板蓝根活性蛋白及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种板蓝根活性蛋白，该板蓝根活性蛋白中含有胰蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶抑制剂和α‑胰凝乳蛋白酶抑制剂。实验结果表明，本发明专利技术提供的板蓝根活性蛋白具有明显的抗多种原因所致胰腺炎的作用；并且采用MTT法和荷瘤小鼠研究板蓝根活性蛋白对不同肿瘤的抑制作用，研究结果表明本发明专利技术板蓝根活性蛋白具有显著的抗肿瘤活性和提高免疫力功效，具有开发治疗胰腺炎和抗肿瘤药物的前景。

【技术实现步骤摘要】
板蓝根活性蛋白及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种板蓝根活性蛋白药物制剂，具体涉及一种具有治疗胰腺炎及抗肿瘤的板蓝根活性蛋白及其制备方法，属医药

技术介绍
急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)是一个常见的外科急腹症，轻型易于治疗，重型病情凶险，病死率高，是目前外科急腹症中最棘手的疾病之一。慢性胰腺炎是由于各种原因造成的胰腺组织结构和功能慢性进行性损害。在慢性胰腺炎的发生发展过程中，早期主要症状为疼痛，晚期则疼痛症状减轻，代之以胰腺外分泌功能不全所引起的进行性消化不良和营养不良，严重影响到病人的生活质量和疾病预后。目前，对于慢性胰腺炎的治疗方法包括一般治疗、胰酶替代治疗和外科治疗(包括减压术、切除术和神经阻断术)。胰腺炎发病急、并发症多、病死率高，其治疗主要药物为抑酶制剂及抗生素，目前从天然药物中发现的一些生物活性物质对胰腺炎具有较好的治疗作用，具有广泛的开发前景。恶性肿瘤是严重危害人类健康和生命的多发病和常见病，早在2000～3000年前埃及和我国已有关于肿瘤的记载。包括中国在内的很多国家，尤其是中等发达国家，恶性肿瘤所致死亡在所有死亡原因中占首位或第二位，且发病率在世界范围内仍呈上升趋势。因此，肿瘤的治疗是当前科学界研究的一大难点，低毒、高效的抗肿瘤药物的研发是目前医药界的重中之重的任务。板蓝根味苦，性寒，归心、肝、胃经。有清热解毒，凉血利咽之功效，用于温毒发斑、舌绛紫暗、痄腮、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿等症。板蓝根中的大分子物质蛋白，近年来由于具有独特的药理活性受到研究者的广泛关注。前期研究表明板蓝根活性蛋白中含有胰蛋白酶抑制剂且具有较好的抗肿瘤活性。本课题组首次发现板蓝根活性蛋白具有较好的治疗胰腺炎及抗肿瘤活性。因此板蓝根活性蛋白的制备工艺及其在治疗胰腺炎及抗肿瘤方面的应用具有原创性，亟需知识产权保护。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是为了提供一种板蓝根活性蛋白制备方法及其在治疗胰腺炎和抗肿瘤药物中的应用。本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种板蓝根活性蛋白，其中板蓝根活性蛋白重量百分含量为50％～100％，板蓝根活性蛋白中含有胰蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶抑制剂和α-胰凝乳蛋白酶抑制剂。以上所述的板蓝根活性蛋白，它是通过以下方法制备得到的：以菘蓝属植物的板蓝根或爵床科植物马蓝的干燥根或根茎为原料，采用pH值为2～12，浓度为10～150mM的Tris-HCl为溶剂超声提取，得提取液，提取液在冰浴的环境中，缓慢加入硫酸铵，使硫酸铵的质量浓度为10％～80％，然后低温冷藏，离心，收集沉淀，得板蓝根粗蛋白；将板蓝根粗蛋白用去离子水溶解后装入分子截留量为1000Da的透析袋中透析除去残留的硫酸铵盐和小分子化合物，经冷冻干燥，得板蓝根活性蛋白。本专利技术的板蓝根活性蛋白在制备治疗胰腺炎药物中的应用。本专利技术所述的板蓝根活性蛋白在制备治疗胰腺炎药物中的应用，所述的胰腺炎为急性或慢性胰腺炎。本专利技术所述的板蓝根活性蛋白在制备治疗胰腺炎药物中的应用，将板蓝根活性蛋白和药学上可接受的载体制备成胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、注射剂或微囊剂的药物。本专利技术所述的板蓝根活性蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术所述的板蓝根活性蛋白在制备治疗抗肿瘤药物中的应用，将板蓝根活性蛋白和药学上可接受的载体制备成胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、注射剂或微囊剂的药物。本专利技术所述的板蓝根活性蛋白，板蓝根活性蛋白含量为50％～100％，板蓝根活性蛋白中含有胰蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶抑制剂和α-胰凝乳蛋白酶抑制剂。其中胰蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶抑制剂和α-胰凝乳蛋白酶抑制剂重量比值范围为30～100:10～50:10～90,优选为三者的重量比值为3:1:5。板蓝根蛋白的氨基酸组成主要含人体必需氨基酸：异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、组氨酸；非必需氨基酸：精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、脯氨酸和甘氨酸。本专利技术所述的板蓝根活性蛋白的制备方法，包括以下步骤：以菘蓝属植物的板蓝根或爵床科植物马蓝的干燥根或根茎为原料，采用pH值为2～12，浓度为10～150mM的Tris-HCl为溶剂提取，得提取液，提取液在冰浴的环境中，缓慢加入硫酸铵，使硫酸铵的质量浓度为10％～80％，低温冷藏，离心，收集沉淀得板蓝根粗蛋白；取粗蛋白用去离子水溶解后装入分子截留量为1000Da的透析袋中透析除去残留的硫酸铵盐和小分子化合物，经冷冻干燥，得板蓝根活性蛋白。作为优选方案，以上所述的板蓝根活性蛋白的制备方法，提取方法为超声提取，超声功率为100～1000W，提取溶剂和原料比为5～100，提取1～3次，每次提取时间为5～120min。本专利技术采用雨蛙素联合脂多糖致小鼠急性胰腺炎及高浓度胆盐胰管内注射的出血坏死性胰腺炎模型研究板蓝根活性蛋白治疗胰腺炎的作用。实验结果表明，板蓝根活性蛋白具有显著的治疗胰腺炎的作用。有益效果：本专利技术具有以下优点：本专利技术通过大量实验筛选，采用优选的方法制备得到板蓝根活性蛋白，实验结果表明，本专利技术制备得到的板蓝根活性蛋白具有很好的治疗胰腺炎的作用；并且本专利技术制备得到的板蓝根活性蛋白，经检测具有良好的体内外抗肿瘤活性。小鼠及人肿瘤细胞株给药剂量在0.1-100g/mL范围内可抑制多种肿瘤细胞的生长；小鼠给药剂量在1-1000mg/kg范围内可抑制动物体内移植肿瘤的生长，同时可以显著改善荷瘤小鼠体征性状及免疫功能。本专利技术单独或与其它抗肿瘤药物联合使用均有抗肿瘤作用，用于各种癌症的治疗和辅助治疗，如肝癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、乳腺癌、结肠癌、白血病等。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品或原料。实施例1：板蓝根活性蛋白含量测定蛋白含量测定标准曲线的建立：标分别精密量取不同体积的100μg/mL牛血清白蛋白(BSA)标准溶液，置于6只10mL试管中，分别加入蒸馏水至1.0mL，再分别加入5.0mL考马斯亮蓝G-250溶液，混匀，一段时间后设定波长为595nm测定每组的吸光值。以蛋白浓度为横坐标，以每组测定的吸光度值为纵坐标，绘制含量测定的标准曲线。根据浓度和吸光度绘制的标准曲线为y＝0.0091x+0.0305，R2＝0.9985(x为蛋白质含量，单位为μg/mL；y为样品的吸光度值)。准备3份板蓝根样品，其中1号样品为菘蓝根，产地为安徽；2号样品为菘蓝根，产地为内蒙古；3号样品为马蓝根，产地为广州；每种样品平行称取药材粉末(过20目筛)3份，加入50mMTris-HCl溶液超声提取2次，液料比为60：1，每次提取65min，合并提取液，3000rpm离心5min，取上清液在冰浴环境中，缓慢加入硫酸铵，使硫酸铵的终浓度为60％，放入4℃冰箱24h，离心，收集沉淀得板蓝根粗蛋白。粗蛋白再用去离子水溶解后装入分子截留量为1000Da的透析袋中，4℃透析除去残留的硫酸铵盐和其它小分子化合物，经冷冻干燥，得板蓝根活性蛋白粉末，称取提纯后的板蓝根活性蛋白适量，加入蒸馏水溶解，测定板蓝根活性蛋白浓度，计算不同样品板蓝根活性蛋白的百分含量(表1)。表1不同样品板蓝根活性蛋白的百本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种板蓝根活性蛋白，其特征在于，板蓝根活性蛋白重量百分含量为50％～100％，板蓝根活性蛋白中含有胰蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶抑制剂和α‑胰凝乳蛋白酶抑制剂。

