抗‑CD40抗体及其使用方法技术

本发明专利技术提供了高亲和力抗‑CD40单克隆抗体及相关的组合物，其可用于治疗癌症和其他疾病的多种治疗方法中的任何一种。

Anti CD40 antibodies and methods of use

The present invention provides a high affinity anti CD40 monoclonal antibody and composition, which can be used for any of a variety of treatment methods for treatment of cancer and other diseases.

【技术实现步骤摘要】
抗-CD40抗体及其使用方法本申请是申请号为201280031910.5、申请日为2012年4月27日、专利技术名称为“抗-CD40抗体及其使用方法”的中国专利技术专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2012/035502的国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2012年4月10日的美国临时申请号61/622,435和申请日为2011年4月29日的美国临时申请号61/480,863的优先权。相关申请的交叉引用本申请要求申请日为2012年4月10日的美国临时申请号61/622,435和申请日为2011年4月29日的美国临时申请号61/480,863的优先权，其全部内容通过引用并入本申请。关于序列表的声明本申请附带的序列表以文本格式代替纸质副本，其通过引用并入说明书。包含序列表的文本文件的名称为APEX_013_02US_ST25.txt。该文本文件于2012年4月27日创建，大小为86KB，通过EFS-Web以电子形式提交。背景
本专利技术总体涉及抗-CD40抗体及其组合物和使用方法。此类抗体可用于，例如，治疗多种肿瘤疾病的方法中。相关技术的描述大部分白血病和淋巴瘤源自B细胞系细胞的恶性转化。细胞表面B细胞系限制性抗原，如CD20的表达，使其成为抗体治疗有吸引力的靶点。抗体治疗已经极大地改变了非霍奇金淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者的管理。自从利妥昔单抗批准以来，抗体单用或与化疗相结合已显著提高响应率、长期的结果、和生活质量(ChinnP,BraslawskyG,WhiteC,等。Antibodytherapyofnon-Hodgkin’sB-celllymphoma.CancerImmunolImmunother2003；52:257-280.；RastetterW,MolinaA,WhiteCA.Rituximab:Expandingroleintherapyforlymphomasandautoimmunediseases.AnnuRevMed2004；55:477-503)。然而，有相当多的患者表现出原发性或获得性利妥昔单抗耐药性，这表明目前靶向CD20的方法在临床结果方面有局限性，并需要通过开发新的针对B细胞淋巴瘤和白血病具有不同作用机制的免疫疗法来进行改进(StolzC,SchulerM.MolecularmechanismsofresistancetoRituximabandpharmacologicstrategiesforitscircumvention.Leukemiaandlymphoma.2009；50(6):873-885；BelloC,SotomayorEM.MonoclonalantibodiesforB-celllymphomas:Rituximabandbeyond.HematologyAmSocHematolEducProgram2007；233-242；DupireS,CoiffierB.TargetedtreatmentandnewagentsindiffuselargeBcelllymphoma.IntJHematol2010；Jun18(online))，如抗CD40单克隆抗体，APX005。CD40在调节免疫应答中的作用T细胞完全激活需要两个不同但协同的信号。由APC上的抗原-MHC复合物提供的第一信号，通过T细胞抗原受体传递，并负责免疫应答的特异性。第二或共刺激信号则是通过CD28与B7-1(CD80)/B7-2(CD86)，以及CD40与CD40L相互作用来传递，这是达到完全T细胞应答所必需的。在缺乏共刺激信号时，T细胞可能发生无应答性(无反应力)或抗原刺激后的细胞程序性死亡(细胞凋亡)。CD40是TNF受体(TNFR)超家族的成员，主要在B细胞和其他抗原呈递细胞(APC)，如树突状细胞和巨噬细胞上表达。CD40配体(CD40L)主要由活化的T细胞表达。CD40和CD40L的相互作用是T细胞活化的共刺激信号。静息B细胞上的CD40-CD40L相互作用能诱导增殖、免疫球蛋白类别转变、抗体分泌，并且对生发中心的发展和记忆性B细胞的存活都有影响，所有这一切都是体液免疫应答必不可少的(KehryMR.JImmunol1996；156:2345-2348)。树突状细胞上的CD40L与CD40结合诱导DC的成熟，这表现在共刺激分子，如B7家族(CD80，CD86)的表达增加，以及促炎细胞因子，如白细胞介素12的产生。这将导致显著的T细胞应答(Stout,R.D.,J.Suttles.1996.Immunol.Today17:487-492；BrendanO′Sullivan,RanjenyThomas.CriticalReviewsinImmunology2003；23:83-107；Cella,M.,D.Scheidegger,K.Palmer-Lehmann,P.Lane,A.Lanzavecchia,G.Alber.J.Exp.Med.1996；184:747-452)。CD40信号转导激活多种通路，包括NF-κB(核因子-κB)、MAPK(裂原活化蛋白激酶)和STAT3(信号转导子和转录激活子-3)(PypeS,等.JBiolChem.2000Jun16；275(24):18586-93)，其通过激活激活蛋白、c-Jun、ATF2(激活转录因子-2)和Rel转录因子(DadgostarH,等.ProcNatlAcadSciUSA.2002Feb5；99(3):1497-502)调节基因表达。TNFR受体相关因子接头(adaptor)蛋白(例如，TRAF1、TRAF2、TRAF3、TRAF5和TRAF6)与这种受体相互作用并作为信号转导的介质。根据特定的细胞类型，CD40参与作用导致特定的基因表达模式。通过CD40信号应答而激活的基因包括各种细胞因子和趋化因子(IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α，和巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP1α)。在某些细胞类型中，CD40激活可能会导致产生细胞毒性自由基(Dadgostar等，同上文)、COX-2(环氧合酶-2)，并产生NO(一氧化氮)。CD40在肿瘤中的作用CD40不仅由正常的免疫细胞表达，同时也由许多恶性细胞表达。具体而言，CD40在以下疾病中过表达：B系NHL、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、多毛细胞白血病(HCL)、霍奇金病(UckunFM,Gajl-PeczalskaK,MyersDE,等.Blood1990；76:2449–2456；O’GradyJT,StewartS,LowreyJ,等.AmJPathol1994；144:21–26)、多发性骨髓瘤(Pellat-DeceunynckC,BatailleR,RobillardN,HarousseauJL,RappMJ,Juge-MorineauN,WijdenesJ,AmiotM.Blood.1994；84(8):2597-603)，以及膀胱癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌，和恶性黑色素瘤(YoungLS,EliopoulosAG,GallagherNJ,等.Immuno本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与CD40结合的分离的抗体，或其抗原结合片段，包括(i)重链可变区，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:58所示的VHCDR1区、如SEQ ID NO:81所示的VHCDR2区、和如SEQ ID NO:104所示的VHCDR3区；以及(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:127所示的VLCDR1区、如SEQ ID NO:150所示的VLCDR2区、和如SEQ ID NO:173所示的VLCDR3区。

