流感病毒突变体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及流感病毒突变体及其用途。本发明专利技术公开一种重组流感病毒，其具有突变体M基因，所述突变体M基因包含SEQ ID NO:1。本发明专利技术还公开了一种用于繁殖重组流感病毒的方法。

Influenza virus mutants and uses thereof

The present invention relates to influenza virus mutants and uses thereof. The present invention discloses a recombinant influenza virus, the mutant M gene, the mutant M gene contains SEQ ID NO:1. The present invention also discloses a method for reproducing recombinant influenza viruses.

【技术实现步骤摘要】
流感病毒突变体及其用途本申请是申请日为2012年6月21日、申请号为“201280040857.5”、专利技术名称为“流感病毒突变体及其用途”的专利技术专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求2011年6月24日提交的美国临时申请号61/501,034的权益，其内容通过引用整体并入本文。序列表本申请包含已通过EFS-Web提交的ASCII格式的序列表且该序列表的全部内容以引用方式并入本文。于2013年2月21日创建的所述ASCII副本名称为090248-0125_SL.txt且大小为28,140字节。
技术介绍
流感是美国成年人死亡的主要原因。每年，约36,000人死于流感，超过200,000人住院。流感是一种高度接触传染的疾病，其通过咳嗽、喷嚏和通过与携带病毒的物体(诸如门把手和电话)的直接物理接触而传播。流感的征状包括发热、极度疲劳、头痛、寒冷和身体疼痛；约50％的受感染者没有征状，但是仍然是接触传染的。免疫接种在65岁以下的健康人中具有70-90％的预防流感的有效性，只要循环病毒株的抗原性与疫苗的抗原性匹配。疫苗接种是预防流感的主要方法，并且活的减毒的和灭活的(杀死的)病毒疫苗都是目前可得到的。通常鼻内施用的活病毒疫苗会活化免疫系统的所有阶段，且可以刺激针对多种病毒抗原的免疫应答。因而，活病毒的应用克服了在灭活病毒疫苗的制备过程中可能发生的病毒抗原破坏的问题。另外，与由灭活疫苗诱导的免疫相比，由活病毒疫苗产生的免疫通常更持久、更有效和更有交叉反应性，并且活病毒疫苗的生产成本比灭活的病毒疫苗更低。但是，减毒病毒的突变经常是不太确定的，且恢复是一个问题。
技术实现思路
在一个方面，本公开内容提供了一种核酸序列，其包含SEQIDNO:1。在一个方面，本公开内容提供了一种核酸序列，其包含SEQIDNO:2。在一个方面，本公开内容提供了一种核酸序列，其包含SEQIDNO:3。在一个方面，本公开内容提供了一种组合物，其包含与(i)启动子和(ii)转录终止序列可操作地连接的SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3。在一个方面，本公开内容提供了一种重组流感病毒，其包含M基因中的突变。在某些实施方案中，所述重组流感病毒包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3。在某些实施方案中，所述M基因中的突变导致病毒表达M2蛋白的失败，或者造成病毒表达具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的截短的M2蛋白。在某些实施方案中，在体外宿主细胞系统中至少10代，所述M基因中的突变不会恢复成野生型或编码功能性M2蛋白的非野生型序列。在某些实施方案中，所述病毒是甲型流感病毒。在某些实施方案中，所述病毒在被所述病毒感染的哺乳动物中是非致病性的。在某些实施方案中，所述体外细胞系统包含中国仓鼠卵巢细胞。在某些实施方案中，所述体外细胞系统包含Vero细胞。在一个方面，本公开内容提供了一种细胞，其包含权利要求5-10中的任一项所述的重组流感病毒。在某些实施方案中，所述细胞是在体外。在某些实施方案中，所述细胞是在体内。在一个方面，本公开内容提供了一种组合物，其包含：含有M基因中的突变的重组流感病毒。在某些实施方案中，所述组合物包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3。在某些实施方案中，所述M基因中的突变导致病毒表达M2蛋白的失败，或者造成病毒表达具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的截短的M2蛋白。在某些实施方案中，所述病毒是甲型流感病毒。在某些实施方案中，所述组合物对施用所述组合物的哺乳动物是非致病性的。在某些实施方案中，在给哺乳动物施用所述组合物以后约3周内，所述组合物在哺乳动物中引起可检测的免疫应答。在一个方面，本公开内容提供了一种疫苗，其包含：含有M基因中的突变的重组流感病毒。