细胞因子诱导的杀伤细胞的双特异性抗体介导的癌症治疗制造技术

提供了组合物，其包含MSBODY和细胞毒性免疫细胞(例如细胞因子诱导的杀伤细胞)，以形成武装活化CIK细胞(ACCs)，其中所述MSBODY包含对肿瘤抗原具有特异性的第一抗原结合部分，和与所述细胞结合的第二抗原结合部分。还提供了制备包含MSBODY和细胞毒性免疫细胞的组合物的方法，以及用双特异性抗体武装的CIK细胞治疗患者的方法。

Treatment of cancer bispecific antibody mediated cytokine induced killer cells by

Provided are compositions comprising MSBODY and cytotoxic immune cells (such as cytokine induced killer cells), to form armed activated CIK cells (ACCs), wherein the MSBODY contains the first antigen is specific for tumor antigen binding portion and second antigen binding with the cell binding part. Also provides a method for preparing a composition containing MSBODY and cytotoxic immune cells, and a method of using CIK cell therapy in patients with bispecific antibody militia.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞因子诱导的杀伤细胞的双特异性抗体介导的癌症治疗专利
本公开涉及基于细胞的免疫治疗和药物相关的组合物和方法。本公开尤其涉及用于治疗癌症的治疗法。背景基于细胞的免疫治疗对于癌症治疗有很大的希望。然而，很难获得大量可以有效靶向肿瘤细胞的抗肿瘤特异性效应物免疫细胞。细胞因子诱导的杀伤细胞(即CIK)是细胞毒性免疫效应细胞，由于CIK具有抗肿瘤细胞毒性和多样的T细胞受体特异性而成为新一代抗肿瘤免疫细胞治疗的强有力的候选物。CIK是来自离体或者体外扩增细胞的异质细胞群体。CIK可以在可溶性因子，例如抗CD3抗体、IFN-γ和IL-2的存在下在标准培养条件下产生。CIK细胞可以同时表达T细胞标志物CD3和自然杀伤细胞(即NK)标志物CD56，并且具有T和/或NK细胞表型。基于CIK的治疗成为有希望的癌症治疗方法，主要因为CIK扩增相对容易，并且CIK具有不受主要组织相容性复合物(即MHC)限制的T和NK细胞的抗肿瘤活性。然而，对于基于细胞的免疫治疗存在已知的挑战。基于细胞的免疫治疗通常是剂量限制性的、时间限制性的、昂贵的、劳动密集型的，并且尚未转化为常规的临床应用。因此，需要改进目前基于细胞的免疫治疗以提供更有效率和效果的癌症治疗方法，该治疗方法更容易制备、具有更好的临床稳定性和功效以及降低的系统毒性。本公开通过提供显著改善癌症患者的治疗和管理的新型组合物和方法解决了改进基于细胞的免疫治疗的需要。概述本技术涉及一种组合物，其包含MSBODY和细胞毒性免疫细胞，其中所述MSBODY包含：a)对肿瘤抗原具有特异性的第一抗原结合部分，和b)与所述免疫细胞结合的第二抗原结合部分。在一些实施方案中，所述细胞毒性免疫细胞是细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞、T细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T细胞或者淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞。在一些实施方案中，所述细胞是所述细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞。在一些实施方案中，所述MSBODY与所述细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的细胞表面或者膜蛋白结合。在一些实施方案中，所述蛋白质是CD3或者Fc受体。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原选自所述组，该组由EGFR、Her2、Ep-CAM、CD20、CD30、CD33、CD47、CD52、CD133、CEA、gpA33、粘蛋白、TAG-72，CIX、PSMA、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、GM2、VEGF、VEGFR、整联蛋白αVβ3、整联蛋白α5β1、ERBB2、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP和生腱蛋白组成。在一些实施方案中，所述CIK细胞包含异质细胞群体。在一些实施方案中，所述异质细胞群体包含至少两个细胞。在一些实施方案中，所述CIK细胞是DC3+CD56+细胞。在一些实施方案中，所述CIK细胞针对肿瘤细胞具有非MHC限制性细胞溶解活性。在一个方面，本技术还提供了一种用于制备包含MSBODY和细胞毒性免疫细胞的组合物的方法。在另一个方面，本技术进一步提供了一种治疗包括癌症患者的患者的方法，包括：a)从所述患者获得外周血淋巴细胞(PBL)样品；b)用抗CD3抗体、IFN-γ和IL-2孵育PBL以获得CIK细胞；c)用双特异性抗体武装所述CIK细胞，其中每个MSBODY包含对肿瘤抗原具有抗原结合特异性的第一抗原结合部分，和与所述CIK细胞结合的第二抗原结合部分，和d)施用所述具有结合的双特异性抗体武装的CIK细胞到有需要的患者。