本发明专利技术公开了针对于CD105多肽分子抗原表位的一种CD105纳米抗体，同时还公布了编码该CD105纳米抗体的基因序列以及能够表达该CD105纳米抗体的表达载体和宿主细胞，并且公开了该CD105纳米抗体的用途。通过本发明专利技术公开的CD105纳米抗体、基因序列及宿主细胞等，可以在大肠杆菌内高效表达出CD105纳米抗体，其与CD105免疫反应特异性好、亲和力高，可应用于制备CD105检测试剂或抗肿瘤药物等。
A CD105 nano antibody Nb50
The invention discloses a nano needle for CD105 antibody CD105 peptide epitope, also released gene sequence encoding the CD105 nano antibodies and capable of expressing the CD105 nano antibody expression vectors and host cells, and discloses the application of the CD105 nano antibody. The inventive CD105 nano antibody, gene sequences and host cells, can be highly expressed in Escherichia coli CD105 nano antibody, and CD105 immune response with high specificity and high affinity, which can be applied to the preparation of CD105 reagent or antitumor drugs.
【技术实现步骤摘要】
一种CD105纳米抗体Nb50
本专利技术属于生物医学或生物制药
，更具体地说，涉及一种针对于CD105多肽分子抗原表位分子的纳米抗体(Nb50)、其编码序列及用途。
技术介绍
CD105又名endoglin,为内皮细胞细胞膜表达的糖蛋白，是转化生长因子β(transformgrowthfactor,TGF-β)受体复合物的成分之一，但能独立存在于细胞表面。CD105含有633个氨基酸，相对分子质量约为68051，是一种与增殖相关的并可被缺氧诱导的蛋白，其胞膜外部分含有561个氨基酸，跨膜区域含有25个氨基酸，胞膜内部分含有47个氨基酸，构成CD105的尾部。在CD105的细胞外部分，有4个潜在的糖基化位点，分别是第63位、96位、109位和282位氨基酸残基。这些糖基化位点可以被N-糖苷酶或内糖苷酶F修饰，因此证明这些位点具备功能。CD105作为一种细胞膜糖蛋白，在增殖的内皮细胞和肿瘤组织的新生血管内皮细胞中呈过表达，而在正常成熟的血管内皮细胞中不表达或弱表达。它是抑制肿瘤血管生成、治疗肿瘤的重要靶分子，与肿瘤组织浸润、转移有关。因此，作为一种可靠的肿瘤新生血管标志物将为临床的诊断、治疗及预后的判断提供重要的参考信息。然而，目前市场上使用的CD105检测试剂主要是通过FITC荧光素标记的抗CD105单克隆抗体来实现的，这种传统方法存在抗体稳定性差、灵敏度低、生产成本高等缺点。纳米抗体技术，是生物医学科学家在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术结合纳米粒子科学的概念进行的抗体工程革命，从而研发出的最新和最小的抗体分子，最初由比利时科学家莱曼德.哈马斯在骆驼血液中发现。普通的抗体蛋白由两条重链和两条轻链组成，而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链，没有轻链，这些“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。以该“重链抗体”为基础的纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10，而且化学性质也更加灵活，稳定性好，可溶性高，表达容易且容易获得，并容易偶联其他分子。但是，现有技术中并没有针对CD105研发出适用的纳米抗体。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于，针对现有技术中缺乏针对CD105表位的纳米抗体的缺陷，提供一种CD105纳米抗体，同时提供编码该CD105纳米抗体的DNA分子以及该纳米抗体的用途等。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：本专利技术的第一方面，提供了一种CD105纳米抗体，该CD105纳米抗体为针对CD105表位的纳米抗体，包括两条如SEQIDNO：9所示氨基酸序列的VHH链。本专利技术中该CD105纳米抗体可以简称为Nb50。本专利技术第二方面，提供了一种针对CD105纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，所述框架区FR包括下组的FR的氨基酸序列：SEQIDNO：1所示的FR1，SEQIDNO：2所示的FR2，SEQIDNO：3所示的FR3，SEQIDNO：4所示的FR4；所述互补决定区CDR包括下组的CDR的氨基酸序列：SEQIDNO：5所示的CDR1，SEQIDNO：6所示的CDR2，SEQIDNO：7所示的CDR3。框架区结构相对保守，主要起着维持蛋白质结构的作用；互补决定区结构相对多样化，主要负责抗体的识别。优选地，所述针对CD105纳米抗体的VHH链，它具有SEQIDNO：9所示的氨基酸序列。