一种生物防粘连材料、制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种生物防粘连材料、制备方法及其应用，其特征在于：该生物防粘连材料以动物的小肠粘膜下层组织材料为原料，然后去除免疫原性、并保留完整的细胞外基质成分制成，该生物防粘连材料包括第一表面、第二表面和位于中间的可降解吸收结构，所述第一表面为光滑面，所述第二表面为粗糙面，中间为渐变连接的可降解吸收结构。本发明专利技术防粘连材料的粗糙面有利于引导创面组织细胞的生长，从而修复创面；而光滑面则有利于阻止这些细胞粘连其它组织，从而有效地防止粘连。可用于腹腔、胸腔或盆腔中创面的防粘连处理。

Biological anti adhesion material, preparation method and application thereof

The present invention provides a biological anti adhesion material, preparation method and application thereof, which is characterized in that the biological anti adhesion materials in animal intestinal submucosa tissue as the raw material, and then made ECM immunogenicity, and retain the integrity of the biological removal of anti adhesion material includes a first surface, a second surface and located in the middle of the biodegradable structure, wherein the first surface is a smooth surface, the second surface is a rough surface, the middle gradient connected biodegradable structure. The rough surface of the anti adhesion material is favorable for guiding the growth of the wound tissue cells and repairing the wound surface, and the smooth surface is beneficial to prevent the cells from sticking to other tissues, thereby effectively preventing adhesion. The utility model can be used for anti adhesion treatment in the abdominal cavity, the thoracic cavity or the pelvic cavity.

【技术实现步骤摘要】
一种生物防粘连材料、制备方法及其应用
本专利技术涉及医疗器械生物材料领域，具体为一种用于防止创面发生粘连的防粘连材料、制备方法及其应用。
技术介绍
粘连是结缔组织纤维带与相邻的组织或器官结合在一起而形成的异常结构。术后粘连发生率高达90％以上，胸腔、腹腔和盆腔手术都会导致不同程度的粘连。粘连导致的临床严重并发症包括肠梗阻、不育症、慢性盆腔疼痛等，增加二次手术的几率。而且，即使进行二次手术，仍存在同样的术后再次粘连和再次出现并发症的潜在性。目前，国内外有两种途径来防止术后组织粘连，一种是依据生理/药理机制的治疗方法，主要是药物减轻炎性反应和溶解纤维蛋白，另一种是医疗器械类的物理阻隔防粘连膜。防粘连膜在创面与周边组织之间形成临时的物理隔离屏障，在组织愈合过程中起到防粘连作用，并且可以在体内自行降解或被吸收。防粘连膜通常采用由透明质酸、纤维素衍生物、壳聚糖、聚乳酸等材质制造等高分子材料制造。然而部分高分子材料存在部分问题，例如聚乳酸的降解产物为酸性，局部蓄积容易产生轻微无菌性炎症；壳聚糖凝胶或溶液易流动，不易在局部形成较高浓度，而海绵状或薄膜状壳聚糖的机械强度以及韧性不够。有研究发现经免疫原去除处理的小肠黏膜下层组织(SIS)是一种无细胞、无免疫原性、能生物降解且具有纤维弹性良好的材料。专利技术专利(CN103272278A)曾公开了一种以动物源性免疫原去除小肠黏膜下层组织制备植入性医用生物材料的方法，介绍了通过动物组织材料的前置处理分离、初洗、病毒灭活、免疫原去除、氯化钠处理、成型、包装灭菌获得具有不同的尺寸、厚度和力学强度的医用产品。免疫原去除基质植入体内后可诱导患者自身细胞长入，为细胞重建受损组织提供模板同时提供临时物理隔离屏障，修复为血管化、功能化的组织或器官，并且免疫原去除基质会逐步降解，与重建组织再生过程基本同步，而且不会与其它组织发生粘连。
