抗CD73抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供经分离的单克隆抗体、具体而言人抗体，其以高亲和力结合人分化簇73(CD73)且抑制CD73的活性，并任选地介导抗体依赖性CD73内化。本发明专利技术亦提供编码本发明专利技术抗体的核酸分子、用于表达本发明专利技术抗体的表达载体、宿主细胞及方法。本发明专利技术亦提供包含本发明专利技术抗体的免疫偶联物、双特异性分子及药物组合物。本发明专利技术亦提供使用本发明专利技术抗体抑制表现CD73的肿瘤细胞生长的方法，包括治疗多种癌症的方法。

Anti CD73 antibodies and uses thereof

The present invention provides isolated monoclonal antibodies, specifically human antibodies, that bind human differentiation cluster 73 (CD73) with high affinity and inhibit the activity of CD73 and optionally mediate antibody dependent CD73 internalization. The present invention also provides nucleic acid molecules encoding the antibodies of the present invention, expression vectors, host cells and methods for expressing antibodies of the present invention. The invention also provides immunoconjugates comprising the antibodies of the invention, bispecific molecules and pharmaceutical compositions. The present invention also provides methods for inhibiting the growth of tumor cells expressing CD73 using the antibodies of the present invention, including methods for treating a variety of cancers.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD73抗体及其用途本申请主张于2014年11月21日提出申请的题为“AntibodiesAgainstCD73andUsesThereof”的美国临时申请第62/083,056号的优先权，该申请的内容以引用方式并入本文中。背景分化簇73(CD73)(亦称为胞外-5'-核苷酸酶(胞外-5'NT，EC3.1.3.5))系在大部分组织中发现、但尤其在内皮细胞及造血细胞亚组中表达的糖基-磷脂酰肌醇(GPI)连接的细胞表面酶(Resta等人，ImmunolRev1998；161:95-109及Colgan等人，PrinergicSignal2006；2:351-60)。已知CD73催化细胞外核苷单磷酸盐去磷酸化成核苷，例如腺苷。腺苷是经广泛研究的经由若干受体(包括A1、A2A、A2B及A3)介导其生物效应的信号传导分子。已显示腺苷可调控许多癌症的增殖及迁移，且已显示腺苷可经由调控抗肿瘤T细胞而发挥免疫阻抑效应(Zhang等人，CancerRes2010；70:6407-11)。已经报导CD73在许多不同癌症上表达，包括结肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、膀胱癌、白血病、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、黑色素瘤、甲状腺癌、食道癌、前列腺癌及乳腺癌(Jin等人，CancerRes2010；70:2245-55及Stagg等人，PNAS2010；107:1547-52)。另外，癌症中的CD73表达与增加的增殖、迁移、新血管形成、侵袭力、转移及较短患者存活期相关。亦已提出CD73活性是乳头状甲状腺癌中的预后标记物。尽管已显示CD73可调控肿瘤细胞上的细胞-细胞及细胞-基质相互作用，但CD73表达及活性亦与减弱的T细胞反应相关且牵涉药物抵抗(Spychala等人，PharmacolTher3000；87:161-73)。因此，CD73可以直接及间接方式二者调控癌症进展，凸显其作为新颖治疗靶的潜能。鉴于对靶向疾病(例如癌症)的改进策略的需求方兴未艾，通过多种机制调控肿瘤进展的方法以及调控CD73活性的方法及相关治疗剂是非常令人期望的。
技术实现思路
本文提供特异性结合CD73、且具有期望的功能特性的分离抗体，例如单克隆抗体(其抗原结合部分)，具体而言是人单克隆抗体。这些特性包括高亲和力结合至人CD73、结合至猴CD73(例如食蟹猴CD73)及抑制CD73酶活性的能力。本文所述的抗体可用于抑制肿瘤生长、减少腺苷产生、刺激免疫反应及检测样品中的CD73蛋白。在某些实施方案中，抗CD73抗体展现以下特性中的至少一者：(a)抑制CD73酶活性；(b)结合至食蟹猴CD73；(c)抗体介导的CD73内化至细胞(例如肿瘤细胞)中；及(d)结合至包含人CD73的氨基酸65-83及157-172的构象表位。在某些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合部分以约10nM至0.1nM或更小的KD(如藉由例如SPR分析所量测的)结合至人CD73(单体和/或二聚体CD73)，且以不超过10min的T1/2(如藉由例如脉冲追踪所量测且如实施例中所述的)内化至肿瘤细胞中。在某些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合部分结合在人CD73的区域FTKVQQIRRAEPNVLLLDA(SEQIDNO:96)和/或LYLPYKVLPVGDEVVG(SEQIDNO:97)内，例如，其中该表位跨越或重叠于人CD73的FTKVQQIRRAEPNVLLLDA(SEQIDNO:96)和/或LYLPYKVLPVGDEVVG(SEQIDNO:97)。在某些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合部分结合至人CD73(SEQIDNO:1)上包括氨基酸残基FTKVQQIRRAEPNVLLLDA(SEQIDNO:96)和/或LYLPYKVLPVGDEVVG(SEQIDNO:97)的表位的全部或一部分。在某些实施方案中，抗CD73抗体或其抗原结合部分所结合的表位是藉由例如HDX-MS和/或结晶学来测定的。在某些实施方案中，抗CD73抗体包含在本文中所述的抗CD73抗体的可变重链及可变轻链对中的三个可变重链CDR及三个可变轻链CDR，这些可变重链及可变轻链对例如表35中的链，例如SEQIDNO:4及8；SEQIDNO:4及12；SEQIDNO:16及20；SEQIDNO:16及24；SEQIDNO:16及28；SEQIDNO:32及36；SEQIDNO:40及44；SEQIDNO:40及48；SEQIDNO:52及56；SEQIDNO:60及64；SEQIDNO:68及72；SEQIDNO:68及76；SEQIDNO:80及84；SEQIDNO:88及92；SEQIDNO:135及8；或SEQIDNO:135及12。