阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ的变异位点及其检测方法和用途技术

本发明专利技术涉及分子生物学和医学领域，本发明专利技术公开了一个阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ的变异位点及其检测方法和该变异位点在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感性检测方面的用途，此外还公开了一种通过检测该变异位点基因型来预测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患病风险的方法，包括抽提样品的基因组DNA、特异性扩增、检测、变异位点基因型分析等步骤，当所述位点发生基因型变异时阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的患病风险增加。本发明专利技术还公开了一种检测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感性的试剂盒。

Variation site of obstructive sleep apnea hypopnea syndrome susceptibility gene ADIPOQ and detection method and application thereof

The present invention relates to the field of molecular biology and medicine, the invention discloses a mutation of respiratory obstructive sleep apnea hypopnea syndrome susceptibility gene ADIPOQ and its detection method and the variant in obstructive sleep apnea hypopnea syndrome susceptibility testing of the integrated use, also discloses a by detecting the prediction method for obstructive sleep apnea hypopnea syndrome and the risk of ectopic gene variant, DNA, genome specific amplification, mutation detection, genotype analysis includes samples, when the site of occurrence of genotype variation of obstructive sleep apnea hypopnea syndrome increases the risk of illness. The present invention also discloses a kit for detecting the susceptibility of obstructive sleep apnea hypopnea syndrome.