技术实现思路
本专利技术提供一种可用于防止组织创面恢复过程中与其它组织发生粘连的生物防粘连材料。该防粘连材料具有良好的生物相容性、适宜的组织粘附性以及一定的机械强度和柔韧性。此外，该防粘连材料具有合适的体内存留时间，可有效防止粘连形成又不影响伤口正常愈合。本专利技术采用的技术方案为：一种生物防粘连材料，其特征在于：该生物防粘连材料以动物的小肠粘膜下层为原料，然后去除免疫原性、并保留完整的细胞外基质成分制成；该生物防粘连材料包括第一表面、第二表面和位于中间的可降解吸收结构，所述第一表面为光滑面，所述第二表面粗糙面，中间为渐变连接的可降解吸收结构。本专利技术上述生物防粘连材料，包括多层小肠粘膜下层(SIS)组织材料，其中根据烘干和冷冻干燥等处理步骤使得小肠粘膜下层组织材料的外露的第一表面是相对光滑的表面，小肠粘膜下层组织材料的外露的第二表面是相对粗糙的表面；具体地：所述第一表面为经真空干燥组织材料所形成的表面；所述第二表面为经冷冻干燥组织材料所形成的表面。本专利技术所述动物为哺乳动物，优选为猪或牛。本专利技术所述去除免疫原性是指细胞残留量小于10个、DNA残留量小于10ng/mg、半乳糖苷酶(α-Gal)清除率为99％以上。本专利技术所述保留完整的细胞外基质成分是指保留包含胶原纤维、多糖物质、活性因子及生长因子成分。本专利技术所述的胶原纤维包括I型胶原蛋白及III型、IV型和VI型胶原蛋白。本专利技术所多糖物质包含硫酸软骨素和透明质酸。本专利技术所述活性因子包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及其配体。本专利技术所述生长因子包括碱性生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)。本专利技术所述补片为片状结构，包括2-8层免疫原去除基质材料组成，所述片状结构长1-10cm，宽1-7cm，厚度0.1-1mm。本专利技术所述的光滑面为致密少孔、具有光泽，所述的粗糙面为疏松多孔、呈亚光状。本专利技术所述的生物防粘连材料在体内的降解时间1-3个月。本专利技术所述的生物防粘连材料的拉伸断裂强度大于40N/cm，缝合保持力大于8N。本专利技术还提供一种生物防粘连材料的制备方法，其特征在于：包括原料的初处理、病毒灭活、免疫原去除、真空干燥和冷冻干燥。具体的，所述制备方法步骤包括：(1)组织前置处理：取小肠粘膜下层组织材料(SIS)，清洗并将水滤干；(2)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡小肠粘膜下层组织材料进行病毒灭活；(3)清洗：在超声环境下，分别用PBS溶液处理和水清洗；(4)免疫原去除：将步骤(3)清洗后得到的小肠粘膜下层组织材料进行免疫原去除，包括第一步采用NaOH溶液，超声振荡处理，处理后用盐酸清洗换液；第二步采用含有胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，多频超声振荡；第三步采用NaCl溶液，超声振荡；(5)清洗：在超声环境下，分别用PBS溶液和水清洗；(6)真空干燥：将由步骤(5)清洗的免疫原去除材料固定于模具上并一同干燥；(7)冷冻干燥：将由步骤(5)经清洗的免疫原去除组织材料覆盖于经步骤(6)得到的真空干燥后的组织材料上，一同进行冷冻干燥。专利技术步骤(2)采用的过氧乙酸-乙醇溶液中过氧乙酸的体积百分比浓度为0.1％-5％、乙醇的体积百分比浓度为5％-40％(用水配置成溶液)，过氧乙酸-乙醇溶液与小肠粘膜下层组织材料的体积比为(3-20)︰1，灭活时间2-4小时，温度范围为10-40℃。专利技术步骤(3)清洗具体为：在超声波清洗机中用PBS溶液清洗，然后用水清洗至检测电导率为10μS/cm以下终止，得到小肠粘膜下层基质材料。其中PBS溶液pH值范围为6-8，所使用的水为经过纯化处理的纯化水。本专利技术所述步骤(4)使用的免疫原去除液与小肠粘膜下层组织材料混合体积比为(20-40)：1。