例如，抗CD73抗体包含：(a)分别包含SEQIDNO:5、6及7的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:9、10及11的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(b)分别包含SEQIDNO:5、6及7的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:13、14及15的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(c)分别包含SEQIDNO:17、18及19的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:21、22及23的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(d)分别包含SEQIDNO:17、18及19的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:25、26及27的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(e)分别包含SEQIDNO:17、18及19的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:29、30及31的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(f)分别包含SEQIDNO:33、34及35的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:37、38及39的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(g)分别包含SEQIDNO:41、42及43的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:45、46及47的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(h)分别包含SEQIDNO:41、42及43的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:49、50及51的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(i)分别包含SEQIDNO:53、54及55的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:57、58及59的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(j)分别包含SEQIDNO:61、62及63的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:65、66及67的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(k)分别包含SEQIDNO:69、70及71的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:73、74及75的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(l)分别包含SEQIDNO:69、70及71的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:77、78及79的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(m)分别包含SEQIDNO:81本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人抗体或其抗原结合部分，其结合人分化簇73(CD73)且展现以下特性中的一种或多种：(a)以10nM或更小的KD结合人CD73；(b)抑制CD73酶活性；(c)通过抗体介导的CD73内化将CD73内化至细胞、例如肿瘤细胞中；及(d)结合包含人CD73的氨基酸65‑83及157‑172的构象表位。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.11.21 US 62/083,0561.一种分离的人抗体或其抗原结合部分，其结合人分化簇73(CD73)且展现以下特性中的一种或多种：(a)以10nM或更小的KD结合人CD73；(b)抑制CD73酶活性；(c)通过抗体介导的CD73内化将CD73内化至细胞、例如肿瘤细胞中；及(d)结合包含人CD73的氨基酸65-83及157-172的构象表位。2.权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体以不超过10min的T1/2内化至肿瘤细胞中。3.权利要求1或2的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体以如通过SPR分析所测量的约0.1nM至10nM或更小的KD结合人CD73。4.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体以如通过FACS所测量的0.1nM至10nM或更小的EC50结合人CD73。5.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体以如通过FACS所测量的0.1nM至10nM或更小的EC50结合食蟹猴CD73。6.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体结合人CD73(SEQIDNO:1)上的包括氨基酸残基FTKVQQIRRAEPNVLLLDA(SEQIDNO:96)和/或LYLPYKVLPVGDEVVG(SEQIDNO:97)的全部或一部分的表位。7.权利要求6的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体结合人CD73(SEQIDNO:1)上的包括氨基酸残基FTKVQQIRRAEPNVLLLDA(SEQIDNO:96)的全部或一部分及氨基酸残基LYLPYKVLPVGDEVVG(SEQIDNO:97)的全部或一部分的表位。8.前述权利要求中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体选自下组：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、或其变体。9.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人CD73，且包含分别处于选自下组的重链及轻链可变区对中的三个重链可变区CDR及三个轻链可变区CDR：(a)SEQIDNO:4与8(b)SEQIDNO:4与12；(c)SEQIDNO:16与20；(d)SEQIDNO:16与24；(e)SEQIDNO:16与28；(f)SEQIDNO:32与36；(g)SEQIDNO:40与44；(h)SEQIDNO:40与48；(i)SEQIDNO:52与56；(j)SEQIDNO:60与64；(k)SEQIDNO:68与72；(l)SEQIDNO:68与76；(m)SEQIDNO:80与84；(n)SEQIDNO:88与92；(o)SEQIDNO:135与8；和(p)SEQIDNO:135与12。10.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人CD73且包含：(a)分别包含SEQIDNO:5、6及7的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:9、10及11的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(b)分别包含SEQIDNO:5、6及7的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:13、14及15的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(c)分别包含SEQIDNO:17、18及19的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:21、22及23的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(d)分别包含SEQIDNO:17、18及19的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