LRP5作为临床诊断和抑制消化系统肿瘤的应用技术方案

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及LRP5作为临床诊断和抑制消化系统肿瘤的应用。LRP5作为临床诊断消化系统肿瘤的应用，是通过荧光定量PCR检测LRP5在消化系统肿瘤中的表达情况，根据LRP5的表达情况，将LRP5作为消化系统肿瘤早期诊断的分子标志物。LRP5作为抑制消化系统肿瘤的应用，步骤为以LRP5为目标调控基因，构建干扰LRP5基因表达的载体；利用构建的载体，制备用于离体施用或体内施用的药物。本发明专利技术通过大量的实验数据证明，LRP5在消化系统肿瘤的发生和发展过程中起着重要的调控作用，干扰LRP5基因表达显著抑制消化系统肿瘤细胞的增殖和迁移，LRP5可望成为新的制备防治消化系统肿瘤的药物。

LRP5 as a clinical diagnosis and suppression of digestive system tumors

The invention belongs to the field of biological medicine, and in particular relates to the application of LRP5 as a clinical diagnosis and inhibition of digestive system tumors. The application of LRP5 as a clinical diagnosis of digestive system tumors, by fluorescence quantitative PCR detection of LRP5 expression in digestive system cancers, according to the expression of LRP5, LRP5 as an early molecular diagnosis of digestive system tumor markers. LRP5 is used for inhibiting tumor of digestive system, steps for using LRP5 as the target gene, constructing LRP5 interference vector of gene expression; with the constructed vector, for the preparation of drugs in vitro or in vivo fertilization application. The present invention through a large number of experimental data proved that play an important role in the occurrence and development process of LRP5 in the digestive system tumors, silencing LRP5 gene expression significantly inhibited cell proliferation and migration of tumor of digestive system, LRP5 is expected to become the new preparation of prevention and treatment of digestive system tumor drug.

