The invention belongs to the technical field of biological medicine, in particular to an antioxidant drug screening kit and a method of using the same. The antioxidant drug screening kit provided by the invention comprises a Caenorhabditis elegans, a nematode culture medium, Escherichia coli OP50, 2 ', 7', two chloro fluorescein B two, and can be used for high throughput screening of antioxidant drugs. The invention has the advantages of simple operation and rapid detection, and is suitable for large-scale popularization in the field of screening antioxidant drugs.
【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化药物筛选试剂盒
本专利技术属于生物医药
,具体涉及一种抗氧化药物高通量筛选试剂盒及其使用方法。
技术介绍
近年来随着社会的快速发展,快节奏的生活环境使人们极易受到各种压力所致的氧化应激反应损伤,而过度的氧化应激损伤是导致如早衰、糖尿病以及心血管系统疾病等严重病症不可忽视的因素。因此研究毒性低、抗氧化效果显著的药物迫在眉睫。现阶段抗氧化药物筛选所常用体内动物模型主要为细胞、小鼠、大鼠。小鼠和大鼠是抗氧化药物药效检测的理想模型,但其存在试验周期长、成本高、操作繁琐以及不能高通量等问题而大大限制了其在大量抗氧化药物初筛方面的应用。细胞作为体外抗氧化模型,虽然易于在实验室进行大规模测定,节省测定时间和成本,但与体内筛选相比,其所得结果往往相关性较差。秀丽隐杆线虫培养条件简单,可以在琼脂板上或是液体培养基中取食细菌(E.coli);世代周期短,通常为3天左右;寿命短,通常为3周左右;而秀丽隐杆线虫实验群体容易放大,且可以同步化,因此秀丽隐杆线虫因为寿命周期短和容易实现高通量的优势,成为体内抗氧化药物高通量筛选的理想模型。但上述秀丽隐杆线虫体内抗氧化药物高通量筛选模型的建立需要极高的技术和经验,即使在发达国家,线虫高通量药物筛选技术目前仍停留在实验室阶段,还未进入产业化阶段,而且目前很多线虫的筛选模型还没有知识产权保护。对此,本专利技术特提供一种抗氧化药物筛选试剂盒,使用该试剂盒能够高通量筛选抗氧化药物,本专利技术同时提供上述试剂盒的使用方法。供本领域研发人员高通量准确地筛选抗氧化药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗氧化药物筛选试剂盒,使用该 ...
【技术保护点】
一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于所述试剂盒含有以下试剂:①、试剂A:秀丽隐杆线虫悬液;②、试剂B:线虫培养基;③、试剂C:大肠杆菌OP50;④、试剂D:2′,7′二氯氢化荧光素乙二脂。
【技术特征摘要】
1.一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于所述试剂盒含有以下试剂:①、试剂A:秀丽隐杆线虫悬液;②、试剂B:线虫培养基;③、试剂C:大肠杆菌OP50;④、试剂D:2′,7′二氯氢化荧光素乙二脂。2.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还含有多孔板,该多孔板为黑色,带有封口膜。3.根据权利要求2所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于:所述多孔板为384孔微孔板。4.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于,所述试剂A的浓度为50条秀丽隐杆线虫/20μl,试剂C的浓度为10mg大肠杆菌/ml,试剂B的体积为25ml。5.根据权利要求1-4任一项所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于,所述秀丽隐杆线虫的株系为野生型N2。6.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于,所述试剂A中的秀丽隐杆线虫为经同步化后,孵化至L1期的秀丽隐杆线虫,秀丽隐杆线虫同步化的步骤如下:用M9缓冲液将平板上的秀丽隐杆线虫冲下来,将冲洗液吸入离心管;4000rpm离心3min,去除上清;加入裂解液;在涡旋仪上震荡7min,使秀丽隐杆线虫的虫体破裂释放卵;4000rpm/离心3min,去除上清,收集沉淀获得大量的秀丽隐杆线虫卵;M9缓冲液冲洗两次,再加入1mlM9缓冲液,置于20℃培养箱中孵化48小时,获得同步化后孵化至L1期的秀丽隐杆线虫。7.根据权利要求1所述的一种抗氧化药物筛选试剂盒,其特征在于:所述试剂C为含有大肠杆菌OP50活菌的冻干粉或...
【专利技术属性】
技术研发人员:不公告发明人,
申请(专利权)人:兰州红虫生物工程有限责任公司,
类型:发明
国别省市:甘肃,62
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