一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液，100ml培养液中含有：0.1～3g胰蛋白胨；1～5g葡萄糖；0.1～3g酵母提取物；0.01～1g溴百里酚蓝；0.00001～0.0001g头孢曲松钠；0.00001～0.0001g硫酸链霉素。本发明专利技术还公开了检测霉菌性阴道炎的试剂盒及检测方法。本发明专利技术的检测试剂盒质量稳定，检测方法操作简单、结果精准。本发明专利技术试剂盒具备靶向培养和同时同步检测药物的敏感性，6‑24小时内一步完成，检出率高能够满足临床精准诊断霉菌性阴道炎及药物敏感性试验，为临床医生及时精确诊断和合理使用药物提供参考依据，避免临床滥用抗生素。

Culture solution, reagent kit and detection method for detecting mycotic vaginitis

The invention discloses a culture medium for detection of fungal vaginitis, 100ml culture medium containing 0.1 ~ 3G tryptone glucose; 1 ~ 5g 0.1 ~ 3G; yeast extract; 0.01 ~ 1g bromothymol blue 0.00001 ~ 0.0001g; ceftriaxone sodium; 0.00001 ~ 0.0001g streptomycin sulfate. The invention also discloses a reagent box for detecting mycotic vaginitis and a detection method thereof. The detection kit of the invention has the advantages of stable quality, simple detection method and accurate result. The kit of the invention has targeted training and simultaneous detection of drug sensitivity, 6 within 24 hours in one step, the detection rate of high precision can meet the clinical diagnosis and drug sensitivity test of fungal vaginitis, for clinicians to accurate diagnosis and rational use of drugs to provide reference for the clinical, to avoid the abuse of antibiotics.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液、试剂盒及检测方法
本专利技术属于微生物诊断
，具体涉及一种检测霉菌性阴道炎的培养基、检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
目前对霉菌性阴道炎的检测以传统方法为主，常用镜检观察，金标准方法是培养、分离鉴定，但步骤复杂、检测周期长，分离率不高，整个过程大约4-7天，操作繁琐，已不能满足对快速、便利检测的需要，而且当样本中杂菌较多时会影响真正目标菌的识别。霉菌性阴道炎的临床检测方法如培养检测法，其检出率低且时间长、操作复杂，因为传统培养基基本上都是使用沙保弱琼脂培养基，其采用琼脂作为凝固剂适合固体平板培养，但其营养成分低，培养时间24～48小时，临床使用不便；临床培养时，培养基不具有靶向功能，常有较多杂菌生长，对下一步菌落筛选操作造成较大障碍；菌落需人工挑选再纯化鉴定，对人员要求较高，步骤较繁琐；使用前需要灭菌消毒再倒成平皿板，步骤复杂，成品平皿保存温度在2-8℃，有效期只有7天。