【技术实现步骤摘要】
LRP5作为临床诊断和抑制消化系统肿瘤的应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及LRP5作为临床诊断和抑制消化系统肿瘤的应用。
技术介绍
随着社会经济发展和饮食结构的改变，肿瘤的发病率明显上升。其中消化系统肿瘤有着较高的发病率和死亡率，严重威胁人类的生命健康。消化道肿瘤主要包括肝癌、胃癌、胆囊癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌。消化系统作为人体的主要系统之一，其肿瘤的发生有着相似的生理基础，但其发病原因和确切的分子机制尚不完全明确，具体某一类型的肿瘤而言也并不相同，目前多认为是环境、遗传、免疫及内分泌等多重因素共同作用的结果。其中胃癌的发生与幽门螺杆菌感染密切相关，约65%的胃癌患者幽门螺杆菌检测呈阳性；食管癌的发生多与亚硝胺类物质、某些微量元素及维生素的缺乏相关；结直肠癌发生的主要原因是高脂肪饮食及纤维素摄入不足；胆结石等胆囊疾病的慢性刺激是胆囊癌发生的重要致病因素；乙肝病毒和丙肝病毒感染、酒精、肝硬化、亚硝胺类物质及黄曲霉素等与肝癌的发生相关；胰腺癌的致病因素尚不明确，但慢性胰腺炎及糖尿病患者的发病风险较高。在消化系统肿瘤发生的早期阶段，通过外科手术并联合应用放、化疗技术能够有效治疗肿瘤。常规的胃镜、食管镜、肠镜检查，B超及CT检查也能有效的发现早期消化系统肿瘤，因此近几十年来消化系统肿瘤的发生率呈下降趋势。但消化系统肿瘤起病隐匿，早期症状多不明显，病人被确诊时多已进展至中晚期，治疗难度极大且生存率低。因此筛查有效的生物标志物或药物靶点对于消化系统肿瘤的早期诊断和治疗具有重要意义。癌症的发生和转移与原癌基因的激活密切相关。大量研究表明，经典的Wnt/β-catenin信号通路在癌症的发生和转移方面起着重要作用。Wnt蛋白家族成员通过与frizzled蛋白家族成员及LRP5或LRP6结合，增加胞内水平β-catenin蛋白的水平，后者进入核内与转录因子TCF/Lef家族成员结合，引起c-myc，CyclinD1等原癌基因的转录激活，刺激细胞的增殖，引起癌症的发生。LRP5与LRP6均能介导Wnt/β-catenin信号转导，但LRP5在癌症发生过程的作用更强。LRP5基因突变或表达水平的改变与老年痴呆症、动脉粥样硬化、退行性关节炎等疾病的发生密切相关。有研究表明乳腺癌和甲状旁腺癌组织中能检测到异常形式的LRP5蛋白；恶性骨肉瘤组织中的LRP5蛋白表达水平也明显升高，而LRP5基因突变能够抑制骨肉瘤Saos-2细胞中β-catenin蛋白入核的水平，并明显降低细胞的侵袭能力；敲除前列腺癌细胞中的LRP5基因能够抑制癌细胞的迁移及动物体内恶性肿瘤的体积，另外，在发生转移的胰腺癌细胞中也检测到LRP5水平的异常升高，提示LRP5可能起着致癌基因的作用，但LRP5与消化系统肿瘤发生的关系还未曾有报道。因此本专利技术将检测LRP5基因在不同类型的消化系统肿瘤组织中的表达情况，旨在为消化系统肿瘤检测及风险提示提供新的诊断标志物，并在此基础上研究LRP5基因缺失及与消化系统肿瘤发生的关系，为消化系统肿瘤和其它肿瘤的治疗提供新的药物靶向，并对提升消化道系统肿瘤的早期发现率及改善消化系统肿瘤患者的生存状况起到新的推动作用。
技术实现思路
为提高消化道肿瘤的早期诊断率，有效抑制消化系统肿瘤的发生的技术难题，本专利技术公开了LRP5作为消化系统肿瘤早期诊断的分子标志物及其抑制消化系统肿瘤的应用。为解决上述技术难题，本专利技术采用以下技术方案：LRP5作为临床诊断消化系统肿瘤的应用，步骤如下：通过荧光定量PCR检测LRP5在消化系统肿瘤中的表达情况，根据LRP5的表达情况，将LRP5作为消化系统肿瘤早期诊断的分子标志物。所述荧光定量PCR中LRP5的正向引物如SEQIDNO：1所示，LRP5反向引物如SEQIDNO：2所示；所述荧光定量PCR的程序为：50°C20s；95°C10min；95°C1min；60°C1min，重复40个循环，测得LRP5扩增的CT值，并以内参基因β-actin的CT值进行标准化校正。LRP5作为抑制消化系统肿瘤的应用，步骤如下：a.以LRP5为目标调控基因，构建干扰LRP5基因表达的载体；b.利用步骤a中的载体，制备用于离体施用或体内施用的药物。所述步骤a中，干扰LRP5表达的基因包括敲除或沉默LRP5编码基因，抑制或降低LRP5的转录和翻译功能以及干扰LRP5蛋白功能发挥的一种或多种基因；所述载体为病毒载体或非病毒基因沉默载体。