一种珠蛋白肽的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种珠蛋白肽的制备方法。本发明专利技术方法包括：(a)提供一血红蛋白液I；(b)对所述血红蛋白液I进行预处理；(c)用碱性蛋白酶进行第一酶解反应；(d)pH调节至pH5.5-8.5；(e)用中性蛋白酶进行第二酶解反应；(f)分离获得珠蛋白肽液VI；和(g)任选地进行干燥，得到所述珠蛋白肽。本发明专利技术方法适合大规模生产，有利于血资源的回收利用，避免了资源浪费，有效减少了环境污染。本发明专利技术的珠蛋白肽具有安全性高、寡肽含量高、灰分低等优点，并且可以更有效地提高家畜等动物的免疫力。

Preparation method of globin peptide

The present invention provides a preparation method of globin peptide. The method of the invention includes: (a) providing a hemoglobin solution I; (b) of the hemoglobin solution pretreatment of I; (c) the first reaction of enzymatic hydrolysis with alkaline protease; (d) pH adjusted to pH5.5-8.5; (E) second enzymatic reaction with neutral protease; (f) from get globin peptide liquid VI; and (g) optionally drying the globin peptides. The method of the invention is suitable for large-scale production, is favorable for the recycling of blood resources, avoids waste of resources, and effectively reduces environmental pollution. The globin peptide of the invention has the advantages of high safety, high oligopeptide content and low ash content, and can effectively improve the immunity of livestock and other animals.

【技术实现步骤摘要】
一种珠蛋白肽的制备方法
本专利技术属于生物工程和农业领域，具体地，本专利技术涉及一种珠蛋白肽的制备方法。
技术介绍
现代动物营养理论正由传统的蛋白质、氨基酸营养理论向小肽营养理论过渡，小肽营养成为继蛋白质营养后的又一热点。近年来国内外的研究表明，机体对蛋白质利用并不局限于游离氨基酸的形式，还有相当一部分是以2-3个氨基酸组成的二肽与三肽形式吸收。随着研究的不断深入，具有多种功能的小肽已经被发现，如免疫肽、抗菌肽、抗氧化肽、激素肽等，小肽营养越来越受到人们的关注。当前，肽类饲料添加剂已越来越受到国内外饲料行业的重视，它具有提高机体免疫力、减少抗生素在饲料中的应用、提高饲料转化率和畜禽健康状况、促进动物的正常发育和生长、提高动物的繁殖力和生产性能等多种作用。我国畜禽产量居世界前列，畜禽血液供应量可达387万吨。但目前猪血加工量仅约占血液总量的23％，且国内饲用畜禽血液制品市场主流产品以喷雾干燥血浆蛋白粉、喷雾干燥血球蛋白粉为主。因此，动物血深加工还有较大的开发空间。当前，从血红蛋白中分离血红素制备血红蛋白等产物的方法主要包括：溶剂脱色法、吸附剂脱色法、氧化剂脱色法、酸化氧化脱色法、酶解吸附等，但大都在工业化生产和实际应用中存在限制，如工艺繁琐、生产成本高、有机溶剂残留、蛋白回收率低等。因此，本领域迫切需要研发出一种高效便捷、可适用于规模化生产的珠蛋白肽制备方法，提高动物血的综合利用率和附加价值，减少环境污染。