在一个方面，本技术提供了一种包含组合物的试剂盒，所述组合物包含MSBODY和细胞毒性免疫细胞，其中所述MSBODY包含：a)对肿瘤抗原具有特异性的第一抗原结合部分，和b)与所述细胞结合的第二抗原结合部分，以及使用说明书。附图简述作为本公开的实施方案，提供的是仅通过示例而非限制说明的附图，其中：图1描绘了双特异性抗体(MSBODY)可以武装在CIK细胞上并且裂解肿瘤细胞。抗CD3特异性单链抗体可以由多种MSBODY抗体共享。靶抗原特异性单体抗体对于每一种MSBODY抗体是不同的，并且可以识别靶标，例如Her2或者Ep-CAM。所有MSBODY可以在表达CD3的活化CIK细胞的表面上武装，以形成武装活化CIK细胞(ACC)。如右图所示，MSBODY抗体可以通过同时结合CD3和靶抗原来瞬时连接CIK细胞和癌细胞，同时，抗体的Fc部分可以结合免疫辅助细胞的Fc受体。这触发CIK细胞和免疫辅助细胞活化，包括细胞毒性颗粒融合、瞬时细胞因子释放和/或增殖。附着癌细胞的重定向裂解涉及穿孔素的膜穿孔以及由颗粒酶诱导的继发性程序性细胞死亡。图2描述了1％琼脂糖凝胶电泳。A.泳道M：DL2000标志物；泳道1：抗-Ep-CAMHC；泳道2：抗Ep-CAMLC；B.泳道M：DL10000标志物；泳道1：赫赛汀HC；泳道2：L2K-ScFv；泳道3：赫赛汀LC。图3描述了考马斯蓝染色的SDS-PAGE凝胶和通过HPLC-SEC检测的双特异性抗体的纯度。A.考马斯蓝染色的还原的8％SDS-PAGE凝胶。B.考马斯蓝染色的未还原的6％SDS-PAGE凝胶(泳道M：蛋白标志物，泳道1.Her2XCD3MSBODY，泳道2.Ep-CAMxCD3MSBODY)；C.纯化的Her2xCD3MSBODY；D.纯化的Ep-CAMxCD3MSBODY。图4描述了Her2×CD3MSBODY与SK-BR-3细胞(A)和Jurkat(B)细胞表面结合的流式细胞分析；黑色实线：MSBODY和黑色虚线：赫赛汀或者L2K单克隆抗体。图5描述了Ep-CAMXCD3MSBODY与SW480细胞(A)和Jurkat(B)细胞表面结合的流式细胞分析；黑色实线：MSBODY和黑色虚线：抗-Ep-CAM单克隆抗体或者L2K单克隆抗体。图6是通过抗-CD45/CD3/CD56抗体的FACS检测CIK细胞的表型。A.CD45阳性对照；B.CD3和CD56阴性对照；C.CD45阳性人群；D.右上象限显示CD3和CD56双阳性。图7描述了MSBODY分子介导的共结合分析。A.未经CFSE或PKH26染色的SK-BR-3和CIK共结合阴性对照；B.经CFSE和PKH26染色的SK-BR-3和CIK共结合对照，分别不加MSBODY；C.右上象限显示与MSBODY共结合的两种细胞。图8描述了MSBODY武装活化CIK细胞(ACC)的特异性。通过流式细胞术测定具有从100nM至0.78nM一系列浓度的Her2×CD3MSBODY武装活化的CIK细胞，PE标记的抗人IgGFc。图9描述了武装活化CIK细胞(ACC)裂解SK-BR-3乳腺癌细胞。(■)Her2×CD3MSBODY的系列稀释液或者(●)100nMhIgG。ACC与SK-BR-3靶细胞以E:T＝5:1比例孵育，24小时后通过使用荧光染料CFSE和PI的基于流式细胞检测来测定细胞裂解。图示来自一式三份测定的平均值。图10描述了Her2×CD3MSBODY诱导的针对SK-BR-3细胞的细胞毒性。24小时(A)或48小时(B)后测定细胞裂解，使用Her2×CD3MSBODY(●)赫赛汀(■)hIgG(▼)的系列稀释液引入细胞裂解，并且使用GraphPadpri本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含：MSBODY和细胞毒性免疫细胞，其中所述MSBODY包含：a)对肿瘤抗原具有特异性的第一抗原结合部分,和b)与所述细胞结合的第二抗原结合部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含：MSBODY和细胞毒性免疫细胞，其中所述MSBODY包含：a)对肿瘤抗原具有特异性的第一抗原结合部分,和b)与所述细胞结合的第二抗原结合部分。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述细胞毒性免疫细胞是细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞、T细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T细胞或者淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述细胞是所述细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述MSBODY与所述细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的细胞膜表面或者膜蛋白结合。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述蛋白质是CD3或者Fc受体。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述肿瘤抗原选自所述组，该组由EGFR、Her2、Ep-CAM、CD20、CD30、CD33、CD47、CD52、CD133、CEA、gpA33、粘蛋白、TAG-72、CIX、PSMA、叶酸结合蛋白、GD2、GD3、GM2、VEGF、VEGFR、整联蛋白αVβ3、整联蛋白α5β1、ERBB2、E...

【专利技术属性】
技术研发人员：周鹏飞，王涛，胡柳，黄谧，方丽娟，刘杨，
申请(专利权)人：武汉友芝友生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42