:25、26及27的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(e)分别包含SEQIDNO:17、18及19的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:29、30及31的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(f)分别包含SEQIDNO:33、34及35的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:37、38及39的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(g)分别包含SEQIDNO:41、42及43的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:45、46及47的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(h)分别包含SEQIDNO:41、42及43的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:49、50及51的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(i)分别包含SEQIDNO:53、54及55的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:57、58及59的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(j)分别包含SEQIDNO:61、62及63的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:65、66及67的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(k)分别包含SEQIDNO:69、70及71的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:73、74及75的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(l)分别包含SEQIDNO:69、70及71的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:77、78及79的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；(m)分别包含SEQIDNO:81、82及83的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:85、86及87的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列；或(n)分别包含SEQIDNO:89、90及91的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:93、94及95的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。11.权利要求10的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体包含：分别包含SEQIDNO:5、6及7的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:9、10及11的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。12.权利要求11的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体包含：分别包含SEQIDNO:5、6及7的重链CDR1、CDR2及CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO:13、14及15的轻链CDR1、CDR2及CDR3序列。13.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人CD73且包含重链可变区及轻链可变区，其中该重链可变区包含与选自下组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列：SEQIDNO:4、16、32、40、52、60、68、80、88及135。14.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人CD73且包含重链可变区及轻链可变区，其中该轻链可变区包含与选自下组的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列：SEQIDNO:8、12、20、24、28、36、44、48、56、64、72、76、84及92。15.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合人CD73且包含分别与选自下组的重链可变区及轻链可变区氨基酸序列至少85％相同的重链可变区及轻链可变区：(a)SEQIDNO:4与8(b)SEQIDNO:4与12；(c)SEQIDNO:16与20；(d)SEQIDNO:16与24；(e)SEQIDNO:16与28；(f)SEQIDNO:32与36；(g)SEQIDNO:40与44；(h)SEQIDNO:40与48；(i)SEQIDNO:52与56；(j)SEQIDNO:60与64；(k)SEQIDNO:68与72；(l)SEQIDNO:68与76；(m)SEQIDNO:80与84；(n)SEQIDNO:88与92；(o)SEQIDNO:135与8；和(p)SEQIDNO:135与12。16.权利要求15的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区及轻链可变区分别包含与选自由(a)至(p)组成的群的重链可变区及轻链可变区至少90％相同的氨基酸序列。17.权利要求16的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区及轻链可变区分别包含与选自由(a)至(p)组成的群的重链及轻链可变区至少95％相同的氨基酸序列。18.权利要求17的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变区及轻链可变区分别包含选自由(a)至(p)组成的群的重链可变区及轻链可变区。19.权利要求18的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体包含：包含SEQIDNO:135中所述的氨基酸序列的重链可变区，及包含SEQIDNO:8中所述的氨基酸序列的轻链可变区。20.权利要求18的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体包含：包含SEQIDNO:135中所述的氨基酸序列的重链可变区，及包括SEQIDNO:12中所述的氨基酸序列的轻链可变区。21.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与权利要求1至20中任一项的抗体结合CD73上的相同的表位。22.权利要求9至21中任一项的抗体或其抗原结合部分，其中该抗体展现以下特性中的任一种：(1)结合人CD73，例如结合于珠子的人单体及二聚体人CD73亚型1和亚型2，例如以10...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·伦贝格，A·J·科曼，B·C·巴恩哈特，A·P·亚姆尼克，M·斯里尼瓦桑，K·A·亨宁，M·雷，E·塞加，A·古迪纳夫，M·N·尤雷孔克尔，陈国栋，J·萨克，R·黄，M·J·科比特，J·E·迈尔斯，L·施魏策尔，S·V·哈彻，黄海春，P·张，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：美国,US