一种铁皮石斛的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种铁皮石斛的组织培养方法，取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1‑2片真叶高度为1.5‑2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5‑2.5cm、含1‑2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50‑60天，即得。本发明专利技术方法对铁皮石斛进行组织培养时，增殖率高达358.5%，幼苗长势好。

Tissue culture method of Dendrobium officinale

The invention discloses a method for culturing Dendrobium tissue from protocorm, in rooting medium, to grow 1 2 leaf height is 1.5 2.5cm Dendrobium seedlings; the height of 1.5 2.5cm, 1 containing 2 leaves of Dendrobium seedlings. The seedlings inoculated in culture medium, cultured for 50 60 days, i.e.. When the method is used for tissue culture of Dendrobium officinale, the multiplication rate is as high as 358.5%, and the seedlings grow well.

【技术实现步骤摘要】
一种铁皮石斛的组织培养方法
本专利技术涉及一种铁皮石斛的组织培养方法，特别是一种增殖率高的铁皮石斛的组织培养方法。
技术介绍
铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。现代药理学研究表明，铁皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用，在抗肿瘤、抗氧化、降低血糖以及白内障的治疗等方面，药理作用显著。其化学成分较复杂，已确定的化合物类型主要有：生物碱类、多糖类、菲类、联苄母核类，其中生物碱类、多糖类药理活性较为显著。石斛碱型倍半萜类生物碱为石斛属植物特有，其中石斛碱是最早发现，研究最多的生物碱；金钗石斛碱与非甾体类抗炎药药理作用相似，具有免疫调节、抗炎、扩张血管等作用。目前，利用组培技术对铁皮石斛在种质保存和快速繁殖方面已取得一定成就，但优良品种经数次继代或因激素使用不当、培养环境等因素，增殖率及低。
技术实现思路
本专利技术的目的，是提供一种铁皮石斛的组织培养方法，本专利技术方法对铁皮石斛进行组织培养时，增殖率高达358.5％，幼苗长势好。本专利技术是这样实现的。一种铁皮石斛的组织培养方法，取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50-60天，即得。前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述生根培养基按重量份计算主要由黄莲5-15份、白芍10-20份、血竭5-15份、三七10-20份、生姜5-15份、茯苓5-15份、蛋白胨1-10份、土豆1-10份、马铃薯1-5份和黄豆5-15份制成。前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述生根培养基按重量份计算，主要由黄莲10份、白芍15份、血竭10份、三七15份、生姜10份、茯苓10份、蛋白胨5份、土豆5份、马铃薯3份和黄豆10份制成。前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述生根培养基按下述步骤进行制备：(1)取黄莲、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得A品；(2)取土豆和马铃薯，加入5-6倍量水，打成浆，得B品；(3)取黄豆，粉碎成粉末，得C品；(4)A品、B品混合，加热至50-60℃，加入C品和蛋白胨，搅拌5-10min后，冷却至5-10℃，即得。前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述幼苗培养基按重量份计算主要由熟玉米泥10-20份、山药泥10-20份、芋头泥10-20份、琼脂1-5份和中药渣20-30份混匀，即得。前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述幼苗培养基按重量份计算，主要由熟玉米泥15份、山药泥15份、芋头泥15份、琼脂3份和中药渣25份混匀，即得。前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述中药渣主要由按重量份计算的葛根50-60份、威灵仙30-40份、夏枯草20-30份、合欢皮10-20份、穿心莲1-10份和苍术20-30份按下述方法制备：取葛根、威灵仙、夏枯草、合欢皮、穿心莲和苍术加5-6倍量水，煎煮2-3h，过滤，滤渣干燥，粉碎成粗颗粒，即得。前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述中药渣主要由按重量份计算的葛根55份、威灵仙35份、夏枯草25份、合欢皮15份、穿心莲5份和苍术25份按下述方法制备：取葛根、威灵仙、夏枯草、合欢皮、穿心莲和苍术加5.5倍量水，煎煮2.5h，过滤，滤渣干燥，粉碎成粗颗粒，即得。