分析氟甲基酮及其有关物质的液相色谱法、流动相和套装制造技术

本发明专利技术属于分析化学领域，提供一种分析氟甲基酮(Z-VAD-FMK)及其有关物质的液相色谱法、流动相和套装，其中使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；使用的流动相由以下流动相A和流动相B组成：流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。本发明专利技术方法具体可为高效液相色谱法，可对Z-VAD-FMK及其有关物质进行分离及含量分析，为Z-VAD-FMK作为药物研究和使用提供了质量可控性，并且操作简单环保。

【技术实现步骤摘要】
分析氟甲基酮及其有关物质的液相色谱法、流动相和套装
本专利技术属于分析化学领域，特别涉及一种分析氟甲基酮及其有关物质的液相色谱法，适合分析氟甲基酮及其有关物质的流动相，以及分析氟甲基酮及其有关物质的套装。
技术介绍
氟甲基酮(Z-VAD-FMK)，CAS号：187389-52-2，化学名称：N-[苄氧羰基]-L-缬氨酰基-N-[(1S)-3-氟-1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-2-氧代丙基]-L-丙氨酰胺，分子式：C22H30FN3O7，分子量，467.5，为白色粉未。结构式为：Z-VAD-FMK是一种半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂，能够抑制caspase家族蛋白酶活性和阻断凋亡发生，可能具有预防老年性耳聋、保护人体器官和癌症治疗等作用。目前，已有很多文献报告了Z-VAD-FMK的药效试验和作用机制，例如在以下文献中的报告：李胜利、王玉虎、张敏燕等，小鼠耳蜗毛细胞凋亡方式及Z-VAD-FMK对毛细胞的保护作用，听力学及言语疾病杂志，2015年第23卷第1期：50-56；朱宝昌、盛小辉、刘群、李红卫，广谱caspase抑制剂对大鼠烫伤后肾脏的保护作用，中国现代医药杂志，2014年l1月第16卷第11期：17-20；李红卫、刘群、朱宝昌、盛小辉，Z-VAD-FMK对烫伤大鼠肾脏细胞凋亡的影响，山东医药，2014年第54卷第46期：14-16；夏璐、鲍英、袁耀宗、张学军，全反式维甲酸和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK对胰腺癌细胞凋亡的作用，胰腺医学，2003年12月第3卷第4期：198-202；等等。但是，没有文献公开检测Z-VAD-FMK及其有关物质的方法，因此难以在药物研究和使用中提供可控的质量。
技术实现思路
本专利技术首先提供一种分析氟甲基酮(Z-VAD-FMK)及其有关物质的液相色谱法，其中使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶(ostade-cylsilane，ODS或C18)；使用的流动相由以下流动相A和流动相B组成：流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。本专利技术还提供一种用于液相色谱法分析氟甲基酮及其有关物质的流动相，所述流动相由以下流动相A和流动相B组成：流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。本专利技术还提供一种用于分析氟甲基酮及其有关物质的液相色谱法套装，包括：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；由以下流动相A和流动相B组成的流动相：流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。本方法的重点在于流动相A中两种盐的浓度和比例，以及调节的pH值范围。将该流动相用于液相色谱法，更具体地用于高效液相色谱法，可对Z-VAD-FMK及其有关物质进行分离及含量分析，为Z-VAD-FMK作为药物研究和使用提供质量可控性，并且操作简单环保。附图说明图1为系统适用性试验中的灵敏度溶液的测试图谱(图中横坐标为分钟，最小分度为0.5；纵坐标为AU，最小分度为0.002)；图2为线性实验中绘制的标准曲线；图3为实施例1样品溶液的测试图谱(图中横坐标为分钟，最小分度为0.5；纵坐标为AU，最小分度为0.002)；图4为实施例2样品溶液的测试图谱(图中横坐标为分钟，最小分度为0.2；纵坐标为AU，最小分度为0.005)；图5为实施例3样品溶液的测试图谱(图中横坐标为分钟，最小分度为0.1；纵坐标为AU，最小分度为0.002)。具体实施方式本专利技术分析Z-VAD-FMK及其有关物质的液相色谱法，其中使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；使用的流动相由以下流动相A和流动相B组成：流动相A：100～300mM(优选200mM)的铵盐和80～250mM(优选150mM)的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。所述分析包括定性或定量分析，或涉及Z-VAD-FMK与其相关物质分离的分析。在具体的实施方案中，流动相A中所述铵盐、钠盐、钾盐可为有机酸或无机酸的盐，所述有机酸优选醋酸，所述无机酸优选磷酸、硫酸、高氯酸。在一个优选的实施方案中，所述铵盐选自硫酸铵、磷酸铵和醋酸铵中的一种或多种，且更优选硫酸铵和/或醋酸铵；所述钠盐或钾盐选自高氯酸钠、磷酸钠、醋酸钠、高氯酸钾、磷酸钾和醋酸钾中的一种或多种，且更优选高氯酸钠。在一个优选的实施方案中，所述流动相B中，体积比乙腈:水＝1:1。在一个优选的实施方案中，所述流动相A的pH为3。在一个优选的实施方案中，所述流动相B的pH为3。在更优选的实施方案中，用无机酸调节所述流动相的pH，并更优选用磷酸调节。液相色谱法是用液体作流动相的色谱法。本专利技术的测试体系适应于柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法等液相色谱法。在优选的实施方案中，所述液相色谱法为柱色谱法；进一步，所述柱色谱法优选高效液相色谱法(HPLC)或液质联用(HPLC-MS)。液质联用(HPLC-MS)又叫液相色谱-质谱联用技术，是以液相色谱作为分离系统、质谱为检测系统的一种分析方法。本专利技术通过测试体系特别地选择和组合，提供了一种有效的分离和分析Z-VAD-FMK及其有关物质的方法。所述高效液相色谱法在具体的实施方案中，采用十八烷基硅胶键合色谱柱，并使用上述任意技术方案及其任意组合定义的液相色谱法中的流动相。所述色谱柱可市售获得。在一个具体的实施方案中，所述高效液相色谱法所述的流动相A和流动相B在体积比45～15:55～85内进行梯度洗脱。在一个具体的实施方案中，所述高效液相色谱法采用WatersSunFireC18色谱柱(3.5μm4.6*150mm)或其他等效柱作为分析色谱柱。在一个具体的实施方案中，所述高效液相色谱法采用的柱温为30～40℃，优选35℃。在一个具体的实施方案中，所述高效液相色谱法采用的流速为0.6～1.0ml/min，优选0.8ml/min。在一个具体的实施方案中，所述高效液相色谱法采用的检测波长为200nm～220nm，优选210nm。在一个具体的实施方案中，所述高效液相色谱法按如下梯度进行洗脱：在一个具体的实施方案中，所述高效液相色谱法中氟甲基酮的供试品溶液的浓度为0.10mg/ml～0.40mg/ml。本专利技术特别的优点在于，通过建立、优化的高效液相色谱法，为测定Z-VAD-FMK的含量和有关物质，提供了一种稳定性好、重复性好的测定方法，为Z-VAD-FMK的质量控制提供可靠依据，便于该新药质控，从而使Z-VAD-FMK的药理药效等试验的可信度更高，使Z-VAD-FMK走向可靠的临床应用。鉴于上述液相色谱法中所述流动相在分离和分析Z-VAD-FMK及其有关物质的实用价值，本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分析氟甲基酮(Z‑VAD‑FMK)及其有关物质的液相色谱法，其特征在于，其中使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；使用的流动相由以下流动相A和流动相B组成：流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。

