结肠腺癌诊治标志物制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，公开了PROCR基因作为结肠腺癌的诊治标志物的用途。本发明专利技术的实验证明PROCR基因在正常组织和结肠腺癌组织中的表达存在显著差异。根据PROCR基因与结肠腺癌的相关性，可以将PROCR基因作为临床上诊断结肠腺癌的新的分子标志物，同时还可以将其作为结肠腺癌治疗药物的新靶标。

Markers for diagnosis and treatment of colon adenocarcinoma

The invention belongs to the field of biological medicine and discloses the use of PROCR gene as a marker for the diagnosis and treatment of colon adenocarcinoma. The present study demonstrated that the expression of PROCR gene in normal tissues and colon adenocarcinoma tissues was significantly different. According to the correlation between PROCR gene and colon adenocarcinoma, PROCR gene can be used as a new molecular marker for clinical diagnosis of colonic adenocarcinoma, and can be used as a new target for the treatment of colon adenocarcinoma.

【技术实现步骤摘要】
结肠腺癌诊治标志物
本专利技术涉及肿瘤诊断、治疗、预测预后领域，更具体地，本专利技术涉及以检测PROCR异常为手段的肿瘤诊断、预测预后方法；及激活PROCR基因或蛋白质的肿瘤治疗剂。
技术介绍
结肠腺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，近年来，其发病率逐渐升高，占所有恶性肿瘤的第二位。结肠腺癌的发生，发展是一个涉及多基因改变的复杂过程。其发病过程与细胞分裂、分化、基因群的时空表达异常及其蛋白质的相互作用有关。鉴定与结肠腺癌发病相关的癌基因或抑癌基因，对研究结肠腺癌癌变机理及其诊断、治疗和预防具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测PROCR基因或蛋白表达差异来诊断结肠腺癌的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过检测PROCR基因或蛋白表达差异来预测结肠腺癌预后的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种通过激活PROCR基因或PROCR蛋白来治疗结肠腺癌的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于筛选治疗结肠腺癌的药物的方法。本专利技术的目的之五在于提供一种用于治疗结肠腺癌的药物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测PROCR的产品在制备结肠腺癌诊断工具中的应用。进一步，所述检测PROCR的产品包括检测PROCR基因表达量的产品。更进一步，所述检测PROCR的产品包括能够定量PROCR基因mRNA的产品，和/或能够定量PROCR蛋白的产品。本专利技术的定量PROCR基因mRNA的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。所述能够定量PROCR基因mRNA的产品包括实时定量PCR中使用的特异扩增PROCR基因的引物，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的定量PROCR蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的定量PROCR蛋白的产品包括特异性结合PROCR蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的定量PROCR蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的PROCR蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对PROCR蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyteFluor(TM)647标记试剂盒-NH2(DojindoLaboratories)；及DyLight547和DyLight647(TechnoChemicalCorp.)、Zenon(TM)、AlexaFluor(TM)抗体标记试剂盒、Qdot(TM)抗体标记试剂盒(InvitrogenCorporation)和EZ-标记物蛋白质标记试剂盒(FunakoshiCorporation)。为了正确标记，可以使用适宜的仪器来检测经过标记的抗体或其片段。作为依照本专利技术的检测产品的样品，可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样品不受特别限制，只要它适于本专利技术的测定；例如，它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。在本专利技术的具体实施方案中，所述样品来自受试者的组织。进一步，所述定量PROCR基因或PROCR蛋白的产品可以是检测PROCR基因或PROCR蛋白的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。本专利技术还提供了一种诊断结肠腺癌的工具，所述工具能够检测PROCR基因表达量。进一步，所述工具包括包括能够定量PROCR基因mRNA的试剂，和/或能够定量PROCR蛋白的试剂。更进一步，所述能够定量PROCR基因mRNA的试剂是实时定量PCR中使用的本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测PROCR的产品在制备诊断结肠腺癌工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测PROCR的产品在制备诊断结肠腺癌工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测PROCR的产品包括检测PROCR基因表达量的产品。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述检测PROCR的产品包括能够定量PROCR基因mRNA的产品，和/或能够定量PROCR蛋白的产品。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述能够定量PROCR基因mRNA的试剂包括实时定量PCR中使用的特异扩增PROCR基因的引物，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；所述能够定量PROCR蛋白的试剂包括特异性结合PROCR蛋白的抗体。5.一种诊断结肠腺癌的工具，其特征在于，所述工具包括能...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，董东，杜海威，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11