提取游离细胞的方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种提取游离细胞的方法及试剂盒，该方法包括：利用组织签移动穿刺针上的组织；将组织在A溶液中进行涮洗，获得游离细胞；将游离细胞在B溶液中进行保存。通过本发明专利技术方法提取游离细胞并用于基因组分析，不会对基因组产生任何影响，进而可以提高基因组分析结果的准确性，特别是解决了RNA的降解问题；另一方面，提取的细胞组织可以得到充分利用，避免浪费，不仅最大限度节约基因资源，还为临床微量珍贵标本的利用(如前列腺穿刺和内窥镜所取标本都使得及时检测基因表达情况成为了可能。

Method and kit for extracting free cells

The invention relates to a method for extracting free cell and kit, the method includes: using tissue puncture needle on the sign mobile organization; will organize shuanxi in A solution, get free cell; free cell preservation in B solution. Based on the method of extraction of free cells and used for genome analysis, will not have any effect on the genome, which can improve the accuracy of results of genome analysis, especially to solve the problem of degradation of RNA; on the other hand, the extracted tissue can be fully utilized, avoid waste, not only to maximize conservation of genetic resources, but also for use clinical trace invaluable specimens (such as prostate biopsy and endoscopic specimens were made timely detection of gene expression has become possible.

【技术实现步骤摘要】
提取游离细胞的方法及试剂盒
本专利技术涉及细胞检测
，特别涉及一种提取游离组织上细胞的方法及试剂盒。
技术介绍
在诊断细胞学或临床细胞学中，脱落细胞检查就是提取病人基因组，从细胞形态上诊断疾病。目前提取基因组的方法是，利用类似注射器的结构从患者体内抽吸细胞组织制成石蜡组织，然后从石蜡组织切白片提取基因组。其存在的缺点是：1、会引入人为突变。2、对于某些疾病诊断所需的石蜡切片量大，例如像前列腺穿刺这类微量标本10张白片可以提取的基因组不够下游检查用。3、过多的石蜡会干扰组织的基因组提取。4、绝大多数的RNA已经降解，导致下游检测不能进行或者检测结果不准确。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种提取组织上粘附的游离细胞的方法及试剂盒。为此，本专利技术实施例提供了以下技术方案：一种提取游离细胞的方法，包括以下步骤：利用组织签移动穿刺针上的组织；将组织在A溶液中进行涮洗，获得游离细胞；将涮洗获得的游离细胞在B溶液中进行保存；所述A溶液为包含Nacl、Na2Hpo4、KH2po4、稳定剂、双蒸水的混合液，所述B溶液为包含异硫氢酸胍、枸橼酸钠、双蒸水的混合液。根据本专利技术实施例，1升A溶液中各成分的含量分别为：Nacl＝8.5～9克，Na2Hpo4＝11～16克，KH2po4＝1～4克，稳定剂＝0.2～0.7克，其余为双蒸水；或者，1升B溶液中各成分的含量分别为：异硫氢酸胍＝9～14克，枸橼酸钠＝0.6～2.3克，稳定剂＝0.5～1.5克，其余为双蒸水。一种试剂盒，包括盒体，所述盒体内设置有：第一溶液EP管，盛装有A溶液，所述A溶液为包含Nacl、Na2Hpo4、KH2po4、稳定剂、双蒸水的混合液；第二溶液EP管，盛装有B溶液，所述B溶液为包含异硫氢酸胍、枸橼酸钠、稳定剂、双蒸水的混合液；组织签，用于移动穿刺针上的组织，以提取组织上的游离细胞。根据本专利技术实施例，所述组织签包括两端封口的锥形实体，所述锥形实体上设置有凹凸齿，所述凹凸齿用于将游离组织液引入EP管内。较优地，上述试剂盒还包括定位垫，所述定位垫设置有分别用于放置第一溶液EP管、第二溶液EP管、组织签的第一定位槽、第二定位槽和第三定位槽。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：1)提取游离细胞液后先利用A溶液进行涮洗，再利用B溶液进行保存，以备提取基因组，整个过程不会对基因组造成损伤，也不会干扰基因组的提取，RNA也不会发生降解。2)现有技术中对于穿刺微量组织的表面粘附的细胞都是丢失在病理固定液中，通过本专利技术方法可以充分利用这部分细胞提取基因组，使得提取的细胞组织得到充分利用，也避免过多地从人体抽取细胞组织用于检测，还为临床微量珍贵标本的利用(如前列腺穿刺和内窥镜所取标本都使得及时检测基因表达情况成为了可能。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例中组织签的结构示意图。