【技术实现步骤摘要】
阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ的变异位点及其检测方法和用途
本专利技术涉及分子生物学和医学领域，尤其涉及一个阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ基因的变异位点，本专利技术还涉及该变异位点的检测方法及检测试剂盒。
技术介绍
阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructivesleepapnea-hypopneasyndrome，OSAHS)是睡眠期间周期性上呼吸道阻塞致呼吸暂停和低通气，引起反复的低氧血症。目前认识到OSAHS是一种全身性疾病。2008年美国心脏协会(AHA)/美国心脏病学学院基金会(ACCF)发表科学声明指出，OSAHS是高血压、冠心病、心力衰竭、心律失常、卒中等心脑血管病新认识到的、可干预的独立危险因素，OSAHS已成为重大公共卫生问题。2015ESC室性心律失常管理和心脏性猝死预防指南指出：睡眠呼吸暂停综合征减少血氧饱和度是心脏病猝死的危险因素。最新的《睡眠白皮书》显示我国20.4％的成人患有OSAHS。在美国未经控制的中-重度OSAHS每年会增加个人健康消费2700-3000美元，同时，美国中-重度OSAHS每年总经济成本达650-1650亿美元以上。虽然目前我国尚缺乏OSAHS对健康消费影响的研究，但2005-2015年心血管疾病、卒中和糖尿病给中国造成约5500亿美元的经济损失，而OSAHS作为心血管疾病的独立危险因素，在健康消费中也应占有重要地位。OSAHS是多病因引起的综合征，其中遗传因素在其发病过程中占有重要地位，睡眠呼吸暂停指数的变化大约40％归因于遗传。由于环境因素是可以人为控制和改变的，而OSAHS遗传学因素却是固定不变的。对可变因素的控制，如对OSAHS危险因素的预防，可以在一定程度上延缓和预防OSAHS的发病，但是对固定不变的遗传因素的认识不足却严重影响着对OSAHS的预测、诊断和治疗。因此，对OSAHS进行充分的遗传学研究显得尤为必要。早在1978年，Rostand等提出OSAHS是常染色体显性遗传病；1993年，Duglas等对20个非肥胖的睡眠呼吸暂停患者的一级亲属做了前瞻性研究，研究发现，其亲属在睡眠中呼吸紊乱的频率增加；2003年，Palmer等对66个确诊OSAHS的白种人进行全基因扫描，发现与AHI相关的基因位于染色体1q、2q、12q、19q，而与BMI相关的基因位于染色体2q、7q、19q；随着二代测序的发展，越来越多的易感基因被发现。最新的一项包括12558名参与者的GWAS研究发现：5个基因(GPR83、ATP2B4、ARRB1、INSIG2和PLCB1)与OSAHS的发生相关，其中两个新的位点rs11691765、rs35424364与OSAHS显著相关。但该研究是针对拉丁美洲国家开展的，鉴于OSAHS相关基因分布有明显的种族差异，对亚洲人群而言借鉴意义不大。脂联素(ADIPOQ)基因已被证实为一种OSAHS的易感基因。人类ADIPOQ基因全长17kb，位于染色体3q27，包括分子量从18-4277bp的3个外显子和大小为0.8bp和12bp的2个内含子。该基因包含公认的启动子元件，但没有典型的TATA(胸腺嘧啶核苷-腺嘌呤核苷-胸腺嘧啶核苷-腺嘌呤核苷)盒，第3个外显子含有一段长的包括3个Alu的重复序列，这种外显子-内含子的结构与编码瘦素(leptin)的肥胖基因非常相似，并且该基因仅在白色脂肪组中表达，其转录产物脂联素是脂肪组织基因表达最丰富的蛋白质产物之一，其血浆浓度为5-30μg/ml，约占总血浆蛋白的0.01％。ADIPOQ基因编码脂联蛋白的C1Q和胶原结构域(adiponectin，C1Qandcollagendomaincontaining)——一种在结构上与胶原X和VIII以及补体C1q类似的蛋白质。脂联素作为特异的脂肪细胞因子，也与肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病和心血管疾病密切相关。这些疾病患者很多脂肪细胞因子的血浆浓度明显上升，但血浆脂联素水平却显著下降。此外，脂联素与体重、脂肪分布、空腹胰岛素浓度、葡萄糖耐量试验呈负相关，与胰岛素敏感性呈正相关，因此脂联素可以作为这些疾病的诊断指标。脂联素可能通过其受体结合激活p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，MAPK)，活化过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)后发挥改善胰岛素抵抗、降血糖、抗炎等生物学作用；还可通过与脂联蛋白受体1(AdipoR1)结合，活化AMP激活的蛋白激酶(AMP-activatedproteinkinase，AMPK)进而发挥生物学作用。研究证实：ADIPOQ基因的突变或异常表达等都会引起胰岛素抵抗相关的代谢综合征。其在OSAHS患者中主要表现为表达水平下降，可能的原因是其表达调控出现了异常，但是目前对OSAHS患者ADIPOQ基因变异及转录调控方面的研究仍较少。尤其是针对中国人群的ADIPOQ基因变异位点相关研究非常缺乏，鉴于不同人种间相同基因中发生单一核苷酸变异的位点往往具有一定差异，因此，很有必要对中国人群的ADIPOQ基因变异位点进行深入研究，力争寻找到相关位点并建立相应的检测方法，并推广应用于国人阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感人群的筛查、预防和早期诊断和治疗。
技术实现思路
本专利技术公开了一个针对中国人群的阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ的变异位点，所述位点位于ADIPOQ基因3’端非编码区中Chromosome3-NC_000003.11区域186575720-186575721位点处，所述位点的位置在SEQIDNO:1所示的序列中。ADIPOQ基因详细序列可参见登录号：NG_021140.1。ADIPOQ基因3’端非编码区186575720-186575721位点的核苷酸序列可参见网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/。本专利技术人对ADIPOQ基因的3’端非编码区域进行了测序。本专利技术旨在提供一种检测上述阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ变异位点的方法。本专利技术还提供了一种通过对OSAHS易感基因的检测来预测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征发病风险的方法，即检测ADIPOQ基因3’端非编码区186575720-186575721位点处的基因型是否发生变异。该基因3’端非编码区186575720-186575721位点处发生CT缺失变异的基因型个体其阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的发病风险远高于普通人群。上述方法的具体步骤包括：(a)利用DNA纯化试剂盒抽提样品的基因组DNA，扩增获得ADIPOQ基因3’端非编码区；(b)通过特异性引物扩增获得该基因包含3’端非编码区186575720-186575721位点的区域，所述特异性引物序列如SEQIDNO:2-3所示，扩增产物序列如SEQIDNO:4所示；(c)检测步骤；(d)产物中基因变异位点3’端非编码区186575720-186575721位点的基因型分析。上述方法中涉及的抽提基因组DNA、测序、扩增等技术均可采用本领域的常规操作方法。本专利技术还涉及了ADIPOQ基因3’端非编码区186575720-186575721位点基因变异检测在预测阻塞性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ的变异位点，其特征在于：所述变异位点位于ADIPOQ基因3’端非编码区中Chromosome 3‑NC_000003.11区域的186575720‑186575721位点处，所述186575720‑186575721位点的位置在SEQ ID NO:1所示的序列中。

【技术特征摘要】
1.一个阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感基因ADIPOQ的变异位点，其特征在于：所述变异位点位于ADIPOQ基因3’端非编码区中Chromosome3-NC_000003.11区域的186575720-186575721位点处，所述186575720-186575721位点的位置在SEQIDNO:1所示的序列中。2.如权利要求1所述的ADIPOQ的变异位点在制备阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征易感性检测试剂中的用途。3.如权利要求1所述的ADIPOQ的变异位点在制备阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征诊断或治疗药物中的用途。4.一种通过检测权利要求1所述的ADIPOQ的变异位点来预测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患病风险的方法，包括以下步骤：(a)利用DNA纯化试剂盒抽提样品的基因组DNA，扩增获得ADIPOQ基因3’端非编码区；(b)通过特异性引物扩增获得该基因包含3’端非编码区186575720-186575721位点的区域，扩增产物序列如SEQIDNO:4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏永祥，秦彦文，杨颂，李坤，郭俊，杨云云，袁先道，焦晓璐，朱苗苗，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京安贞医院，北京市心肺血管疾病研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11