO4，终浓度为180‑220mg/mL；ZnSO4·7H2O，终浓度为2.7‑3.3mg/mL；KI，终浓度为0.747‑0.913mg/mL；H3BO3，终浓度为1.35‑1.65mg/mL；Na2MoO4·2H2O，终浓度为0.225‑0.275mg/mL；CoCl2·6H2O，终浓度为0.0225‑0.0275mg/mL；CuSO4·5H2O，终浓度为0.0225‑0.0275mg/mL；肌醇，终浓度为90‑110mg/mL；VB5，终浓度为4.5‑5.5mg/mL；VB1，终浓度为0.9‑1.1mg/mL；VB6，终浓度为0.9‑1.1mg/mL；CH，终浓度为2.25‑2.75mg/mL；泛酸钙，终浓度为0.09‑0.11mg/mL；FeSO4·7H2O，终浓度为25.065‑30.635mg/mL以及Na2EDTA·2H2O，终浓度为33.525‑40.975mg/mL。...

【技术特征摘要】
1.一种胚培养基，其特征在于，所述胚培养基包括：KCl，终浓度为58.5-71.5mg/mL；KNO3，终浓度为72-88mg/mL；Ca(NO3)·4H2O，终浓度为270-330mg/mL；MgSO4·7H2O，终浓度为648-792mg/mL；NaH2PO4·H2O，终浓度为14.85-18.15mg/mL；Na2SO4，终浓度为180-220mg/mL；ZnSO4·7H2O，终浓度为2.7-3.3mg/mL；KI，终浓度为0.747-0.913mg/mL；H3BO3，终浓度为1.35-1.65mg/mL；Na2MoO4·2H2O，终浓度为0.225-0.275mg/mL；CoCl2·6H2O，终浓度为0.0225-0.0275mg/mL；CuSO4·5H2O，终浓度为0.0225-0.0275mg/mL；肌醇，终浓度为90-110mg/mL；VB5，终浓度为4.5-5.5mg/mL；VB1，终浓度为0.9-1.1mg/mL；VB6，终浓度为0.9-1.1mg/mL；CH，终浓度为2.25-2.75mg/mL；泛酸钙，终浓度为0.09-0.11mg/mL；FeSO4·7H2O，终浓度为25.065-30.635mg/mL以及Na2EDTA·2H2O，终浓度为33.525-40.975mg/mL。2.根据权利要求1所述的胚培养基，其特征在于，所述胚培养基包括：KCl，终浓度为62-68mg/mL；KNO3，终浓度为76-84mg/mL；Ca(NO3)·4H2O，终浓度为285-315mg/mL；MgSO4·7H2O，终浓度为684-756mg/mL；NaH2PO4·H2O，终浓度为15.675-24.75mg/mL；Na2SO4，终浓度为190-210mg/mL；ZnSO4·7H2O，终浓度为2.85-3.15mg/mL；KI，终浓度为0.7885-0.8715mg/mL；H3BO3，终浓度为1.425-1.575mg/mL；Na2MoO4·2H2O，终浓度为0.2375-0.2625mg/mL；CoCl2·6H2O，终浓度为0.0238-0.0263mg/mL；CuSO4·5H2O，终浓度为0.0238-0.0263mg/mL；肌醇，终浓度为95-105mg/mL；VB5，终浓度为4.75-5.25mg/mL；VB1，终浓度为0.95-1.05mg/mL；VB6，终浓度为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄帆，李俊，刘磊，李志勇，李鸿雁，师文贵，解永凤，
申请(专利权)人：中国农业科学院草原研究所，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15