【技术特征摘要】
2011.04.29 US 61/480,863;2012.04.10 US 61/622,4351.一种与CD40结合的分离的抗体，或其抗原结合片段，包括(i)重链可变区，所述重链可变区包括如SEQIDNO:58所示的VHCDR1区、如SEQIDNO:81所示的VHCDR2区、和如SEQIDNO:104所示的VHCDR3区；以及(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQIDNO:127所示的VLCDR1区、如SEQIDNO:150所示的VLCDR2区、和如SEQIDNO:173所示的VLCDR3区。2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包括如SEQIDNO:11所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包括如SEQIDNO:22所示的氨基酸序列。4.一种与CD40结合的分离的抗体，或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区由如SEQIDNO:11所示的氨基酸序列组成，所述轻链可变区由如SEQIDNO:22所示的氨基酸序列组成。5.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体是人源化的。6.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体选自下组：ScFv、缺乏铰链区的单价抗体、和微抗体。7.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体是Fab或Fab’片段。8.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体是F(ab’)2片段。9.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体是完整的抗体。10.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括人IgG恒定结构域。11.根据权利要求10所述的分离的抗体，其中所述IgG恒定结构域包括IgG1CH1结构域。12.根据权利要求10所述的分离的抗体，其中所述IgG恒定结构域包括IgG1Fc区。13.根据权利要求1所述的分离的抗体，或其抗原结合片段，其与CD40结合的KD为0.96nM或更低。14.编码权利要求1所述的分离的抗体，或其抗原结合片段的分离的多核苷酸。15.一种表达载体，其包括如权利要求14所述的分离的多核苷酸。16.一种分离的宿主细胞，其包括如权利要求15所述的载体。1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张永克，余国良，朱伟民，
申请(专利权)人：埃派斯进有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US