同时在进行药物敏感性试验时，传统药敏检测方法必须在病原体分离鉴定后才能分别做每种药物敏感性试验，整个实验过程复杂时间长，需要72小时，且鉴定过程要求人员素质高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种营养成分高，培养时间短，具有靶向培养功能，且不需将病原体分离鉴定即可同时用于霉菌性阴道炎检测及药敏检测的培养液、试剂盒及检测方法。本专利技术的一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液，其中每100ml培养液中，含有如下重量配比的组份：0.1～3g胰蛋白胨；1～5g葡萄糖；0.1～3g酵母提取物；0.01～1g溴百里酚蓝；0.00001～0.0001g头孢曲松钠；0.00001～0.0001g硫酸链霉素。上述所述培养液的制备方法，其是向含有胰蛋白胨、葡萄糖、酵母提取物和溴百里酚蓝的混合物中加入灭菌纯化水混溶，高压灭菌，然后加入头孢曲松钠和硫酸链霉素，即得培养液。本专利技术的一种用于检测霉菌性阴道炎的的试剂盒，包括干粉培养基、培养基稀释液和药敏板，所述干粉培养基为上述所述培养液的冻干粉，所述药敏板上设有培养置物台、阴性对照孔C-、阳性对照孔C+、若干组药物试验孔，每组所述药物试验孔分为高浓度药物孔和低浓度药物孔。所述培养基稀释液为灭菌纯化水。本专利技术还提供了一种检测霉菌性阴道炎的检测方法，其是采用本专利技术上述所述的试剂盒。本专利技术的一种检测霉菌性阴道炎的检测方法，具体包括下述步骤：(1)药敏板的药物试验孔预先包被各种高低浓度的药物溶液；(2)用培养基稀释液将干粉培养基稀释成液体培养基，汲取少量液体培养基到药敏板的阴性对照孔C-；(3)用无菌棉拭子取疑似霉菌性阴道炎病人生殖道分泌物，生理盐水稀释后，汲取少量到剩余液体培养基中混匀成菌液；(4)分别汲取少量菌液到药敏板的阳性对照孔C+、各药物试验孔中，将药敏板盖上盖子恒温培养，6-24h观察结果；(5)检测结果判读：孔C+培养基与孔C-相比变黄色，为阳性(+)；孔C+培养基与孔C-相比不变色，为阴性(—)；孔C-阴性(—)，孔C+阳性(+)试验有效，判断余下各孔结果；孔C-阳性(+)，表示污染，试验无效；孔C-阴性(—)，孔C+阴性(—)表明阴性结果，余下孔不判断结果；(6)药敏结果判定：孔A(—)孔B(—)敏感，孔A(—)孔B(+)中敏，孔A(+)孔B(+)耐药。作为优选，本专利技术的一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液，其中每100ml培养液中，含有如下重量配比的组份：1～2g胰蛋白胨；1～5g葡萄糖；1～2g酵母提取物；0.1～0.5g溴百里酚蓝；0.00003～0.00006g头孢曲松钠；0.00003～0.00006g硫酸链霉素。本专利技术的检测霉菌性阴道炎的检测试剂盒具有质量稳定、操作简单等优势。本专利技术的用于检测霉菌性阴道炎的培养液，其为液体培养基，而非固体平板培养基，且培养基经过冷冻干燥加工成干粉培养基，干粉培养基使用前用灭菌纯化水溶解成液体培养基，液体培养基培养增菌速度更快，且干粉培养基质量稳定，可常温保存和运输，有效期长达2年。一般的，液体培养基中均会加入无机盐如磷酸盐、硫酸盐等，其一方面主要是通过调节培养基渗透压为微生物生长所需如使微生物的细胞转运功能正常运作，将培养基中的蛋白胨或其他营养成分转运进入微生物细胞内，同时无机盐离子还会参与微生物细胞内其他功能的正常运作，另一方面其可作为pH缓冲成分，调整液体培养基的pH值以给予菌群适应的生存环境，但是此类无机盐如果添加过量，容易导致渗透压过大，对霉菌的培养极为不利，同时此类无机盐的过多添加还会影响培养基的颜色变化，影响对最终结果的判断，不便于阴道霉菌的鉴定培养。本专利技术的培养基中的组分胰蛋白胨是一种优质蛋白胨，其是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，比普通蛋白胨含有更丰富的氮源、氨基酸，更适合微生物的生长；酵母提取物是酵母的营养物质得到过分解，在对本专利技术所述霉菌如念珠菌的培养时比普通的没有经过分解的酵母粉吸收利用的速度和效率更高；由于临床耐药细菌不断产生，单一抗生素可能对有些革兰氏阳性菌或阴性菌无效，而本专利技术培养基中采用头孢曲松钠和硫酸链霉素的双抗，可有效作用于其他革兰氏阳性和阴性菌，抑制了其他杂菌的生长；本专利技术培养基中胰蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖的合理营养配比有利于本专利技术所述霉菌的生长，而由头孢曲松钠和硫酸链霉素组成的双抗的添加使本专利技术的培养基更具靶向培养功能，从而使在对本专利技术所述霉菌性阴道炎的检测时无需进一步纯化鉴定。