一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒，包括盒体(1)、盒盖(2)和设置在盒体内的衬垫(3)，衬垫(3)上设有小孔，样本保存管(4)、装有PCR扩增试剂的试剂管(5)、装有PCR产物纯化试剂的试剂管(6)、含DNA测序试剂的试剂管(7)被设置于衬垫(3)的小孔内；盒盖(2)内侧设有条码区(9)。本实用新型专利技术将样本保存、以及ATP8B1基因、ABCB4基因、ABCB11基因的突变筛查整合在一个试剂盒内，设计合理，方便携带、保存，使用方法简单，通过筛查可降低进行性家族性肝胆汁淤积症的发病率。

Kit for detecting gene mutation of progressive familial cholestasis

The utility model relates to a kit of familial hepatic cholestasis of a gene mutation detection, which comprises a box body and a box cover (1) and (2) are arranged in a box body pad (3), liner (3) is provided with holes, sample preservation tube (4), with PCR amplification reagent test agent tube (5), with PCR reagent purification reagent tube (6), DNA sequencing reagents containing reagent tube (7) is arranged on the pad (3) holes; the lid (2) is arranged on the inner side of the bar code area (9). The utility model will integrate sample preservation and mutation screening of ATP8B1 gene, ABCB4 gene and ABCB11 gene in a kit, reasonable design, convenient carrying and storage, easy to use, can be reduced by screening for familial incidence of hepatic cholestasis.

