生物样本血液中苯系物的测定方法技术

本发明专利技术为一种生物样本血液中苯系物的测定方法，即通过吹扫捕集/气相色谱/质谱联用技术同时测定血液中6种苯系物含量的方法。本发明专利技术对吹扫捕集实验条件进行优化，使血液中的6种苯系物富集和解析，然后用气相色谱/质谱联用和以同位素内标法选择特征离子进行定性和定量分析。本发明专利技术方法操作简便、分析周期短、分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求，适合用于生物样本血液中苯系物的同时检测分析。

Biological samples - Determination of BTEX in blood

The present invention relates to a method for the determination of benzene homologues in blood samples of biological samples, namely, simultaneous determination of 6 benzene homologues in blood by purge / trap / gas chromatography / mass spectrometry. The invention of purge and trap experimental conditions were optimized, and the analysis of 6 kinds of benzene compounds in the blood concentration, then by gas chromatography / mass spectrometry and qualitative and quantitative analysis of characteristics of ion selective by isotope internal standard method. The method of the invention has the advantages of simple operation, short analysis cycle, good separation degree, accuracy and precision, and can meet the requirements of analysis and testing, and is suitable for simultaneous detection and analysis of benzene homologues in biological sample blood.

【技术实现步骤摘要】
生物样本血液中苯系物的测定方法
本专利技术涉及化学分析检测
，具体是一种生物样本血液中苯系物的测定方法。
技术介绍
苯系物是化工、医药、农药、制革等行业的重要原料和溶剂。由于苯系物具有较强的挥发性，在环境中广泛存在，因其接触途径广，已成为一种重要的职业危害因素。由于苯系物对人体健康的危害极大，如对造血系统造成损伤及致畸致癌。因此如何对苯系物内暴露含量进行有效的测定是当前环境医学领域研究的热点和亟待解决的问题。目前，对于空气中、水中苯系物的检测方法已有很多，而且各方法已被公众所熟知，与水、空气等相比，血液成分及理化性质非常复杂，用于检测水和空气中苯系物的方法并不适用于对血液的检测。目前未见有关于生物样本血液中苯系物的检测技术的报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种生物样本血液中苯系物的测定方法，至少达到分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求。针对以上技术问题，本专利技术提供的生物样本血液中苯系物的测定方法，采用吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱联用法测定血液中苯系物的含量，该测定方法具体包括如下步骤：混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，用甲醇配制混标溶液；同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。本专利技术采用P&T/GC/MS联用技术同位素内标法，对生物样本血液中苯系物含量进行准确的定性定量分析，为人体苯系物内暴露检测方法提供科学依据，检测结果分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求。本专利技术使用到了同位素内标法。现有技术中定量方法多用外标法或归一化法，但是归一化法需要知道各组分的校正因子，不适于微量杂质的含量测定；外标法要求对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近，且该方法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。内标法即选择样品中不含有的纯物质作为内标物加入待测样品溶液中，以待测组分和内标的峰面积做比值，测定待测组分含量的方法。内标法优点：在色谱柱不超载的范围内，定量结果与进样量重复性无关；只要被测物质和内标物出峰，且能完全分离就可定量，与其他组分无关；能避免实验各步处理操作中的待测组分丢失造成的定量不准确。内标法缺点：内标物不易得。内标物的要求：内标物是原样品中不含有的组分，否则会使峰重叠而无法准确测量内标物的峰面积；内标物与待测化合物有相同或相似的理化性质，它们的保留时间应相近，但彼此能完全分离(分离度≥1.5)；内标物要求与样本成分不干扰、不反应；内标物必须是纯度合乎要求的纯物质。