重组人干扰素α2a栓及制备方法技术

本发明专利技术一种重组人干扰素α2a栓及其制备方法，主要有效成分重组人干扰素α2a原液是利用大肠杆菌表达技术构建含有人干扰素α2a基因的重组质粒，并转化至大肠杆菌中获得稳定的工程菌，工程菌发酵后通过一系列纯化工艺获得重组人干扰素α2a原液，经无菌过滤后和用作保护有效成分生物学活性的甘油明胶基质混合制成重组人干扰素α2a栓；解决了传统重组人干扰素α2a栓的价格高，蛋白质不稳定，贮藏难，患者注射使用依从性不好等问题。

Recombinant human interferon alpha 2a suppository and preparation method thereof

The invention relates to a recombinant human interferon alpha 2a suppository and its preparing method, the main effective components of recombinant human interferon alpha 2a solution is to construct a recombinant plasmid containing the expression of human interferon alpha 2a gene technology by Escherichia coli and transformed into E.coli engineering bacteria fermentation stability, through a series of purification process of recombinant human interferon alpha 2a solution, after sterile filtration and used as glycerin gelatin matrix mixed protection effective components made of biological activity of recombinant human interferon alpha 2a suppository; the traditional recombinant human interferon alpha 2a suppository high price, protein stability, storage, patient compliance is not good use of injection.

