一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒及其应用，所述阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒，对CNTNAP2、CR1和LRAT与阿尔茨海默氏病相关基因的多态性位点进行检测，能了解个体在阿尔茨海默氏病方面的遗传因素，评估阿尔茨海默氏病发病的相对风险，对于阿尔茨海默氏病早期诊断、早期治疗、早期干预具有积极的意义。同时还能辅助阿尔茨海默氏病的诊断，指导合理用药，帮助预测后代患病风险等。

Alzheimer's disease susceptibility gene detection typing kit and its application

The invention discloses an Alzheimer's disease susceptibility gene typing detection reagent kit and its application, the Alzheimer's disease susceptibility gene detection and genotyping kit, polymorphisms of CNTNAP2, CR1 and LRAT associated with Alzheimer's disease genes were detected, can understand the individual genetic factors in Alzheimer's disease the assessment of the relative risk of Alzheimer's disease, is of positive significance for Alzheimer's disease early diagnosis, early treatment and early intervention. It can also aid the diagnosis of Alzheimer's disease, guide rational use of drugs, and help predict the risk of future generations.

【技术实现步骤摘要】
一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒及其应用
本专利技术涉及一种检验
，具体是一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒及其应用。
技术介绍
随着人类基因组计划(HumanGenomeProject，HGP)的完成，大量疾病相关基因的发现，促进了传统生物医学模式向可预测性、可预防性、个体化和参与性的基因组医学模式转变，为未来发展预防、诊断、治疗长期困扰人类的诸如癌症、心脑血管疾病、糖尿病、神经和精神疾病等重大复杂性疾病开辟了新途径，也为基因科学的产业化提供了良好的机遇。全基因组关联分析(GenomeWideAssociationStudies，GWAS)是应用人类基因组中数以百万计的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)为标记进行病例一对照关联分析，即在一定人群中收集病例组和对照组DNA，进行SNPs芯片扫描，采用关联分析比较受检SNPs标记的某一等位基因频率在病例组和对照组间有无显著性差异，筛选与疾病关联的基因序列变异，做出该SNPs是否与疾病关联的判断，预测疾病的患病率及风险。该方法研究前不需构建任何假设，不再局限于候选基因或候选染色体区域作为关联分析对象，而是针对基因组中所有SNPs，随机进行基因分型，分析SNPs与疾病的关联度，可在全基因组水平上，开展多中心、大样本、反复验证的基因与疾病的关联研究，全面及时疾病发生、发展和治疗的相关遗传基因。目前发现遗传因素，或其与环境因素之间的相互作用参与了几乎所有的人类疾病的发生过程。一些复杂的疾病往往不是由单一基因突变引起的，其发生发展与多基因多位点变异有关，且这些位点的变异可能与环境因素相关，这些位点可提高或降低个体患某种疾病的相对风险，被称为该种疾病的易感位点。根据大量的GWAS结果，已经发现并证明的一系列复杂疾病的易感位点已被普遍应用于基因检测领域。阿尔茨海默症(Alzheimer'sdisease,AD)隐匿起病，以进行性认知功能障碍、记忆力减退为主要表现的年龄相关的神经系统变性疾病，是老年期痴呆中最常见的类型。男女两性均对此病易感，以女性稍甚。该病患病率在老年人群中呈指数上升，65岁时患病率约1％，至95岁时达到40％-50％，目前已成为不断增长的威胁公众健康的流行疾患。晚发型AD(late-onsetAlzheimer'sdisease,LOAD)是指发病年龄大于65岁的患者，多无家族史。尽管AD的病因及发病机制尚未明了，但遗传因素在AD发病中的作用越来越受到人们的关注。发生在三个基因(APP,PSEN1,PSEN2)中的突变可导致该病，而APOE4等位基因与患病的危险增加有关。随着人类基因组研究的进展，可能会有更多与该病相关的基因被发现。目前，应用遗传筛选测试，可以帮助阿尔茨海默氏病的高危人群更好地准备和应对未来可能发生的疾病。CNTNAP2(Contactin-associatedprotein-like2，接触蛋白相关蛋白样蛋白2)，位于7号染色体上，属于轴突蛋白家族成员，该基因编码的膜蛋白主要在神经系统中表达，在有髓鞘的神经纤维细胞的跳跃式神经冲动传导过程中发挥重要作用。Logue等人的研究结果显示，CNTNAP2的基因多态性是AD的重要遗传风险因素，其中rs10273775的等位基因与LOAD发病风险显著相关(LogueMarkWetal.,AcomprehensivegeneticassociationstudyofAlzheimerdiseaseinAfricanAmericans.,ArchNeurol68(12):1569-79)。CR1(Complementreceptor1，补体受体1)，又名C3b/C4b受体orCD35，属于补体激活的调控蛋白家族成员，定位于1号染色体“RCA簇”区域。CR1分布广泛，能作为I因子介导C3b裂解的辅助因子，加速C3转化酶衰变，促进吞噬细胞对C3b/C4b所包被颗粒及免疫复合物的吞噬、激活和杀菌代谢。已经有研究发现转基因鼠过度表达C3能减少Aβ的沉积和病理作用。相反，抑制C3转化酶的表达则加速Aβ的沉积和神经退行性改变。Aβ通过C3b介导与红细胞表面的CR1相结合，并最终被红细胞清除出循环系统。LAMBERT等人的研究结果显示，CR1的基因多态性是高加索人患AD的重要遗传风险因素，rs6656401和rs3818361的等位基因是迟发型AD发病的危险因素。另外一项基因组研究显示，rs3818361也是欧洲和美洲人群发生AD的危险因素(HAROLDD,ABRAHAMR,HOLLINGWORTHPJ.Genome-wideassociatiedstudyidentifiesvariantsatCLUandPICALMassociatedwithAlzheimer'sdisease.NatGenet,2009,41:1088-1093)。LRAT(LecithinRetinolAcyltransferase，卵磷脂-视黄醇酰基转移酶)，定位于色素上皮细胞的内质网膜上，其N端位于细胞质侧，C端位于内质网管腔侧，其功能是催化全反式视黄醛与磷脂胆碱进行酯化反应生成全反式视黄酯，因此对体内的维生素A代谢途径起重要作用。AbrahamR等人的研究发现，位于LRAT转录起始点上游13Kb处的rs727153位点LOAD有着显著的相关性，并通过更多覆盖LRAT的SNP位点，进一步确定了LRAT为LOAD的新的候选易感基因(AbrahamR,MoskvinaV,SimsRetal.Agenome-wideassociationstudyforlate-onsetAlzheimer'sdiseaseusingDNApooling.BMCMedGenomics,2008Sep29；1:44)。因此，对CNTNAP2、CR1和LRAT与阿尔茨海默氏病相关基因的多态性位点进行检测，能了解个体在阿尔茨海默氏病方面的遗传因素，评估阿尔茨海默氏病发病的相对风险，对于阿尔茨海默氏病早期诊断、早期治疗、早期干预具有积极的意义。同时还能辅助阿尔茨海默氏病的诊断，指导合理用药，帮助预测后代患病风险等。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒及其应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒，所述试剂盒中包括DNA提取试剂盒、DNA扩增试剂盒和测序试剂盒；所述DNA提取试剂盒采用天根生化科技有限公司的DP322型产品，所述DNA扩增试剂盒主要包括扩增引物、酶、PCRBuffer、dNTPMixture、扩增引物，所述扩增引物为：1)F：5'-CCAGAGACAACCAGTGCTCA-3'，R：5'-AAATCCACCCTGCTGTATGC-3',2)F：5'-GGCTTAGGGTATGCTCACCA-3'，R：5'-TGAGGGACTGCCTCTGTAGG-3',3)F：5'-AGATGAAAAGGGGCCAGATT-3',R：5'-TATCCCTGGGCAGTTTTGTC-3'；所述酶采用宝生物工程有限公司的TaKaRaTaqTM酶；所述测序试剂盒采用美国ABI公司的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括DNA提取试剂盒、DNA扩增试剂盒和测序试剂盒；所述DNA提取试剂盒采用天根生化科技有限公司的DP322型产品，所述DNA扩增试剂盒主要包括扩增引物、酶、PCR Buffer、dNTP Mixture、扩增引物，所述扩增引物为：1)F：5'‑CCAGAGACAACCAGTGCTCA‑3'，R：5'‑AAATCCACCCTGCTGTATGC‑3',2)F：5'‑GGCTTAGGGTATGCTCACCA‑3'，R：5'‑TGAGGGACTGCCTCTGTAGG‑3',3)F：5'‑AGATGAAAAGGGGCCAGATT‑3',R：5'‑TATCCCTGGGCAGTTTTGTC‑3'；所述酶采用宝生物工程有限公司的TaKaRa Taq