本专利技术第三方面，提供了一种DNA分子，它用于编码选自下组的蛋白质：本专利技术所述的CD105纳米抗体Nb50，或者本专利技术所述的针对CD105纳米抗体的VHH链。优选地，所述的DNA分子，它具有SEQIDNO：8所示的核苷酸序列。本专利技术提供的CD105纳米抗体可通过噬菌体扩增或基因工程重组表达的方式进行大量制备。噬菌体扩增是指将展示有CD105纳米抗体Nb50的噬菌体，通过生物扩增的方式，大量繁殖生产展示有CD105纳米抗体Nb50的噬菌体粒子。基因工程重组表达的方式是指将编码CD105纳米抗体Nb50的基因，通过克隆至表达载体，以蛋白表达的形式进行纳米抗体的大量制备。本专利技术的第四方面，提供了一种表达载体，它含SEQIDNO：8所示的核苷酸序列。本专利技术的第五方面，提供了一种宿主细胞，它可以表达本专利技术的CD105纳米抗体Nb50。本专利技术的第六方面，提供了本专利技术所述的CD105纳米抗体Nb50在制备CD105检测试剂方面的用途。本专利技术的CD105纳米抗体Nb50可以替代传统的CD105抗体，制备CD105检测试剂，用于检测CD105多肽分子。本专利技术还提供了CD105纳米抗体Nb50在制备抗肿瘤药物方面的用途。本专利技术也相应提供了一种CD105检测试剂或抗肿瘤药物，包括如前所述的CD105纳米抗体Nb50。本专利技术的第七方面，提供了本专利技术所述的CD105纳米抗体Nb50在非治疗目的免疫学检测中的用途。该免疫学检测的类型包括酶联免疫吸附检测、胶体金免疫层析、免疫斑点杂交等基于抗原抗体特异性反应的免疫学分析检测类型。本专利技术CD105纳米抗体Nb50在应用时，可以通过噬菌体扩增获得的展示有CD105纳米抗体Nb50的噬菌体粒子直接用于分析检测以及将CD105纳米抗体Nb50经过原核生物或真核生物表达后以蛋白的形式进行免疫学检测分析。本专利技术的第八方面，提供了本专利技术所述的CD105纳米抗体Nb50在制备结合吸附CD105试剂中的应用。例如，可以将本专利技术CD105纳米抗体制成免疫亲和柱，吸附抓取CD105，在富集后供进一步的研究等。实施本专利技术，具有以下有益效果：本专利技术首先合成CD105多肽，并使其具有免疫原性，然后将CD105分子偶联在酶标板上，展示该蛋白的正确空间结构，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫纳米抗体基因库(骆驼重链抗体噬菌体展示基因库)，从而获得了CD105特异性的纳米抗体基因，将此基因转至大肠杆菌中，从而建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株；本专利技术方法筛选得到的CD105纳米抗体具有与CD105免疫反应特性，且特异性好、亲和力高，可应用于制备CD105检测试剂或抗肿瘤药物等。附图说明下面将结合附图及实施例对本专利技术作进一步说明，附图中：图1为本专利技术CD105纳米抗体的氨基酸编号和结构示意图；图2是本专利技术CD105纳米抗体的DNA电泳图；图3是本专利技术CD105纳米抗体经镍柱树脂凝胶亲和层析纯化后的SDS-PAGE的电泳图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。本专利技术利用噬菌体展示技术，从驼源免疫的单域重链抗体库中筛选能与靶分子CD105抗原特异性结合的单域重链抗体(VHH)噬菌体克隆，而获得了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株，即CD105纳米抗体Nb50。下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。实施例1：针对于CD105的纳米抗体文库的构建：(1)首先合成CD105多肽，将1mgCD105与弗氏佐剂等体积混合，免疫一只新疆单峰驼，每周一次，共免疫7次，刺激B细胞表达抗原特异性的纳米抗体；(2)7次免疫结束后，提取100mL骆驼外周血淋巴细胞并提取总RNA；(3)合成cDNA并利用套式PCR扩增VHH；(4)利用限制性内切酶PstI及NotI酶切20本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种CD105纳米抗体，其特征在于，所述CD105纳米抗体为针对CD105表位的纳米抗体，包括两条如SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的VHH链。
【技术特征摘要】
1.一种CD105纳米抗体，其特征在于，所述CD105纳米抗体为针对CD105表位的纳米抗体，包括两条如SEQIDNO：9所示氨基酸序列的VHH链。2.一种针对CD105纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，其特征在于，所述框架区FR包括下组的FR的氨基酸序列：SEQIDNO：1所示的FR1，SEQIDNO：2所示的FR2，SEQIDNO：3所示的FR3，SEQIDNO：4所示的FR4；所述互补决定区CDR包括下组的CDR的氨基酸序列：SEQIDNO：5所示的CDR1，SEQIDNO：6所示的CDR2，SEQIDNO：7所示的CDR3。3.根据权利要求2所述的针对CD105纳米抗体的VHH链，其特征在于，它具有SEQIDNO：9所示的氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢小玲，赵永祥，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：广西,45
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