一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖制造技术

一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖，该铁皮石斛多糖为硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS‑2；所述硫酸化修饰铁皮石斛多糖SDOS‑2的分子量为9.53×104Da、硫酸根含量为14.70%、取代度为1.29；所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS‑2由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸6种单糖组成。本发明专利技术的有益效果为：（1）本发明专利技术所得SDOS‑2在清除DPPH和•O2‑自由基的IC50值已经超过了阳性对照抗坏血酸；（2）硫酸化修饰后的铁皮石斛多糖SDOS‑2对细胞有一定的促进生长作用；SDOS‑2兼具抗肿瘤功能和抗氧化能力，功效显著，其市场应用前景十分广阔。

Dendrobium candidum polysaccharide with anti-tumor and antioxidation function

A kind of antitumor and antioxidant activity of Polysaccharides from Dendrobium candidum, the Dendrobium polysaccharide sulfate modification of Dendrobium officinale polysaccharide SDOS 2; the molecular weight of the sulfation of Polysaccharides from Dendrobium candidum SDOS 2 is 9.53 * 104Da, sulfate content was 14.70%, the degree of substitution was 1.29; the sulfated modified polysaccharide SDOS 2 composed of glucose, galactose, mannose, glucuronic acid, galacturonic acid, Arabia sugar, 6 kinds of monosaccharide composition. The beneficial effects of the invention are: (1) the SDOS 2 in the clearance of DPPH and - O2 free radical IC50 value has more than ascorbic acid; (2) sulfated modified polysaccharide SDOS on cell 2 could improve the growth of SDOS 2 has anti; function and antioxidative ability of tumor, efficacy significantly, the market prospect is very broad.