图2为本专利技术实施例中试剂盒的结构示意图。图中标记：11-锥形实体；12-凹凸齿；10-盒体；20-定位垫；30-第一定位槽；40-第二定位槽；50-第三定位槽。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本专利技术实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施例。基于本专利技术的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本实施例中提供了一种提取游离细胞液的方法，该方法包括步骤：步骤一：利用组织签移动穿刺针上的组织，提取组织上的游离细胞液。请参阅图1，组织签可以采用图1所示结构，包括一中空的锥形实体11，锥形实体11上设置有4-5条凹凸齿12_，穿刺针上的组织通过该凹凸齿12被引入到EP管内。作为一种应用举例，锥形实体11的细头直径为1mm，粗头直径为2.5～3mm，长度为125mm。当然地，可以根据不同使用场景设计锥形实体的具体结构尺寸。步骤二：将提取的游离细胞液在A溶液中进行涮洗。所述A溶液为包含Nacl、Na2Hpo4、KH2po4、稳定剂、双蒸水(DDH2O)的混合液。根据研究，1升A溶液中各成分的含量分别为：Nacl＝8.5～9克，Na2Hpo4＝11～16克，KH2po4＝1～4克，稳定剂＝0.2～0.7克，其余为双蒸水。A溶液中各成分的含量不同，对涮洗结果具有影响，如表1和表2所示。表1表2从表2中可以看出，当1升A溶液中，Nacl＝8.5克，Na2Hpo4＝13克，KH2po4＝3克，稳定剂＝0.5克，其余为双蒸水时游离细胞提取的效果最佳。步骤三：将涮洗获得的游离细胞在B溶液中进行保存，需要提取基因组时从B溶液中取出即可。所述B溶液为包含异硫氢酸胍、枸橼酸钠的混合液。根据研究，1升B溶液中各成分的含量分别为：异硫氢酸胍＝9～14克，枸橼酸钠＝0.6～2.3克，稳定剂＝0.5～1.5克，其余为双蒸水。尤其以1升B溶液中异硫氢酸胍为10克，枸橼酸钠为1克，稳定剂为0.8克，其余为双蒸水为佳，如表4所示。B溶液中各成分的含量不同，对游离细胞的保存效果具有影响，如表3和表4所示。表3表4性能第一组第二组第三组第四组第五组细胞活力78％91％64％50％40％总RNA(ug)0.16110.41500.07260.05130.0558从表2中可以看出，当1升A溶液中，Nacl＝8.5克，Na2Hpo4＝13克，KH2po4＝3克，稳定剂＝0.5克，其余为双蒸水时游离细胞提取的效果最佳。通过本实施例所述方法，先利用A溶液涮洗组织提取游离细胞，再利用B溶液对游离细胞进行保存，以备提取基因组，整个过程不会对基因组造成损伤，也不会干扰基因组的提取，RNA也不会发生降解。现有技术中对于穿刺微量组织的表面细胞都是丢失在病理固定液中，通过本专利技术方法可以充分利用这部分细胞提取基因组，使得提取的细胞组织得到充分利用，也避免过多地从人体抽取细胞组织用于检测，不仅最大限度节约基因资源，还为临床内窥镜所取珍贵标本获得了及时检测基因表达情况成为可能。相应地，本实施例中还提供了一种试剂盒，包括盒体10，所述盒体10内设置有：第一溶液EP管，盛装有A溶液，A溶液用于涮洗组织，提取游离细胞；第二溶液EP管，盛装有B溶液，B溶液用于保存提取的游离细胞；组织签，例如图1所示结构，用于移动穿刺针上的组织，将组织移动到第一溶液EP管内；定位垫20，也可称之为防震垫，分别设置有用于放置第一溶液EP管、第二溶液EP管、组织签的第一定位槽30、第二定位槽40和和第三定位槽50，避免第一溶液EP管、第二溶液EP管、组织签在运输过程中因振动而损坏。以上所述，仅为本专利技术的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提取游离细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用组织签移动穿刺针上的组织；将组织在A溶液中进行涮洗，获得游离细胞；将涮洗获得的游离细胞在B溶液中进行保存；所述A溶液为包含Nacl、Na2Hpo4、KH2po4、稳定剂、双蒸水的混合液，所述B溶液为包含异硫氢酸胍、枸橼酸钠、双蒸水的混合液。

【技术特征摘要】
1.一种提取游离细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用组织签移动穿刺针上的组织；将组织在A溶液中进行涮洗，获得游离细胞；将涮洗获得的游离细胞在B溶液中进行保存；所述A溶液为包含Nacl、Na2Hpo4、KH2po4、稳定剂、双蒸水的混合液，所述B溶液为包含异硫氢酸胍、枸橼酸钠、双蒸水的混合液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，1升A溶液中各成分的含量分别为：Nacl＝8.5～9克，Na2Hpo4＝11～16克，KH2po4＝1～4克，稳定剂＝0.2～0.7克，其余为双蒸水；或者，1升B溶液中各成分的含量分别为：异硫氢酸胍＝9～14克，枸橼酸钠＝0.6～2.3克，稳定剂＝0.5～1.5克，其余为双蒸水。3.一种试剂盒，其特征在于，包括盒体，所述盒体内设...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛顿，周红艳，段丹丽，李曾，尹林，
申请(专利权)人：四川省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：四川,51