本专利技术步骤(4)第一步采用浓度为0.1-0.5mol/L的NaOH溶液，超声振荡处理1-30min，温度20-25℃，溶液与小肠粘膜下层组织材料的体积比为20-40：1，超声波功率在3000W以上；处理后用浓度为0.1-0.5mol/L的盐酸溶液清洗换液，并调整pH至中性；第二步采用含有质量百分比浓度为0.01-0.2％的胰蛋白酶和浓度为0.1-1mmol/L的EDTA的pH值为7的PBS溶液，多频超声振荡10-80min，多频超声至少包括两个超声频率，低频频率范围为20-40KHz，高频频率为60-90KHz，其中低频处理5-40min，高频处理5-40min，温度30℃，溶液与小肠粘膜下层组织材料的体积比为(30-40)：1，超声波功率在5000W以上；第三步采用采用浓度为0.8-1.5mol/L的NaCl溶液，超声振荡处理10min，温度20℃，溶液与小肠粘膜下层组织材料的体积比为20-40：1，超声波功率在3000W以上。所述步骤(5)中清洗过程为：在超声波清洗机中用PBS溶液清洗，然后用降温的注射用水清洗至检测清洗前后的注射用水电导率差为1μS/cm以下终止，得到小肠粘膜下层基质材料。其中PBS溶液pH值范围为6-8。注射用水温度优选10-40℃。本专利技术步骤(6)所述的干燥是将免疫原去除组织材料置于真空环境，温度25-40℃后，时间为8-16h，制备光滑面。本专利技术步骤(7)所述的冷冻干燥为：预冻至-45℃，保温1-2小时，然后调节温度至-15℃，保温5-7小时，再调节温度至0℃，保温2小时，最后调节温度至25℃，保温4小时，形成一面光滑一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物防粘连材料，其特征在于：该生物防粘连材料以动物的小肠粘膜下层组织材料为原料，然后去除免疫原性、并保留完整的细胞外基质成分制成，该生物防粘连材料包括第一表面、第二表面和位于中间的可降解吸收结构，所述第一表面为光滑面，所述第二表面粗糙面，中间为渐变连接的可降解吸收结构。

【技术特征摘要】
1.一种生物防粘连材料，其特征在于：该生物防粘连材料以动物的小肠粘膜下层组织材料为原料，然后去除免疫原性、并保留完整的细胞外基质成分制成，该生物防粘连材料包括第一表面、第二表面和位于中间的可降解吸收结构，所述第一表面为光滑面，所述第二表面粗糙面，中间为渐变连接的可降解吸收结构。2.根据权利要求1所述的生物防粘连材料，其特征在于：所述动物为哺乳动物，优选猪或牛。3.根据权利要求1所述的生物防粘连材料，其特征在于：所述去除免疫原性是指细胞残留量小于10个、DNA残留量小于10ng/mg、半乳糖苷酶清除率为99％以上。4.根据权利要求1所述的生物防粘连材料，其特征在于：所述细胞外基质包含胶原蛋白、多糖物质、活性因子及生长因子；所述胶原蛋白为I型胶原蛋白及III型、IV型和VI型胶原蛋白的组合物；所述多糖物质为包含硫酸软骨素和透明质酸的组合物；所述活性因子包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及其配体的组合物；所述生长因子成分为碱性生长因子和血管内皮生长因子。5.根据权利要求1所述的生物防粘连材料，其特征在于：所述第一表面为经真空干燥组织材料所形成的表面；所述第二表面为经冷冻干燥组织材料所形成的表面；所述的可降解为在体内降解时间1-3个月；所述的生物防粘连材料拉伸断裂强度大于40N/cm，缝合保持力大于8N。6.一种生物防粘连材料的制备方法，其特征在于：步骤包括：(1)组织前置处理：取小肠粘膜下层组织材料，清洗并将水滤干；(2)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡小肠粘膜下层组织材料进行病毒灭活；(3)清洗：在超声环境下，分别用PBS溶液处理和水清洗；(4)免疫原去除：将步骤(3)清洗后得到的小肠粘膜下层组织材料进行免疫原去除，包括第一步采用NaOH溶液，超声振荡处理，处理后用盐酸清洗换液；第二步采用含有胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，多频超声振荡；第三步采用NaCl溶液，超声振荡；(5)清洗：在超声环境下，分别用PBS溶液和水清洗；(6)真空干燥：将由步骤(5)清洗的免疫原去除材料固定于模具并干燥；(7)冷冻干燥：将由步骤(5)清洗的免疫原去除的组织材料覆盖于经步骤(6)得到的干燥后的组织材料上，一同进行冷冻干燥。7.根据权利要求6所述的生物防粘连材料的制备方法，其特征在于：步骤(2)采用的过氧乙酸-乙醇溶液中过氧乙酸的体积百分比浓度为0.1％-5％、乙醇的体积百分比浓度为5％-40％，过氧乙酸-乙醇溶液与小肠...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵博，王洪权，夏磊磊，赵延瑞，李学军，张晋辉，
申请(专利权)人：北京博辉瑞进生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11