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种珠蛋白肽的制备方法及采用该方法获得的珠蛋白肽的用途。本专利技术的第一方面，提供一种制备珠蛋白肽的方法，包括步骤：(a)提供一血红蛋白液I；(b)对所述血红蛋白液I进行预处理，所述预处理包括在pH9-12和/或温度60-85℃下处理一段时间h，从而获得经预处理的血红蛋白液II；(c)用碱性蛋白酶对所述血红蛋白液II进行第一酶解反应，从而得到血红蛋白酶解液III；(d)将所述血红蛋白液III的pH调节至pH5.5-8.5(弱碱性、中性或弱酸性)，从而得到血红蛋白酶解液IV；(e)用中性蛋白酶对所述血红蛋白酶解液IV进行第二酶解反应，从而得到珠蛋白酶解液V；(f)从所述珠蛋白酶解液V中分离出含分子量W范围介于100-2500道尔顿的肽的溶液，即得到珠蛋白肽液VI；和(g)任选地对所述珠蛋白肽液VI进行干燥，得到经干燥的珠蛋白肽。在另一优选例中，所述的血红蛋白液I通过以下方法制备：(a0)对分离的血球进行破膜处理，从而得到含细胞膜和被释放的血球内含物的第一混合物；(a1)对所述第一混合物用孔径0.01-0.50微米的微滤膜进行微滤，从而获得去除细胞膜的滤液，即血红蛋白液I。在另一优选例中，所述的微滤膜的孔径为0.05-0.45微米，更佳地为0.10-0.40微米。在另一优选例中，在所述步骤(a)和(b)之间或步骤(a1)和(b)之间，所述方法还包括步骤：对所述的血红蛋白液I用水进行1-10倍(较佳地2-5倍)的稀释处理，从而获得经稀释的血红蛋白液I。在另一优选例中，在步骤(b)中，所述预处理包括用pH调节剂I调节血红蛋白液I的pH至pH9-12，然后升温至60-80℃，并保持一段时间h。在另一优选例中，在步骤(b)中，所述的一段时间h为0.1-6小时，较佳地为0.2-3小时，更佳地为0.5-2小时。在另一优选例中，所述步骤(b)中，用pH调节剂I调节所述血红蛋白液I的pH值，并且所述的pH调节剂I选自下组：NaOH、KOH、碳酸钠、碳酸钾、或其组合。在另一优选例中，所述步骤(b)中，预处理的pH范围为9.5-11，较佳地为9.8-11。在另一优选例中，所述步骤(b)中，预处理温度为65-80℃，较佳地70-75℃。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述酶解温度为40-95℃，较佳地为50-80℃，更佳地为65-85℃。在另一优选例中，所述步骤(c)中，酶解时间为1-30小时，较佳地为5-25小时，更佳地为10-20小时。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述血红蛋白液II中肽类物质(即蛋白酶的酶解底物)的浓度(按干重计)为2-20％，较佳地为4％-18％，更佳地为6％-10％。在另一优选例中，所述的“肽类物质”指由n个氨基酸残基构成的多肽物质，其中n为≥2的正整数，包括寡肽、多肽、蛋白质、或其组合。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述碱性蛋白酶的用量为血红蛋白液II中肽类物质总重量(干重)的0.2％-5％，较佳地为0.5-4％，更佳地为1-3％。在另一优选例中，所述步骤(d)中，用pH调节剂II调节所述血红蛋白液II的pH值，并且所述的pH调节剂II选自下组：柠檬酸、盐酸、或其组合。在另一优选例中，所述步骤(d)中，将所述血红蛋白液III的pH调至6-8，较佳地为7-7.5。在另一优选例中，所述步骤(e)中，所述酶解温度为35-65℃，较佳地为40-55℃，更佳地为45-50℃。在另一优选例中，所述步骤(e)中，酶解时间为1-30小时，较佳地为5-25小时，更佳地为10-20小时。在另一优选例中，所述步骤(e)中，所述血红蛋白液IV中肽类物质(即蛋白酶的酶解底物)的浓度(按干重计)为2-20％，较佳地为4％-18％，更佳地为6％-15％在另一优选例中，所述步骤(e)中，所述中性蛋白酶的用量为血红蛋白液IV中肽类物质总重量(干重)的0.1％-5％，较佳地为1-4％。