同时，本专利技术培养液中的溴百里酚蓝作为指示剂的pH指示范围正好落在霉菌培养后的产品变色范围之内，颜色变化相比其他指示剂变色更明显，更易于肉眼观察鉴定。本专利技术中的药敏检测根据《临床检验操作规程》和《临床抗菌药物使用指南》精选临床正在使用的药物，参考国际MIC标准只需选择2种浓度通过颜色变化即可测出药物敏感性。本试剂盒具备靶向培养和同时同步检测药物的敏感性，6～24小时内一步完成，检出率高，能够满足临床精准诊断霉菌性阴道炎及药物敏感性试验，为临床医生及时精确诊断和合理使用药物提供参考依据，避免临床滥用抗生素。附图说明图1为药敏板结构示意图。具体实施方式下述实施例是对于本
技术实现思路
的进一步说明以作为对本专利技术
技术实现思路
的阐释，但本专利技术的实质内容并不仅限于下述实施例所述，本领域的普通技术人员可以且应当知晓任何基于本专利技术实质精神的简单变化或替换均应属于本专利技术所要求的保护范围。实施例1一.干粉培养基制备：本专利技术的一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液，其中每100ml培养液中，含有如下重量配比的组份：1.5g胰蛋白胨；4g葡萄糖；1.5g酵母提取物；0.15g溴百里酚蓝；0.00005g头孢曲松钠；0.00005g硫酸链霉素。向含有上述所述的胰蛋白胨、葡萄糖、酵母提取物和溴百里酚蓝的混合物中加入灭菌纯化水混溶，121℃高压灭菌，然后加入头孢曲松钠和硫酸链霉素，配制完成分装成3ml/瓶，冷冻干燥后成为干粉培养基。二.稀释液制备：每瓶分装3mL灭菌纯化水。三.药敏板制作：药敏板可采用市售产品，其共20孔，如图1所示，药敏板上设有培养置物台、阴性对照孔C-、阳性对照孔C+、若干组药物试验孔，每组所述药物试验孔分为高浓度药物孔A和低浓度药物孔B。其中：A1为C-孔(阴性对照孔)，B1为C+孔(阳性对照孔)，A2～A10、B2～B10分别包被9种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液，其特征在于，其中每100ml培养液中，含有如下重量配比的组份：0.1～3g 胰蛋白胨；1～5g 葡萄糖；0.1～3g 酵母提取物；0.01～1g 溴百里酚蓝；0.00001～0.0001g 头孢曲松钠；0.00001～0.0001g 硫酸链霉素。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测霉菌性阴道炎的培养液，其特征在于，其中每100ml培养液中，含有如下重量配比的组份：0.1～3g胰蛋白胨；1～5g葡萄糖；0.1～3g酵母提取物；0.01～1g溴百里酚蓝；0.00001～0.0001g头孢曲松钠；0.00001～0.0001g硫酸链霉素。2.权利要求1所述培养液的制备方法，其特征在于，向含有胰蛋白胨、葡萄糖、酵母提取物和溴百里酚蓝的混合物中加入灭菌纯化水混溶，高压灭菌，然后加入头孢曲松钠和硫酸链霉素，即得培养液。3.一种用于检测霉菌性阴道炎的的试剂盒，包括干粉培养基、培养基稀释液和药敏板，所述干粉培养基是权利要求1所述的或者由权利要求2制备方法得到的培养液的冻干粉，所述药敏板上设有培养置物台、阴性对照孔C-、阳性对照孔C+、若干组药物试验孔，每组所述药物试验孔分为高浓度药物孔和低浓度药物孔。4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述培养基稀释液为灭菌纯化水。5.一种检测霉菌性阴道炎的检测方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱叶林，王敏，
申请(专利权)人：合肥百盛园生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34