【技术实现步骤摘要】
重组人干扰素α2a栓及制备方法
本专利技术一种重组人干扰素α2a栓，同时提供了及其制备方法，属于生物制药

技术介绍
干扰素是（interferon，IFN）是由细胞基因控制，在特定诱导剂作用下产生的一类高活性、多功能蛋白质，具有广谱抗病毒、抗细胞分裂、抗肿瘤和细胞免疫调节等多种生物活性。干扰素抗病毒机理是主要作用于细胞膜上的受体系统，细胞内抗病毒蛋白基因去抑制而被激活，合成抗病毒蛋白mRNA，转移到胞浆核糖体，再转译成几种抗病毒蛋白，从而阻断病毒的繁殖。干扰素是当前国内外临床应用于有效治疗乙型肝炎、丙型肝炎、尖锐湿疣、慢性宫颈炎、宫颈糜烂、毛细胞性白血病等30多种病毒疾病的生物制剂。我国自从1990年批准卫生部长春生物制品研究所干扰素α1b滴眼剂治疗单疱性角膜炎以来，已相继批准治疗乙型肝炎、丙型肝炎、慢性宫颈炎、尖锐湿疣、单纯疱疹等10多种疾病，取得了理想的临床疗效。自60年代起，干扰素剂型已由滴眼剂发展为注射剂，软膏剂，栓剂等多种剂型，这些剂型可根据不同疾病进行选择并在临床应用中都获得了好的治疗效果。重组人干扰素α2a，是一类由白细胞及淋巴细胞所产生的多功能和高活性的诱生蛋白，遇光和湿不稳定。重组人干扰素α2a具有广谱抗病毒作用和对机体的免疫调节功能，其抗病毒机制主要通过干扰素同靶细胞表面干扰素受体结合，诱导靶细胞内2-5（A）合成酶、蛋白激酶PKR、MX蛋白等多种抗病毒蛋白，阻止病毒蛋白质的合成、抑制病毒核酸的复制和转录而实现。重组人干扰素α2a的剂型开发一直很不理想，影响了重组人干扰素α2a的应用。目前临床使用的重组人干扰素α2a有注射剂、软膏剂、片剂和栓剂等。临床证明干扰素浓度越高，其治疗病毒的效果就越好。但有些剂型的重组人干扰素α2a，由于全身给药或者局部给药浓度过高带来了各种副作用反应，治疗效果受到很大的影响。常用的重组人干扰素α2a注射剂存在使用不便和有轻微疼痛的问题，且不能直接作用于病灶，到达用药部位的浓度有限，且存在一定的不良反应。重组人干扰素α2a软膏剂虽然在治疗颜面和生殖器疱疹有很好的疗效，但同时也存在局限性。重组人干扰素α2a片剂塞入阴道后，重组人干扰素α2a难以溶出，难于发挥作用，且片剂对人体阴道的适应性不好。重组人干扰素α2a栓剂在临床上主要用于因病毒感染所引起的妇女慢性宫颈炎、宫颈糜烂和阴道炎的治疗，其临床疗效主要与重组人干扰素α2a的生物活性有关。重组人干扰素α2a作为一种蛋白质，因受各种因素的影响，其结构往往会被破坏而失去生物活性，因此在传统的重组人干扰素α2a栓剂生产过程中需要加入人血白蛋白作为保护剂，保持其生物活性，然而以人血白蛋白作为保护剂存在着来源困难、价格昂贵、生产成本增加、有感染血液病毒的风险。目前上市的重组人干扰素α2a栓剂的贮藏条件还必须要在2～8℃下避光保存和运输，不仅增加药品保存及运输过程中的能源消耗从而增加成本。同时，冰箱冷藏下保存使患者用药的依从性下降，不能更好的保证药品的疗效。因此，研究开发和改进重组人干扰素α2a栓的生产工艺，可使栓剂更加稳定，用药更加方便，局部用药能够让低浓度栓剂在阴道能够保持高水平的药物浓度，从而有效改善干扰素临床用药的一些不良反应。
技术实现思路
本专利技术提供了一种重组人干扰素α2a栓，解决了传统重组人干扰素α2a栓的价格高，蛋白质不稳定，贮藏难，患者注射使用依从性不好等问题，是一种将经过发酵、纯化得到的重组人干扰素α2a原液与甘油明胶基质混合均匀后制成的重组人干扰素α2a栓。本专利技术进一步还提供了重组人干扰素α2a栓的制备方法，药物的主要有效成分重组人干扰素α2a原液是利用大肠杆菌表达技术构建含有人干扰素α2a基因的重组质粒，并转化至大肠杆菌中获得稳定的工程菌，工程菌发酵后通过一系列纯化工艺获得重组人干扰素α2a原液，经无菌过滤后和用作保护有效成分生物学活性的甘油明胶基质混合制成重组人干扰素α2a栓。本专利技术公开的一种重组人干扰素α2a栓的制备方法，包括以下步骤：1)将甘油、明胶、注射用水按照5：2：1～5：3：2比例加入到无菌密闭的栓剂基质罐中，温度加热至80～90℃，并不断搅拌使其溶解，搅拌速度为20～40rpm，搅拌时间为2～4小时；2)将均匀混合后的栓剂基质在111～131℃下灭菌60～70分钟，从而达到无菌状态；3)将灭菌后的栓剂基质冷却至52～56℃，并保持基质温度在此范围内；4)将重组人干扰素α2a原液加入至栓剂基质中，并在加入重组人干扰素α2a原液时，保持温度在52～56℃范围内，充分搅拌15～20分钟使其混合均匀；5)将混合均匀后的原液和基质通入过滤压缩空气，经过用120～140目过滤器在线过滤，除去基质中的杂质成分；6)将过滤后的原液和基质，用全自动栓剂灌装机灌装，即得。