The invention belongs to the field of plant molecular biology and provides a method for producing high expression of seed specific and / or seed preferred promoter and produce a nucleic acid and / or seed specific expression of plant seeds preferentially enhanced, which will enhance the expression of nucleic acid (NEENAs) promoter functional connectivity and / or into plants and the.
【技术实现步骤摘要】
用于增强植物中种子特异的和/或种子优先的基因表达的调节性核酸分子本申请是中国专利申请201080038714.1的分案申请,原申请的申请日是2010年8月11日,专利技术名称是“用于增强植物中种子特异的和/或种子优先的基因表达的调节性核酸分子”。专利技术描述本专利技术属于植物分子生物学领域并且提供了用于产生高表达的种子特异的和/或种子优先的启动子和产生具有增强的核酸种子特异的和/或种子优先的表达的植物的方法,其中将增强核酸表达的核酸(NEENAs)与所述启动子功能性连接和/或导入植物中。转基因在植物中的表达强烈地受多种外部和内部因素影响,从而导致变动和不可预测水平的转基因表达。经常不得不产生大量的转化体并进行分析,以鉴定具有合乎需要的表达强度的株系。由于转化并筛选表达强度合乎需要的株系是昂贵和耗费人力的,故需要一个或多个转基因在植物中高表达。当不得不在转基因植物中协调表达几个基因以实现特定效应时,鉴于必须鉴定其中每个基因均强烈表达的植物,这个问题尤其严重。例如,取决于构建体设计和各个转化事件中T-DNA插入基因座的位置效应,转基因的表达可以显著地变动。强启动子可以部分地克服这些难题。然而,显示强烈表达同时特异性合乎需要的合适启动子的可获得性经常是有限的。为了确保可获得具有合乎需要的表达特异性的充足启动子,额外启动子的鉴定和表征可能有助于弥合这种缺口。然而,具有相应特异性和强度的启动子的天然可获得性和费时的候选启动子表征阻碍了合适的新启动子的鉴定。为了克服这些难题,已经显示多样的遗传元件和/或基序积极地影响基因表达。在它们当中,已经认可一些内含子作为具有改善基 ...
【技术保护点】
用于产生高表达种子特异的和/或种子优先的植物启动子的方法,包括将一个或多个增强核酸表达的核酸(NEENA)分子与启动子功能性连接,其中所述增强核酸表达的核酸(NEENA)分子相对于所述启动子是异源的,其包含i)具有如SEQ ID NO:2至15中所定义序列的核酸分子,或ii)具有与SEQ ID NO:2至15具备至少80%同一性的序列的核酸分子,或iii)i)或ii)的核酸分子的至少100个连续碱基的片段,所述片段具有如具有SEQ ID NO:2至15的序列的相应核酸分子那样的增强表达活性,或iv)作为前述在i)或ii)下提及的任一核酸分子的互补物或反向互补物的核酸分子,或v)使用表2中所示的SEQ ID NO:22至29、34至41、44至51和54至57描述的寡核苷酸引物,通过PCR可获得的核酸分子,或vi)核酸分子,其在等同于50℃于7%十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5MNaPO
【技术特征摘要】
2009.08.31 EP 09169017.2;2009.08.31 US 61/2382331.用于产生高表达种子特异的和/或种子优先的植物启动子的方法,包括将一个或多个增强核酸表达的核酸(NEENA)分子与启动子功能性连接,其中所述增强核酸表达的核酸(NEENA)分子相对于所述启动子是异源的,其包含i)具有如SEQIDNO:2至15中所定义序列的核酸分子,或ii)具有与SEQIDNO:2至15具备至少80%同一性的序列的核酸分子,或iii)i)或ii)的核酸分子的至少100个连续碱基的片段,所述片段具有如具有SEQIDNO:2至15的序列的相应核酸分子那样的增强表达活性,或iv)作为前述在i)或ii)下提及的任一核酸分子的互补物或反向互补物的核酸分子,或v)使用表2中所示的SEQIDNO:22至29、34至41、44至51和54至57描述的寡核苷酸引物,通过PCR可获得的核酸分子,或vi)核酸分子,其在等同于50℃于7%十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5MNaPO4、1mMEDTA杂交,以及50℃于2×SSC、0.1%SDS中洗涤的条件下与包含由SEQIDNO:2至15或其互补物描述的增强转录的核苷酸序列的至少50个连续核苷酸的核酸分子杂交。2.用于产生植物或其部分的方法,所述植物或其部分与相应的对照植物或其部分相比具有一种或多种核酸分子的增强的种子特异的和/或种子优先的表达,所述方法包括步骤a)将包含权利要求1的i)至vi)中所定义核酸分子的一个或多个NEENA导入所述植物或其部分;和b)将所述一个或多个NEENA与种子特异的和/或种子优先的启动子以及与处在所述种子特异的和/或种子优先的启动子控制下的核酸分子功能性连接,其中NEENA对所述核酸分子为异源。3.根据权利要求1和2所述的方法,包括步骤a)将包含权利要求1的i)至vi)中所定义核酸分子的一个或多个NEENA导入植物或其部分,和b)将所述一个或多个NEENA整合至所述植物或其部分的基因组中,从而所述一个或多个NEENA与相对所述一个或多个NEENA为异源的种子特异的和/或种子优先的表达的内源核酸功能性连接,和任选地c)从所述转化的细胞再生出包含所述一个或多个NEENA的植物或其部分。4.根据权利要求1至3所述的方法,包括步骤a)提供包含一个或多个NEENA的表达构建体,所述NEENA包含权利要求1的i)至vi)中所定义的、与种子特异的和/或种子优先的启动子以及与相对于所述一个或多个NEENA为异源并处在所述种子特异的和/或种子优先的启动子控制下的一种或多种核酸分子功能性连接的核酸分子,和b)将包含所述一个或多个NEENA的所述表达构建体整合至所述植物或其部分的基因组中,和任选地c)从所述转化的植物或其部分再生出包含所述一个或多个表达构建体的植物或其部分...
【专利技术属性】
技术研发人员:J·M·库恩,L·P·洛亚尔,M·西伯特,E·杜维尼哥,
申请(专利权)人:巴斯夫植物科学有限公司,
类型:发明
国别省市:德国,DE
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