【技术特征摘要】
1.一种阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括DNA提取试剂盒、DNA扩增试剂盒和测序试剂盒；所述DNA提取试剂盒采用天根生化科技有限公司的DP322型产品，所述DNA扩增试剂盒主要包括扩增引物、酶、PCRBuffer、dNTPMixture、扩增引物，所述扩增引物为：1)F：5'-CCAGAGACAACCAGTGCTCA-3'，R：5'-AAATCCACCCTGCTGTATGC-3',2)F：5'-GGCTTAGGGTATGCTCACCA-3'，R：5'-TGAGGGACTGCCTCTGTAGG-3',3)F：5'-AGATGAAAAGGGGCCAGATT-3',R：5'-TATCCCTGGGCAGTTTTGTC-3'；所述酶采用宝生物工程有限公司的TaKaRaTaqTM酶；所述测序试剂盒采用美国ABI公司的Terminatorv3.1CycleSequencingKit。2.根据权利要求1所述的阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述扩增引物为基于基因CNTNAP2、CR1和LRAT进行设计合成的。3.一种如权利要求1-2任一所述的阿尔茨海默氏病易感基因检测分型试剂盒的应用，其特征在于，具体步骤为：(1)首先，将采集回来的样本按照DNA提取试剂盒提...

【专利技术属性】
技术研发人员：何侃，栗娟，王佳，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：上海易瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31