所述病毒载体为腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体或疱疹病毒载体。所述非病毒基因沉默载体为CRISPR/Cas9系统基因敲除载体、RNAi系统基因沉默载体或在此基础上改造的载体。所述消化系统肿瘤是人类的消化系统肿瘤组织，具体而言包括肝癌、胃癌、胆囊癌、食管癌、胰腺癌、结直肠癌。本专利技术的有益效果在于：第一：本专利技术通过可靠的荧光定量PCR方法，筛选发现LRP5在多种类型的消化系统肿瘤组织中的表达均发生明显升高，该方法的灵敏度高，特异性强，可作为消化系统肿瘤临床早期诊断的标志物。第二：本专利技术通过大量的实验数据证明，LRP5在消化系统肿瘤的发生和发展过程中起着重要的调控作用，干扰LRP5基因表达能够显著抑制消化系统肿瘤细胞的增殖和迁移，LRP5可望成为新的制备防治消化系统肿瘤的药物。附图说明图1为荧光定量PCR分析LRP5在不同类型消化系统肿瘤组织中的表达；（图A）其中胃癌组织来源于胃癌患者的癌组织（n=14），癌旁组织来源于胃癌患者的癌旁正常组织（n=14）；（图B）其中结直肠癌组织来源于结直肠癌患者的癌组织（n=14），癌旁组织来源于结直肠癌患者的癌旁正常组织（n=14）；β-actin作为LRP5的内参对照基因。图2为荧光定量PCR分析，A：在胃癌MGC-803细胞内转染LRP5干扰质粒(LRP5-siRNA)后，细胞内LRP5基因mRNA水平的变化；B：在胃癌MGC-803细胞内转染LRP5干扰质粒(LRP5-siRNA)后，细胞内LRP5基因蛋白表达水平的变化。图3为干扰LRP5基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响，胃癌MGC-803细胞转染LRP5-siRNA干扰质粒24，48，72小时后，癌细胞的增殖情况。图4为划痕实验分析干扰LRP5基因对胃癌MGC-803细胞迁移的影响；A：胃癌MGC-803细胞转染LRP5-siRNA干扰质粒24、48小时后，癌细胞的迁移情况；B：胃癌MGC-803细胞转染LRP5-siRNA干扰质粒24，48小时后，癌细胞的迁移能力示意图。具体实施方式LRP5作为临床诊断消化系统肿瘤的应用，步骤如下：通过荧光定量PCR检测LRP5在消化系统肿瘤中的表达情况，根据LRP5的表达情况，将LRP5作为消化系统肿瘤早期诊断的分子标志物。所述荧光定量PCR中LRP5的正向引物如SEQIDNO：1所示，LRP5反向引物如SEQIDNO：2所示；所述荧光定量PCR的程序为：50°C20s；95°C10min；95°C1min；60°C1min，重复40个循环，测得LRP5扩增的CT值，并以内参基因β-actin的CT值进行标准化校正。LRP5作为抑制消化系统肿瘤的应用，步骤如下：a.以LRP5为目标调控基因，构建干扰LRP5基因表达的载体；b.利用步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】
LRP5作为临床诊断消化系统肿瘤的应用，其特征在于，步骤如下：通过荧光定量PCR检测LRP5在消化系统肿瘤中的表达情况，根据LRP5的表达情况，将LRP5作为消化系统肿瘤早期诊断的分子标志物。

【技术特征摘要】
1.LRP5作为临床诊断消化系统肿瘤的应用，其特征在于，步骤如下：通过荧光定量PCR检测LRP5在消化系统肿瘤中的表达情况，根据LRP5的表达情况，将LRP5作为消化系统肿瘤早期诊断的分子标志物。2.如权利要求1所述的LRP5作为消化系统肿瘤早期诊断的分子标志物，其特征在于：所述荧光定量PCR中LRP5的正向引物如SEQIDNO：1所示，LRP5反向引物如SEQIDNO：2所示；所述荧光定量PCR的程序为：50°C20s；95°C10min；95°C1min；60°C1min，重复40个循环，测得LRP5扩增的CT值，并以内参基因β-actin的CT值进行标准化校正。3.LRP5作为抑制消化系统肿瘤的应用，其特征在于，步骤如下：a.以LRP5为目标调控基因，构建干扰LRP5基因表达的载体；b.利用步骤a中的载体，制备用于离体施用或体内施用的药物。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳东，陈卫东，聂小博，王海生，高玉敏，徐晓，周云，
申请(专利权)人：北京化工大学，内蒙古医科大学，河南大学，
类型：发明
国别省市：北京,11