本专利技术所述的重组人干扰素α2a栓在制备治疗由病毒感染引起的慢性宫颈炎、宫颈糜烂、阴道炎疾病药物中的用途。本专利技术所述的重组人干扰素α2a栓在制备治疗内人乳头瘤病毒及单纯疱疹病毒引起的疾病药物中的用途。【用法用量】：将本专利技术置于阴道后穹隆处，每次1片，隔日1次，6~10次为一个疗程。本专利技术的积极效果在于：1.本专利技术的基质配方适用于干扰素特性。甘油明胶栓剂基质：甘油不仅作为赋形剂，物理作用为脱水剂。由于细菌在局部脱水环境下繁殖缓慢，有一定抑菌作用，从而能够有效保护受损的阴道黏膜。明胶是由动物胶原经温和断裂后的产物，是一种成分复杂的高分子量水溶性蛋白质混合物，不仅作为赋形剂，还可作为蛋白酶抑制剂。健康妇女的阴道内均会存在一定数量的菌群会分泌蛋白酶，同时受损的生殖道上皮细胞也会分泌释放蛋白酶。如果不能有效抑制蛋白酶的活性，不仅会进一步消化破坏健康细胞，而且会使干扰素α2a蛋白质在未同干扰素Ⅰ型受体结合就会被降解。明胶作为蛋白酶的底物，能够有效保护干扰素α2a的蛋白质不被降解，保证其结构完整，使干扰素生物活性稳定，从而充分保证其生物活性的有效发挥，同时可干扰细胞释放的蛋白酶进一步破坏阴道受损的黏膜组织，从而实现良好的治疗效果。甘油明胶基质在人体内37.0～37.5℃的温度下逐渐溶解，通过阴道黏膜上皮吸收，释放干扰素α2a蛋白质与黏膜干扰素Ⅰ型受体结合，从而发挥良好的抗病毒作用。2.本专利技术的生产工艺简单易行，制造成本低廉，适用于大规模工业化生产，同时保证产品的质量均一性和稳定性更好。3.本专利技术的贮藏条件是于2～30℃下避光保存和运输，有效使用期限为0～42个月。药品贮藏温度范围更加宽泛，可常温下保存和运输不仅降低了药品保存及运输过程中的能源消耗从而节约成本，同时使患者用药的依从性得到提高，保证了药品的疗效。4.本专利技术作为局部外用制剂，直接作用于病变局部，使低浓度的干扰素在受损的阴道黏膜保持高活性成分，局部药物浓度较高，治疗效果非常显著，并且产品不会存在干扰素全身用药后常见的感冒样症状等副反应症状的发生，无任何毒副作用。5.本专利技术是一种使用方便，安全，无痛苦，经济，疗效明确的局部外用制剂，主要经阴道后穹隆给药用于治疗由病毒感染引起的慢性宫颈炎、宫颈糜烂、阴道炎等疾病，且疗效显著。还能消除体内人乳头瘤病毒及单纯疱疹病毒，从而具有预防宫颈癌的作用。附图说明图1为本专利技术重组人干扰素α2a栓pH加速稳定性考察结果（36.5～37.5℃）；图2为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人干扰素α2a栓，是通过以下方法制备而成的：重组人干扰素α2a原液为主要活性成分；将含有干扰素α2a基因的表达载体转化至大肠杆菌中，工程菌是利用大肠杆菌表达技术构建含有人干扰素α2a基因的重组质粒，并转化至大肠杆菌中获得的稳定的工程菌，工程菌经过发酵、纯化得到重组人干扰素α2a原液，然后与甘油、明胶和注射用水按比例制成的基质混合均匀后制成栓剂。

【技术特征摘要】
1.一种重组人干扰素α2a栓，是通过以下方法制备而成的：重组人干扰素α2a原液为主要活性成分；将含有干扰素α2a基因的表达载体转化至大肠杆菌中，工程菌是利用大肠杆菌表达技术构建含有人干扰素α2a基因的重组质粒，并转化至大肠杆菌中获得的稳定的工程菌，工程菌经过发酵、纯化得到重组人干扰素α2a原液，然后与甘油、明胶和注射用水按比例制成的基质混合均匀后制成栓剂。2.如权利要求1所述的重组人干扰素α2a栓的生产工艺，包括以下步骤：1)将甘油、明胶、注射用水按照5：2：1～5：3：2比例加入到无菌密闭的栓剂基质罐中，温度加热至80～90℃，并不断搅拌使其溶解，搅拌速度为20～40rpm，搅拌时间为2～4小时；2)将均匀混合后的栓剂基质在111～...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘景会，刘琳琳，李利，王宇，
申请(专利权)人：长春生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22