【技术特征摘要】
1.一种分析氟甲基酮(Z-VAD-FMK)及其有关物质的液相色谱法，其特征在于，其中使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；使用的流动相由以下流动相A和流动相B组成：流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。2.根据权利要求1所述的液相色谱法，其特征在于，所述铵盐选自硫酸铵、磷酸铵和醋酸铵中的一种或多种，优选硫酸铵和/或醋酸铵；和/或，所述钠盐或钾盐选自高氯酸钠、磷酸钠、醋酸钠、高氯酸钾、磷酸钾和醋酸钾中的一种或多种，优选高氯酸钠。3.根据权利要求1或2所述的液相色谱法，其特征在于，所述流动相A的pH为3；和/或，所述流动相B的pH为3。4.根据权利要求1至3任一项所述的液相色谱法，其特征在于，所述液相色谱法为柱色谱法、纸色谱法或薄层色谱法；所述柱色谱法优选高效液相色谱法(HPLC)或液质联用(HPLC-MS)。5.根据权利要求4所述的液相色谱法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，所述流动相A和流动相B在体积比45～15:55～85内进行梯度洗脱。6.根据权利要求4或5所述的液相色谱法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，采用WatersSunFireC18色谱柱，3.5μm4.6*150mm；柱温：30～40℃，优选35℃；流速：0.6～1.0ml/min，优选0.8ml/min；检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇，陈学明，唐洋明，陶安进，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44