【技术实现步骤摘要】
一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒
本技术涉及检测基因突变试剂盒，特别是涉及一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒。
技术介绍
进行性家族性肝内胆汁淤积症是一种严重的胆汁淤积性肝病，为常染色体隐性遗传疾病。主要是由于基因突变而造成肝细胞和胆管上皮细胞上各功能蛋白的生成、修饰、调控缺陷导致肝细胞性胆汁淤积，通常在婴儿期或儿童期起病，最终发展为肝衰竭。根据其致病基因不同，PFIC主要分为3型：①PFIC1(Byler病)由ATP8B1基因突变引起，导致该基因编码的P型ATP酶-FIC1缺陷，PFIC1患者肝细胞胆汁酸过负荷，不过FIC1缺陷如何进展成胆汁淤积尚不清楚；②PFIC2源于编码胆盐排泄泵(bilesaltexportpump，BSEP)蛋白的基因ABCB11突变，影响了毛细胆管膜胆盐转运蛋白(BSEP)的表达，导致胆盐分泌降低，从而使得肝细胞内胆盐聚积而造成严重损伤；③PFIC3为编码多药耐药糖蛋白(MDR3)的ABCB4基因的突变，影响了毛细胆管磷脂转运器，导致磷脂输出障碍。ATP8B1基因位于18q21-22，含有28个外显子。据文献报道，PFIC1的ATP8B1基因突变多是无义突变和缺失突变，严重影响了FIC1蛋白功能，而且许多FIC1病患者是复合杂合子，更难以明辨基因型-表型相关性。ABCB11(BSEP)位于2q24-31，含有28个外显子。PFIC2基因型-表型相关性亦不明了。但大多数BSEP突变儿童，不论其突变类型，肝细胞毛细胆管膜均无BSEP蛋白表达；现已报道PFIC2患者BSEP的突变可达100余种。严重表型常与蛋白截断或蛋白生成衰竭的基因突变有关。其中大多为无效突变，表现为终止密码子提前出现及碱基的插入或缺失。而发生移码突变，余多为复合错义突变，这些突变均严重影响了BSEP蛋白的表达和(或)功能。已报道与PFIC3相关的ABCB4突变达30余种，ABCB4位于7q21.1，含有28个外显子，全长74kb。已有的研究显示ABCB4基因突变热点涉及外显子6、9、12、14、18、23、26，均位于编码蛋白的主体区，并且突变的类型与胆淤的严重性相关。近1/3病例突变致截断蛋白生成，肝脏免疫染色检测不出MDR3糖蛋白。另2/3病例为错义突变，多发生在高度保守的涉及ATP结合的WalkerA和B基序。这些氨基酸变化并不影响ATP酶活性与转运过程，而是造成细胞内MDR3糖蛋白组装错误，功能缺陷。PFIC1型及PFIC2型临床表型相似，通过对ATP8B1和ABCB11基因的检测,有助于进行确诊。PFIC为常染色体隐性遗传病，患儿兄弟姐妹有25％的发病、50％的携带致病突变的可能性。对无症状兄弟姐妹进行致病基因检测不但有助于早期发现疾病、早期治疗。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是提供一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒。本技术将样本保存、进行性家族性胆汁淤积症致病基因突变检测整合到一个试剂盒中，通过直接测序技术，可以直接进行DNA序列分析。直接测序技术是现有基因突变检测方法中最直接、最准确的方法，可以实现机械化自动化。因此，本技术携带方便、结果更加直观、准确。本技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒。一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒，包括盒体1、盒盖2和设置在盒体内的第一衬垫3，第一衬垫3上设有小孔，样本保存管4、装有PCR扩增试剂的试剂管5、装有PCR产物纯化试剂的试剂管6、含DNA测序试剂的试剂管7被设置于衬垫3的小孔内；试剂盒内还放置有与第一衬垫3平行的第二衬垫10，盒盖2内侧设有条码区9。所述小孔在衬垫3上分成两排平行排列。所述第二衬垫10上有凹槽，凹槽内设有装有正反向引物的2块96孔板8，该引物既为PCR扩增引物，又为DNA测序引物。所述96孔板8均用封口膜封口。试剂盒两侧板底部相对各设有一条凹槽，凹槽内滑动插入第二衬垫10。试剂盒两侧板底部设置有安装柱，第二衬垫10放置在安装柱上。所述条码区9内含试剂盒中试剂保存、配制信息。PCR扩增试剂包括：0.05U/μLTaqDNA聚合酶、400μMdNTPs、4mMMgCl2、20mMTris-HCL(PH8.0)和50mMKCL。所述引物试剂包括ATP8B1基因、ABCB4基因、ABCB11基因共154条引物。有益效果由于采用了上述的技术方案，本技术与现有技术相比，具有以下的优点和积极效果：本技术将样本保存、进行性家族性胆汁淤积症致病基因突变检测整合到一个试剂盒中，通过直接测序技术，可以直接进行DNA序列分析；直接测序技术是现有基因突变检测方法中最直接、最准确的方法，可以实现机械化自动化。因此，本技术携带方便、结果更加直观、准确。本技术将样本保存、以及ATP8B1基因、ABCB4基因、ABCB11基因的突变筛查整合在一个试剂盒内，设计合理，方便携带、保存，使用方法简单，通过筛查可降低进行性家族性肝胆汁淤积症的发病率。附图说明图1是本技术的一种用于检测检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒结构示意图；图2为ATP8B1、ABCB11、ABCB4基因外显子实验无突变的结果示意图；图3为ATP8B1、ABCB11、ABCB4基因外显子实验有突变的结果示意图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本技术。应理解，这些实施例仅用于说明本技术而不用于限制本技术的范围。此外应理解，在阅读了本技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所使用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。本技术的实施方式涉及一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒。如图1所示，为本技术提供的一种检测检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒结构示意图，包括盒体1、盒盖2和设置在盒体内的衬垫3，第一衬垫3将盒体分为上下两层，第一衬垫3上设有4个小孔，小孔平行排列成两排，样本保存管4、装有PCR扩增试剂的试剂管5、装有PCR产物纯化试剂的试剂管6、含DNA测序试剂的试剂管7被设置于衬垫3小孔内；试剂盒内还放置有与第一衬垫3平行的第二衬垫10，试剂盒两侧板底部相对各设有一条凹槽，凹槽内滑动插入第二衬垫10，其中第二衬垫10上有凹槽，凹槽内设有装有正反向引物的2块96孔板8，盒盖2内侧设有条码区9，包含试剂盒中试剂保存、配制信息。测试步骤如下：步骤1：采集被测者外周血标本，样本保存于样本保存管4中；步骤2：采用柱式提取法对样本中的基因组DNA进行提取；步骤3：PCR扩增PCR扩增试剂(总体积为1mL)成分包括：0.05U/μLTaqDNA聚合酶、400μMdNTPs、4mMMgCl2、20mMTris-HCL(PH8.0)和50mMKCL。引物序列如下：ATP8B1基因：ATP8B1-1-F：CGCCGCCAACTAGACACGC；ATP8B1-1-R：ACTCCCGAGCCCGCACAGGT；ATP8B1-2-F：GCAAG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒，其特征在于，包括盒体(1)、盒盖(2)和设置在盒体内的第一衬垫(3)，第一衬垫(3)上设有小孔，样本保存管(4)、装有PCR扩增试剂的试剂管(5)、装有PCR产物纯化试剂的试剂管(6)、含DNA测序试剂的试剂管(7)被设置于衬垫(3)的小孔内；试剂盒内还放置有与第一衬垫(3)平行的第二衬垫(10)，盒盖(2)内侧设有条码区(9)。

【技术特征摘要】
1.一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒，其特征在于，包括盒体(1)、盒盖(2)和设置在盒体内的第一衬垫(3)，第一衬垫(3)上设有小孔，样本保存管(4)、装有PCR扩增试剂的试剂管(5)、装有PCR产物纯化试剂的试剂管(6)、含DNA测序试剂的试剂管(7)被设置于衬垫(3)的小孔内；试剂盒内还放置有与第一衬垫(3)平行的第二衬垫(10)，盒盖(2)内侧设有条码区(9)。2.根据权利要求1所述的一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒，其特征在于，所述小孔在衬垫(3)上分成两排平行排列。3.根据权利要求1所述的一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒，其特征在于，所述第二衬垫(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：程乐华，卢守建，马腾飞，赵琨，王绪华，黄士昂，陈忠，
申请(专利权)人：上海新培晶医学检验所有限公司，
类型：新型
国别省市：上海,31