在某些实施方案中，所述疫苗包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3。在某些实施方案中，所述M基因中的突变导致病毒表达M2蛋白的失败，或者造成病毒表达具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的截短的M2蛋白。在某些实施方案中，所述病毒是甲型流感病毒。在某些实施方案中，所述疫苗对施用所述疫苗的哺乳动物是非致病性的。在某些实施方案中，在给哺乳动物施用所述疫苗以后约3周内，所述疫苗在哺乳动物中引起可检测的免疫应答。在某些实施方案中，除了所述重组病毒以外，所述疫苗包含至少2种不同的流感病毒株。在某些实施方案中，所述疫苗包含至少一种乙型流感病毒或乙型流感病毒抗原。在某些实施方案中，所述疫苗包含至少一种丙型流感病毒或丙型流感病毒抗原。在某些实施方案中，所述疫苗包含一种或多种病毒或病毒抗原，所述病毒或病毒抗原包含人甲型流感和得自非人物种的大范围流行流感病毒。在某些实施方案中，所述疫苗包含选自H1N1、H2N2和H3N2的人甲型流感病毒。在一个方面，本公开内容提供了一种用于繁殖重组流感病毒的方法，所述方法包括：使宿主细胞与重组流感病毒SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3接触；在适合病毒复制的条件下，温育宿主细胞足够的时间，和分离后代病毒颗粒。在一个方面，本公开内容提供了一种用于制备疫苗的方法，所述方法包括：将宿主细胞放入生物反应器中；使所述宿主细胞与重组病毒SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3接触；在适合病毒繁殖的条件下，温育所述宿主细胞足够的时间；分离后代病毒颗粒；和配制所述后代病毒颗粒用于作为疫苗来施用。在一个方面，本公开内容提供了一种用于免疫受试者的方法，所述方法包括：施用包含重组流感病毒的组合物，所述重组流感病毒包含M基因中的突变，其中所述M基因中的突变导致病毒表达M2蛋白的失败，或者造成病毒表达具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的截短的M2蛋白。在一个方面，本公开内容提供了一种用于降低受试者中的甲型流感病毒感染的可能性或严重程度的方法，所述方法包括：施用包含重组流感病毒的组合物，所述重组流感病毒包含M基因中的突变，其中所述M基因中的突变导致病毒表达M2蛋白的失败，或者造成病毒表达具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的截短的M2蛋白。在某些实施方案中，所述重组流感病毒包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3。在某些实施方案中，所述方法包括：提供至少1个加强剂量的组合物，其中在第一次施用以后3周提供所述至少1个加强剂量。在某些实施方案中，所述方法包括：鼻内地、肌肉内地或皮内地施用所述组合物。在某些实施方案中，所述方法包括：皮内地进行施用。在某些实施方案中，所述方法包括：使用微型针递送装置进行施用。在一个方面，本公开内容提供了一种用于皮内施用免疫原性组合物的方法，所述方法包括：(a)提供微型针递送装置，其包括(i)穿刺机构；(ii)免疫原性组合物层，其包括多个能够刺穿皮肤和允许免疫原性组合物皮内施用的微型针；和(b)压迫所述穿刺机构；其中所述免疫原性组合物包含含有M基因中的突变的重组流感病毒，且其中所述M基因中的突变导致病毒表达M2蛋白的失败，或者造成病毒表达具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的截短的M2蛋白。在某些实施方案中，所述重组流感病毒包含SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3。在某些实施方案中，所述微型针阵列最初位本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组流感病毒，其具有突变体M基因，所述突变体M基因包含SEQ ID NO:1。

【技术特征摘要】
2011.06.24 US 61/501,0341.一种重组流感病毒，其具有突变体M基因，所述突变体M基因包含SEQIDNO:1。2.根据权利要求1所述的重组流感病毒，其中所述M基因的突变导致所述病毒表达M2蛋白的失败，或者造成所述病毒表达具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的截短的M2蛋白。3.根据权利要求1所述的重组流感病毒，其中所述突变体M基因不会恢复成野生型或编码功能性M2蛋白的非野生型序列在体外宿主细胞系统中至少10代，其中所述宿主细胞被修饰以生产野生型形式的所述突变体基因，由此将基因产物反向提供给所述病毒。4.根据权利要求1所述的重组病毒，其中所述病毒是甲型流感病毒。5.根据权利要求1所述的重组病毒，其中所述病毒在...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕穆克·比尔赛尔，八田靖子，
申请(专利权)人：复尔健有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US