【技术实现步骤摘要】
一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖
本专利技术涉及中药材深加工
，具体涉及一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖。
技术介绍
铁皮石斛，是兰科多年生附生草本植物，为石斛之极品，一般生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒，因其表皮呈铁绿色而得名。。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，益胃生津，滋阴清热。一千多年前的道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首，国家卫生部已将铁皮石斛列为可用于保健食品的中药。本专利技术人前期实验结果表明表明铁皮石斛多糖SDO-2是从铁皮石斛中提取的一种小分子的酸性多糖，其分子量为5.06×104Da，具有与Vc近似的抗氧化活性，可作为一种天然无毒抗氧化剂，应用于食品、医药和化妆品等领域。但该化合物仍然具有稳定性差、易变色等缺点。目前，多糖因化学修饰后可以改善其固有的生物活性或获得新的功能特性而受到广泛关注。常用的修饰方法有硫酸化、乙酰化、羧甲基化等，其中，硫酸化是增强多糖的生物活性的经典方法。研究表明硫酸化多糖是人类免疫缺陷病毒（HIV）的强效抑制剂。灵芝多糖硫酸化后比之前更有效的抑制S-180细胞生长。多糖硫酸化不仅可以提高它们的抗氧化活性，也使它们具有抗菌的功效。硫酸化修饰的方法有很多，如氯磺酸法、浓硫酸法，其中氯磺酸遇水容易爆炸，浓硫酸腐蚀性太强。考虑到试剂成本及方法的便捷、安全以及产物的得率，以实现工业化生产，本专利技术首次将三氧化硫-吡啶法运用到铁皮石斛多糖中活性最高的组分SDO-2的硫酸化修饰中，得到一种简单、温和、产物的产率高并且活性和稳定性强的硫酸化修饰方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术中的不足，提供一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖，解决了现有产品中安全性差的问题，其兼具抗肿瘤和抗氧化作用，并且SDOS-2对HELF细胞无毒副作用，在医疗保健等领域具有巨大的应用潜力。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖，该铁皮石斛多糖为硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2；所述硫酸化修饰铁皮石斛多糖SDOS-2的分子量为9.53×104Da、硫酸根含量为14.70%、取代度为1.29；所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸6种单糖组成。优选地，所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2是以铁皮石斛多糖SDO-2为原料，利用三氧化硫-吡啶法进行硫酸化修饰获得，步骤如下：（1）以纯度不低于95%的铁皮石斛多糖SDO-2为原料，加入原料质量35~50倍的溶剂甲酰胺，25℃水浴30min；（2）再按原料质量的1~2倍加入三氧化硫-吡啶，60~80℃油浴下磁力搅拌3h，最后以4mol/L的NaOH调pH至中性，透析，浓缩，醇沉过夜，沉淀经冷冻干燥得硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2，即为兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖。本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术以铁皮石斛多糖SDO-2为原料，利用三氧化硫-吡啶法进行硫酸化修饰，得到了硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2；该方法步骤简便、易于操作，SDO-2的转化率为33%，产物中硫酸根含量为14.70%、取代度为1.29，最终产品纯度高达99%以上；（2）本专利技术所得SDOS-2在清除DPPH和•O2-自由基的IC50值已经超过了阳性对照抗坏血酸；SDOS-2对HeLa细胞的抑制率比SDO-2的高2倍；SDOS-2对MCF-7细胞的抑制率几乎比SDO-2多6倍；在10μg/mL的浓度，5-Fu（一个著名的抗癌药物，可在很大程度上使癌细胞致死，但同时也对正常细胞有巨大的副作用）对HELF细胞的存活率仅为50％左右，但在400μg/mL时的SDOS-2，其对HELF细胞的存活率比5-Fu对HELF细胞的存活率高6倍以上，且修饰后对细胞有一定的促进生长作用；SDOS-2兼具抗肿瘤功能和抗氧化能力，功效显著，其市场应用前景十分广阔。附图说明附图1为本专利技术实施例1所用原料铁皮石斛多糖SDO-2及所得产品硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2的高效液相色谱（HPLC）检测图谱；附图2为本专利技术实施例4中样品对DPPH自由基的清除能力的测试结果；附图3为本专利技术实施例4中样品对超氧阴离子(•O2−)的清除能力的测试结果；附图4为本专利技术实施例4中样品对羟基自由基（•OH）的清除能力的测试结果；附图5为本专利技术实施例4中样品还原力的测试结果；附图6为本专利技术实施例4中样品对HeLa及MCF-7细胞的抑制能力的测试结果；附图7为本专利技术实施例4中样品对对HELF细胞的毒性作用的测试结果。具体实施方式为使对本专利技术的结构特征及所达成的功效有更进一步的了解与认识，用以较佳的实施例及附图配合详细的说明，说明如下：实施例1：一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖，该铁皮石斛多糖为硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2；所述硫酸化修饰铁皮石斛多糖SDOS-2的分子量为9.53×104Da、硫酸根含量为14.70%、取代度为1.29；所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸6种单糖组成。所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2是以铁皮石斛多糖SDO-2为原料，利用三氧化硫-吡啶法进行硫酸化修饰获得，步骤如下：（1）取纯度不低于95%的铁皮石斛多糖SDO-2为100mg原料，加入5g的溶剂甲酰胺（PF），25℃水浴30min；（2）再加入质量为200mg三氧化硫-吡啶（SO3-Py），70℃油浴下磁力搅拌3h，最后以4mol/L的NaOH调pH至中性，透析，浓缩，醇沉过夜，沉淀经冷冻干燥得硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2，即为兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖。附图1为本实施例1所用原料铁皮石斛多糖SDO-2及所得产品硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2的高效液相色谱（HPLC）检测图谱。实施例2：本实施例兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖为硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2，其分子量为9.53×104Da、硫酸根含量为14.70%、取代度为1.29；由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸6种单糖组成。；其制备步骤如下：取纯度不低于95%的铁皮石斛多糖SDO-2100mg，加入4g的溶剂甲酰胺（PF），25oC水浴30min，再加入100mg的SO3-Py，80℃油浴下磁力搅拌3h，NaOH（4mol/L）调pH至中性，透析，浓缩，醇沉过夜，沉淀经冷冻干燥得硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2。实施例3：本实施例兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖为硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2，其分子量为9.53×104Da、硫酸根含量为14.70%、取代度为1.29；由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸6种单糖组成。；其制备步骤如下：取纯度不低于95%的铁皮石斛多糖SDO-2100mg，加入4.5g的溶剂甲酰胺（PF），25oC水浴30min，再加入200mg的SO3-Py，60℃油浴下磁力搅拌3h，NaOH（4mol/L）调pH至中性，透析，浓缩，醇沉过夜，沉淀经冷冻干燥得硫酸化修饰的铁本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖，其特征在于：该铁皮石斛多糖为硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS‑2；所述硫酸化修饰铁皮石斛多糖SDOS‑2的分子量为9.53×104Da、硫酸根含量为14.70 %、取代度为1.29；所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS‑2由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸6种单糖组成。

【技术特征摘要】
1.一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖，其特征在于：该铁皮石斛多糖为硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2；所述硫酸化修饰铁皮石斛多糖SDOS-2的分子量为9.53×104Da、硫酸根含量为14.70%、取代度为1.29；所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SDOS-2由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、半乳糖醛酸6种单糖组成。2.根据权利要求1所述的一种兼具抗肿瘤和抗氧化作用的铁皮石斛多糖，其特征在于：所述硫酸化修饰的铁皮石斛多糖SD...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛正华，林佩利，
申请(专利权)人：温岭市锦华铁皮石斛有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33