一种试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术提供一种试剂盒及其使用方法，其中，所述试剂盒包括用于扩增STR位点D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、Penta E、Penta D和Amelogenin的16对上、下游引物对中的一对或多对，所述16对上、下游引物对的序列如SEQ ID NO：1‑32所示。本发明专利技术上述试剂盒和使用方法涉及的16对上、下游引物具有特异性好、扩增效率高的优点，能够快速、准确地对16个STR位点进行分型。

Reagent kit and method for using the same

The invention provides a kit and use method thereof, wherein, the kit includes for amplification of STR loci D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, CSF1PO, FGA, TH01, TPOX, vWA, Penta, E, Penta D and Amelogenin 16 on the upstream and downstream primers for the one or more pairs, the 16 of the upstream and downstream primer sequences such as SEQ ID NO:1 32 shows. The 16 pairs of upper and lower primers involved in the kit and the method used in the invention have the advantages of good specificity and high amplification efficiency, and can rapidly and accurately classify 16 STR loci.

【技术实现步骤摘要】
一种试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及STR检测领域，具体而言，涉及一种试剂盒及其使用方法。
技术介绍
短串联重复序列(shorttandemrepeat，STR)也称微卫星DNA(microsatelliteDNA)或简单重复序列(simplesequencerepeat，SSR)，是广泛存在于人类基因组的一类以几个碱基为核心单位串联重复形成的DNA序列。STR基因座分布广泛，人基因组中平均每100～200kb中出现一个，其核心重复单位一般为2～6个碱基，重复次数在10～60次之间。由于不同个体间的重复单位次数的差异而具有很高的多态性，同时这种多态性在遗传过程中遵照孟德尔遗传规律，因此STR遗传分析被广泛应用于法医个体识别、亲缘鉴定、群体遗传学等诸多领域。复合扩增技术(多重PCR)是目前检测STR最主要的技术手段，这是由于STR基因座片段小、易扩增且各基因座之间的扩增条件接近，因此能够将两个及两个以上基因座放在同一反应管中进行复合扩增，其优点在于高效率和高产率，有效节约时间和所需试剂。通过将不同荧光分子标记于各基因座引物末端即可利用毛细管电泳技术将扩增出的多种不同片段分离开，并通过与DNA分子量标准对比精确计算出STR等位基因片段大小，进而实现STR分型。目前，STR遗传分析技术已成为法庭科学鉴定中最常用、发展最成熟的技术而被用于各类案件检验。STR数据也已经成为各国法庭科学数据库的重要组成部分，以实现对犯罪嫌疑人DNA数据的比对和排查。美国FBI选用以下13个核心STR基因座用于构建DNA分型数据库(CombinedDNAIndexSystem，CODIS)，包括：D3S1358，D5S818，D7S820，D8S1179，13S317，D16S539，D18S51，D21S11，CSF1PO，FGA，TH01，TPOX，vWA。90年代中后期，美国ABI公司和Promega公司分别推出AmpFISTRIdentifiler试剂盒与16试剂盒，均包括以上13个STR基因座。国内也相似产品，如基点认知技术有限公司推出的Goldeneye20A等。目前所采用的试剂盒大多数是以上述CODIS标准中13个核心基因座为基础，增加其他位点的基因座。但现有的STR遗传分析技术存在引物设计和STR分组不合理、需要通过复杂方法处理DNA模板、扩增体系以及反应条件不佳等缺陷，导致扩增效率低、检测时间长和分型效果差。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种试剂盒，所述试剂盒能够快速、准确地对所述16个STR位点进行扩增和分型。本专利技术的第二目的在于提供一种使用上述试剂盒进行PCR的方法，通过所述方法能够快速、准确地对上述16个STR位点进行分型。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种试剂盒，包括用于扩增STR位点D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、PentaE、PentaD和Amelogenin的16对上、下游引物对中的一对或多对，所述16对上、下游引物对的序列如SEQIDNO：1-32所示。本专利技术还涉及一种使用上述试剂盒进行PCR的方法，所述方法包括以下步骤：(1)将上述试剂盒中的试剂与DNA模板混合并进行PCR反应；(2)分析扩增产物的丰度。本专利技术上述试剂盒能够快速、准确地对所述16个STR位点进行扩增和分型。具体实施方式本专利技术一方面涉及一种试剂盒，包括用于扩增STR位点D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、PentaE、PentaD和Amelogenin的16对上、下游引物对中的一对或多对，所述16对上、下游引物对的序列如SEQIDNO：1-32所示。本专利技术所述试剂盒涉及16对上、下游引物对，上述16对上、下游引物对具有特异性好、扩增效率高的优点，在PCR扩增过程中不会形成引物二聚体、非特异扩增和交叉反应，避免非目的产物的出现对分型结果的影响，同时扩增效率高，检测信号强，一方面可以缩短PCR扩增时间，另一方面由于检测信号高，可以快速、准确地实现对PCR产物的检测和STR分型。在一些实施方式中，所述试剂盒包括16对上、下游引物对中的13对、14对、15对或16对。在一些实施方式中，所述试剂盒包括所述16对上、下游引物对。在一些实施方式中，试剂盒中包括的所述上、下游引物对被不同荧光染料标记为不同的组。在一些实施方式中，所述上下游引物对被不同荧光染料标记为3组、4组、5组或6组。在一些实施方式中，所述上下游引物对被不同荧光染料标记为4组。在一些实施方式中，每对引物中的至少一条引物被荧光染料标记。在一些实施方式中，每对上、下游引物中至少有一条引物的5’端或3’端被荧光染料标记。在一些实施方式中，所述荧光染料选自FAM、FITC、SYBRGreenⅠ、HEX、VIC、JOE、TAMRA、TET、ROX、Cy3、Cy5、TEXAS-Red、PET、NED、AlexaFluor、DyLight和FTM。在一些实施方式中，所述荧光染料选自FAM、HEX、TAMRA和ROX。在一些实施方式中，所述试剂盒包括所述16对上、下游引物对，其中所述16对上、下游引物对分别被4种不同荧光染料标记为4组。在一些实施方式中，其序列依次如SEQIDNO：1-10所示、分别用于扩增D5S818、TH01、D8S1179、TPOX和CSF1PO的上、下游引物对被标记为第1组；其序列依次如SEQIDNO：11-18所示、分别用于扩增D13S317、D7S820、D21S11和PentaE的上、下游引物对被标记为第2组；其序列依次如SEQIDNO：19-26所示、分别用于扩增D3S1358、D16S539、Vwa和D18S51的上、下游引物对被标记为第3组；其序列依次如SEQIDNO：27-32所示、分别用于扩增Amelogenin、PentaD和FGA的上、下游引物对被标记为第4组。在一些实施方式中，标记第1组引物对的荧光染料为FAM，标记第2组引物对的荧光染料为HEX，标记第3组引物对的荧光染料为TAMRA，标记第4组引物对的荧光染料为ROX。本专利技术所述试剂盒对所述上、下游引物对的对数、分组和荧光标记情况作出限定，其中，通过引物对的巧妙分组确保组内引物对扩增获得的产物在分子量大小上不存在重叠，配合不同荧光染料标记不同组的引物对，只需要对产物进行一次分析即可同时获得多对引物的PCR检测结果，从而实现多位点STR分型。在一些实施方式中，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、去离子水、上样缓冲液和DNA分子量内标中的一种或多种。在一些实施方式中，所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4DNA聚合酶、Klenow片段。在一些实施方式中，所述DNA聚合酶为TaqDNA聚合酶。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒，包括用于扩增STR位点D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、Penta E、Penta D和Amelogenin的16对上、下游引物对中的一对或多对，其特征在于，所述16对上、下游引物对的序列如SEQ ID NO：1‑32所示。