在另一优选例中，在步骤(f)中，所述珠蛋白肽液VI中分子量W范围介于100-2500道尔顿的肽的含量≥90％(较佳地≥92％)，按100-2500道尔顿的肽占样品总蛋白百分比计。在另一优选例中，所述步骤(f)中，所述分离包括用纳滤膜进行过滤。在另一优选例中，所述的“用纳滤膜进行过滤”包括用截断值为d1的第一纳滤膜进行第一纳滤，和用截断值为d2的第二纳滤膜进行第二纳滤，其中d1为100-300道尔顿，d2为1000-3000道尔顿。在另一优选例中，所述步骤(g)中，还包括对所述珠蛋白肽液VI进行浓缩。在另一优选例中，所述浓缩的浓缩倍数为2-5倍。在另一优选例中，所述步骤(g)中，所述干燥方法选自下组：喷雾干燥、冷冻干燥、或其组合。在另一优选例中，在步骤(f)或(g)中，所述的珠蛋白肽液VI或所述干燥的珠蛋白肽中，分子量在180-1000Da的寡肽含量在80％以上，按所述珠蛋白肽液VI或所述干燥的珠蛋白肽中肽类物质的总量计。在另一优选例中，所述的血球来源选自下组：家畜、家禽、或其组合；较佳地选自下组：猪、牛、羊、鸡、鸭、和鹅。本专利技术第二方面，提供一种珠蛋白肽产品，所述珠蛋白肽产品是用本专利技术第一方面所述的方法制备的。在另一优选例中，所述珠蛋白肽中≥80wt％肽(较佳地≥85wt％，更佳地≥90wt％)的分子量为150-1000Da。在另一优选例中，所述珠蛋白肽中≤8wt％肽(较佳地≤7wt％，更佳地≤6wt％，最佳地≤5wt％)分子量在150-2000Da范围之外。在另一优选例中，所述珠蛋白肽中≤15wt％肽(较佳地≤14wt％，更佳地≤13wt％，最佳地≤10wt％)分子量在150-1000Da范围之外。在另一优选例中，所述珠蛋白肽在150-1000道尔顿(更佳地180-1000道尔顿)之间的肽含量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备珠蛋白肽的方法，包括步骤：(a)提供一血红蛋白液I；(b)对所述血红蛋白液I进行预处理，所述预处理包括在pH9‑12和/或温度60‑85℃下处理一段时间h，从而获得经预处理的血红蛋白液II；(c)用碱性蛋白酶对所述血红蛋白液II进行第一酶解反应，从而得到血红蛋白酶解液III；(d)将所述血红蛋白液III的pH调节至pH5.5‑8.5(弱碱性、中性或弱酸性)，从而得到血红蛋白酶解液IV；(e)用中性蛋白酶对所述血红蛋白酶解液IV进行第二酶解反应，从而得到珠蛋白酶解液V；(f)从所述珠蛋白酶解液V中分离出含分子量W范围介于100‑2500道尔顿的肽的溶液，即得到珠蛋白肽液VI；和(g)任选地对所述珠蛋白肽液VI进行干燥，得到经干燥的珠蛋白肽。

【技术特征摘要】
1.一种制备珠蛋白肽的方法，包括步骤：(a)提供一血红蛋白液I；(b)对所述血红蛋白液I进行预处理，所述预处理包括在pH9-12和/或温度60-85℃下处理一段时间h，从而获得经预处理的血红蛋白液II；(c)用碱性蛋白酶对所述血红蛋白液II进行第一酶解反应，从而得到血红蛋白酶解液III；(d)将所述血红蛋白液III的pH调节至pH5.5-8.5(弱碱性、中性或弱酸性)，从而得到血红蛋白酶解液IV；(e)用中性蛋白酶对所述血红蛋白酶解液IV进行第二酶解反应，从而得到珠蛋白酶解液V；(f)从所述珠蛋白酶解液V中分离出含分子量W范围介于100-2500道尔顿的肽的溶液，即得到珠蛋白肽液VI；和(g)任选地对所述珠蛋白肽液VI进行干燥，得到经干燥的珠蛋白肽。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述预处理包括用pH调节剂I调节血红蛋白液I的pH至pH9-12，然后升温至60-80℃，并保持一段时间h。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)中，所述酶解温度为40-95℃，较佳地为50-80℃，更佳地为65-85℃。4.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：成国祥，江国永，蒋兴龙，吕小东，
申请(专利权)人：上海杰隆生物制品股份有限公司，淮安杰隆生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31