本专利技术用同位素取代物作为内标，即用同位素取代待测化合物的C或H，使内标物质与待测化合物既有相似的理化性质又彼此能完全分离。同位素内标与待测化合物的保留时间和离子丰度等色谱行为类似。进一步地，吹扫捕集仪的参数设定：以99.999%的氦气为吹扫气，吹扫时间为11min，吹扫流量为40mL/min；解析温度为250℃，解析流量为300mL/min，解析时间为2min；烘烤温度为280℃，烘烤流量为200mL/min，烘烤时间为2min。约35%-70%的血液检测结果差错出自血样检测前。为获得可靠的检测数据，提供给疾病预防控制中心和环保部门真实准确的实验数据，必须严格控制采血、血液保存及检测等一系列过程中的干扰。血液中的苯系物属于痕量有毒有害有机污染物，需要采用高富集效率和高灵敏度的分析测试技术进行检测。为此，本专利技术采用吹扫捕集技术（P&T）来高效富集生物样本血液中的挥发性苯系物（苯、甲苯、乙苯、间/对二甲苯和邻二甲苯），不仅可降低分析方法的检出限，而且不需有机溶剂和萃取基质，可有效避免有机试剂与血液样本中某些成分的相互作用等产生的二次污染。并且本专利技术针对血液的特性，对吹扫捕集的条件参数等进行了针对性的优化，例如通过分析吹扫温度和吹扫时间、解吸温度和解吸时间对吹扫捕集效率的影响，最终确定适合参数。进一步地，气质联用仪的参数设定：色谱柱为DB-624毛细管色谱柱，色谱柱规格为30m×0.25mm×1.4μm；柱温为起始温度40℃保持3min，以10℃/min升到150℃，保持0.5min，再以15℃/min升到210℃，保持4min；分流进样，分流比为20：1；进样口温度为250℃；载气为99.999%的氦气；恒流模式，载气流量为1.2mL/min；离子源种类为EI，离子源温度为250℃；传输线温度为280℃；电子轰击能量为70eV。气相色谱-质谱法（GC/MS）可对痕量的未知化合物进行定性定量分析，方法灵敏度高、使用范围广，是目前最重要、应用最多的分析测试技术之一，已被广泛应用于分析水、空气中VOCs。同位素内标化合物与目标化合物的化学性质几乎完全一样，所以在测试过程中的富集效率、损失程度和基质影响等完全一致，可用来校正分析方法的测试偏差。进一步地，步骤1），配制各单标浓度为100μg/mL的混标溶液。进一步地，步骤2），配制各单标浓度为200ng/mL的同位素内标溶液。进一步地，血样的准备过程包括通过静脉穿刺收集血液样本于采血管中，采样后将真空采血管中血样倒入样品瓶中，并于4℃冷藏保存。综上所述，本专利技术所提供的一种用吹扫捕集/气相色谱/质谱联用技术同时测定生物样本血液中苯系物含量的方法，对吹扫捕集实验条件进行优化，使生物样本血液中的苯系物富集和解析，然后用气相色谱/质谱联用和以同位素内标法选择特征离子进行定性和定量分析。通过优化吹扫捕集参数，本专利技术方法实现了对生物样本血液中苯、甲苯、乙苯、间/对二甲苯、邻二甲苯6种苯系物的同时富集、解析和准确测定。本专利技术方法检出限为0.002~0.011μg/L，线性范围为0.043~10.99μg/L，低、高浓度的加标回收率范围分别为72.78%~81.03%、82.27%~109.09%。对同一样品重复进行6次分析，RSD范围为3.47%~7.36%。本方法操作简便、分析周期短、分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求，适合用于生物样本血液中6种苯系物的同时检测分析。附图说明图1为不同吹扫流速下各色谱峰面积变化趋势。图2为不同吹扫温度下各色谱峰面积变化趋势。图3为不同解析温度时各色谱峰面积变化趋势。图4为不同解析时间下各色谱峰面积变化趋势。图5为浓度为1.563μg/L的混标溶液的选择离子谱图。具体实施方式本专利技术采用吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱联用法测定血液中苯系物的含量，在一种典型的实施方式中，该测定方法具体包括如下步骤：混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，用甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：采用吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱联用法测定血液中苯系物的含量，该测定方法具体包括如下步骤：混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，用甲醇配制混标溶液；同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。

【技术特征摘要】
1.一种生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：采用吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱联用法测定血液中苯系物的含量，该测定方法具体包括如下步骤：混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，用甲醇配制混标溶液；同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。2.根据权利要求1所述的生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：吹扫捕集仪的参数设定：以99.999%的氦气为吹扫气，吹扫时间为11min，吹...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦小江，侯晓敏，聂继盛，张坤，张红梅，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：山西,14