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，包括用于扩增STR位点D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、PentaE、PentaD和Amelogenin的16对上、下游引物对中的一对或多对，其特征在于，所述16对上、下游引物对的序列如SEQIDNO：1-32所示。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括16对上、下游引物对中的13对、14对、15对或16对；优选地，所述试剂盒包括所述16对上、下游引物对。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，试剂盒中包括的所述上、下游引物对被不同荧光染料标记为不同的组；优选地，所述上下游引物对被不同荧光染料标记为3组、4组、5组或6组；特别优选地，所述上下游引物对被不同荧光染料标记为4组；优选地，每对引物中的至少一条引物被荧光染料标记；更优选地，所述至少一条引物的5’端或3’端被荧光染料标记；优选地，所述荧光染料选自FAM、FITC、SYBRGreenⅠ、HEX、VIC、JOE、TAMRA、TET、ROX、Cy3、Cy5、TEXAS-Red、PET、NED、AlexaFluor、DyLight和FTM；更优选地，所述荧光染料选自FAM、HEX、TAMRA和ROX。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括所述16对上、下游引物对，其中所述16对上、下游引物对分别被4种不同荧光染料标记为4组；优选地，其序列依次如SEQIDNO：1-10所示、分别用于扩增D5S818、TH01、D8S1179、TPOX和CSF1PO的上、下游引物对被标记为第1组；其序列依次如SEQIDNO：11-18所示、分别用于扩增D13S317、D7S820、D21S11和PentaE的上、下游引物对被标记为第2组；其序列依次如SEQIDNO：19-26所示、分别用于扩增D3S1358、D16S539、Vwa和D18S51的上、下游引物对被标记为第3组；其序列依次如SEQIDNO：27-32所示、分别用于扩增Amelogenin、PentaD和FGA的上、下游引物对被标记为第4组；更优选地，标记第1组引物对的荧光染料为FAM，标记第2组引物对的荧光染料为HEX，标记第3组引物对的荧光染料为TAMRA，标记第4组引物对的荧光染料为ROX。5.如权利要求1～4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、水、上样缓冲液和DNA分子量内标中的一种或多种；优选地，所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨志伟，杨雪艳，李云，
申请(专利权)人：北京普利斯康医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11