【技术特征摘要】
1.一种板蓝根活性蛋白，其特征在于，板蓝根活性蛋白重量百分含量为50％～100％，板蓝根活性蛋白中含有胰蛋白酶抑制剂、胃蛋白酶抑制剂和α-胰凝乳蛋白酶抑制剂。2.根据权利要求1所述的板蓝根活性蛋白，其特征在于，它是通过以下方法制备得到的：以菘蓝属植物的板蓝根或爵床科植物马蓝的干燥根或根茎为原料，采用pH值为2～12，浓度为10～150mM的Tris-HCl为溶剂超声提取，得提取液，提取液在冰浴的环境中，缓慢加入硫酸铵，使硫酸铵的质量浓度为10％～80％，然后低温冷藏，离心，收集沉淀，得板蓝根粗蛋白；将板蓝根粗蛋白用去离子水溶解后装入分子截留量为1000Da的透析袋中透析除去残留的硫酸铵盐和小分子化合物，经冷冻干燥，得板蓝根活性蛋白。3.权利要求1所述的板蓝根活性蛋白在制备治疗胰腺炎药物中的应用。4.根据权利要求3所述的板蓝根活性蛋白在制备治疗胰腺炎药物中的应用，其特征在于，所述的胰腺炎为急性或慢性胰腺炎。5.根据权利要求3或4所述的板蓝根活性蛋白在制备治疗胰腺炎药物中的应用，其特征在于，将板蓝根活性蛋白和药学上可接受的载体制备成胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、注射剂或微囊剂的药物。6.权利要求1所述的板蓝根活性蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖平，李祥，陈建伟，段金廒，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32