申请人对本专利技术进行了大量的实验研究，部分实验如下：实验例.1方法设置2个处理组，即本专利技术组和对比组。本专利技术组：按实施例1进行组织培养；对比组：组织培养方法同实施例1，但所述生根培养基中不含黄莲、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，所述幼苗培养基中不含中药渣。60d后观察，统计组培苗的生长情况。统计方法：生长值(cm)＝统计时平均株高-继代时平均株高；增殖率(％)＝(统计时苗总数一继代时苗总数)/初始苗总数×100％。2结果2.1对铁皮石斛组培苗生长的影响经50d培养后的生长情况见表1。表1对组培苗生长的影响组别生长值/cm增殖率/％对比组1.43253.6本专利技术组1.85358.5由表可知，本专利技术组生长值和增值率均高于对比组。与现有技术相比，用本专利技术方进行组织培养时，组培苗生长好，生长值和增殖率高,且培养基中不含激素。与现有技术相比，本专利技术方法对铁皮石斛进行组织培养时，增殖率高达358.5％，幼苗长势好。具体实施方式实施例1。一种铁皮石斛的组织培养方法，取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50-60天，即得。所述生根培养基配方：黄莲10kg、白芍15kg、血竭10kg、三七15kg、生姜10kg、茯苓10kg、蛋白胨5kg、土豆5kg、马铃薯3kg和黄豆10kg。所述生根培养基按下述步骤进行制备：(1)取黄莲、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加17倍量水煎煮5.5h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得A品；(2)取土豆和马铃薯，加入5.5倍量水，打成浆，得B品；(3)取黄豆，粉碎成粉末，得C品；(4)A品、B品混合，加热至50-60℃，加入C品和蛋白胨，搅拌8min后，冷却至5-10℃，即得。所述中药渣由葛根55kg、威灵仙35kg、夏枯草25kg、合欢皮15kg、穿心莲5kg和苍术25kg按下述方法制备：取葛根、威灵仙、夏枯草、合欢皮、穿心莲和苍术加4倍量水，煎煮2.5h，过滤，滤渣干燥，粉碎成粗颗粒，即得。实施例2.一种铁皮石斛的组织培养方法，取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养60天，即得。所述生根培养基配方：黄莲15kg、白芍20kg、血竭15kg、三七20kg、生姜15kg、茯苓15kg、蛋白胨10kg、土豆10kg、马铃薯5kg和黄豆15kg。所述生根培养基按下述步骤进行制备：(1)取黄莲、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加18倍量水煎煮6h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得A品；(2)取土豆和马铃薯，加入6倍量水，打成浆，得B品；(3)取黄豆，粉碎成粉末，得C品；(4)A品、B品混合，加热至50-60℃，加入C品和蛋白胨，搅拌10min后，冷却至5-10℃，即得。所述中药渣由葛根60kg、威灵仙40kg、夏枯草30kg、合欢皮20kg、穿心莲10kg和苍术30kg按下述方法制备：取葛根、威灵仙、夏枯草、合欢皮、穿心莲和苍术加6倍量水，煎煮3h，过滤，滤渣干燥，粉碎成粗颗粒，即得。实施例3.一种铁皮石斛的组织培养方法，取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50天，即得。所述生根培养基配方：黄莲5k本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铁皮石斛的组织培养方法，其特征在于：取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1‑2片真叶高度为1.5‑2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5‑2.5cm、含1‑2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50‑60天，即得。

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛的组织培养方法，其特征在于：取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50-60天，即得。2.如权利要求1所述的铁皮石斛的组织培养方法，其特征在于：所述生根培养基按重量份计算主要由黄莲5-15份、白芍10-20份、血竭5-15份、三七10-20份、生姜5-15份、茯苓5-15份、蛋白胨1-10份、土豆1-10份、马铃薯1-5份和黄豆5-15份制成。3.如权利要求2所述的铁皮石斛的组织培养方法，其特征在于：所述生根培养基按重量份计算，主要由黄莲10份、白芍15份、血竭10份、三七15份、生姜10份、茯苓10份、蛋白胨5份、土豆5份、马铃薯3份和黄豆10份制成。4.如权利要求2或3所述的铁皮石斛的组织培养方法，其特征在于：所述生根培养基按下述步骤进行制备：（1）取黄莲、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得A品；（2）取土豆和马铃薯，加入5-6倍量水，打成浆，得B品；（3）取黄豆，粉碎成粉末，得C品；（4）A品、B品混合，加热至50-60...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞金奎，周杭杰，
申请(专利权)人：贵州济生农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52