一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物，其中，该疫苗组合物包括免疫量的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原，以及药学上可接受的载体。本发明专利技术提供的疫苗组合物能有效抵抗新流行株和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的攻击，且对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原的保护效果产生了协同作用，增加了其免疫抵抗能力。

Vaccine composition for preventing porcine reproductive and respiratory syndrome, preparation method and application thereof

The invention relates to a vaccine composition, prevention of porcine reproductive and respiratory syndrome, porcine reproductive and respiratory the vaccine composition including immune quantity syndrome virus antigen syndrome virus HNjz15 antigen and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory, and a pharmaceutically acceptable carrier. Vaccine composition provided by the invention can effectively resist the new epidemic strains and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus attacks, and of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus antigen comprehensive protective effect exerted a synergistic effect to increase the immune resistance.

【技术实现步骤摘要】
一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物及其制备方法和应用
本专利技术属于兽用疫苗领域，具体涉及预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)引起的以母猪发热、流产，断奶前、后的仔猪死亡率升高，不同年龄猪呼吸障碍等为临床特征的疾病。该病最早发现于美国的北卡罗来纳州(1987年)，此后相继在加拿大(1998年)、德国(1990年)、英国(1991年)发现此病。1992年国际兽医局(OIE)将此病命名为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)。我国于1996年也报道了此病的流行，2006年更是爆发了变异的高致病性PRRSV引起的猪繁殖与呼吸综合征，给养猪业造成了巨大的经济损失。近一年来，多地区流行病学调查发现，有新的PRRSV流行，与以往的流行株相比，其基因序列发生较大改变。而现有的疫苗在临床上的预防效果不甚理想，而且，新的PRRSV流行株与高致病性PRRSV混合感染，造成临床上病情的复杂性，因此，需要研发出针对我国最新临床情况的疫苗组合物，以有效防止我国新的猪繁殖与呼吸综合征的流行。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物，所述疫苗组合物由猪繁殖与呼吸综合征病毒株制得，该猪繁殖与呼吸综合征病毒株制得的疫苗组合物可以对流行野毒株提供有效的免疫保护，显示出显著的免疫特性。本专利技术的一个方面在于提供一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原，以及药学上可接受的载体。本专利技术的一个方面在于提供一种制备所述疫苗组合物的方法，其中，所述方法包括：分别增殖培养所述猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株和猪繁殖与呼吸综合征病毒超强变异株NVDC-JXA1株，灭活，加入佐剂，搅拌均匀；其中，所述增殖培养所述猪繁殖与呼吸综合征病毒的步骤为将猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗株接种于各自的易感细胞，并培养所述接种后的易感细胞，收获细胞培养物；所述易感细胞包括传代细胞系和原代细胞，所述传代细胞系包括ST细胞系、非洲绿猴肾细胞Marc-145细胞系、牛肾细胞MDBK细胞系、牛鼻甲骨细胞BT细胞系、Vero细胞系、BHK-21细胞系、猪肾传代细胞系IBRS-2、兔肾传代细胞系RK，所述原代细胞包括鸡胚成纤维细胞、PAM细胞和猪肾细胞。本专利技术的一个方面在于提供所述的疫苗组合物在制备预防猪繁殖与呼吸综合征的药物中的应用。专利技术优点本专利技术采用目前猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株及猪繁殖与呼吸综合征病毒超强变异株，制备混合疫苗，具有良好的免疫原性，接种猪只后，能够刺激机体快速地产生免疫力，产生较高的中和抗体水平。本专利技术制备的混合疫苗能够有效地保护流行毒株及变异株引起的单感染或混合感染的现象，可以有效地保护猪群抵抗猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株引起的相关疾病，提高猪群的生产力。序列表中：序列1为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株Nsp2基因核苷酸序列；序列2为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株GP2蛋白核苷酸序列；序列3为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株GP5蛋白核苷酸序列；序列4为猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株GP5蛋白氨基酸序列。具体实施方式以下，对本专利技术的实施方式进行说明。本专利技术的一个方面在于提供一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原，以及药学上可接受的载体。猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株(PorcinereproductiveandrespiratorySyndromevirus,strainHNjz15)保藏号为：CCTCCNO.V201540，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏时间为2015年9月21日。该猪繁殖与呼吸综合征病毒株具有序列表SEQNO.1所示核苷酸序列编码的Nsp2基因，具有序列表SEQNO.2所示核苷酸序列编码的GP2蛋白，具有序列表SEQNO.3所示核苷酸序列编码的GP5蛋白，所述序列表SEQNO.3所示核苷酸序列编码序列表SEQNO.4所示的蛋白。“核苷酸序列”在本申请中是指一种DNA序列，其能够被转录得到相应的RNA序列。PRRSV是正链RNA病毒，其基因的编码序列为DNA，其能够被转录成正链RNA,该正链RNA与病毒本身的基因组中的序列相同。作为本专利技术的一种实施方式，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原包括猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物的灭活抗原、减毒抗原、亚单位抗原或合成肽抗原。“培养物”是病毒的不同代次传代培养物，本领域技术人员知晓不同代次之间其基因序列仅可能会发生微小的变异。“疫苗组合物”系指含有猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫原性的药物组合物。该药物组合物可诱发、刺激或增强猪只针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫反应。疫苗组合物包括免疫量的猪繁殖与呼吸综合征病毒株的灭活疫苗。“灭活抗原”，也称作失活抗原，指的是用作抗原以产生免疫力的灭活病毒的混悬液。灭活抗原的例子包括全病毒灭活抗原和裂解型抗原。使用已知方法可以很容易地产生灭活抗原。例如，通过用甲醛溶液处理病毒可获得全病毒灭活抗原。裂解型抗原可在用醚处理后由病毒包膜制备得到。“减毒抗原”指的是以毒力已经减弱但仍可在宿主体内或细胞上复制的病毒。本专利技术所用的术语“减毒”用于指以使病原丧失致病性、但保持免疫原性的方式对基因进行突变来人工降低病原体毒性。通常，通过UV辐射、化学处理或体外连续高阶继代培养实现减毒。人工的基因改变，例如将已知序列中的特定核苷酸缺失以使毒力减弱。“亚单位抗原”指的是利用基因工程方法将病原体的保护性抗原基因克隆到原核或真核表达系统中，使其高效表达而制成的抗原。它比全病毒抗原引起副反应的可能性小。“合成肽抗原”指的是一种仅含免疫决定簇组分的小肽,即用人工方法按天然蛋白质的氨基酸顺序合成保护性短肽,与载体连接后加佐剂所制成的抗原。本专利技术的组合物的成分或组分的量优选地是治疗有效量。所述治疗有效量是指在组合物施用的宿主中发挥它们的免疫学作用而不导致过度副作用所必需量。所用的成分和待施用的组合物的精确的量将根据因素如治疗的疾病的类型，待治疗的动物的类型和年龄，施用的方式，以及组合物中的其它成分而变化。作为本专利技术的一种实施方式，所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原为NVDC-JXA1株抗原、NVDC-JXA1-R株抗原、TJM株抗原、TJ株抗原、GD株抗原、GDr株抗原、HuN4株抗原、HuN4-F112株抗原。高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株公开于中国专利申请CN101045917A；高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1-R株公开于中国专利申请CN101307305A；高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM株和TJ株公开于中国专利申请CN101633909A；高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原，以及药学上可接受的载体。

【技术特征摘要】
1.一种用于预防猪繁殖与呼吸综合征的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫量的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原，以及药学上可接受的载体。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原包括猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物的灭活抗原、减毒抗原、亚单位抗原或合成肽抗原。3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原为NVDC-JXA1株抗原、NVDC-JXA1-R株抗原、TJM株抗原、TJ株抗原、GD株抗原、GDr株抗原、HuN4株抗原、HuN4-F112株抗原。4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原为HNjz15株或其培养物的灭活抗原，所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原为NVDC-JXA1株或其培养物的灭活抗原。5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原含量为灭活前≥106.0TCID50/ml的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物灭活抗原，所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原为灭活前≥106.0TCID50/ml的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒或其培养物的灭活抗原。6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株的抗原含量为灭活前106.0～108.0TCID50/ml的猪繁殖与呼吸综合征病毒HNjz15株或其培养物灭活抗原，所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原为灭活前106.0～108.0TC...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，燕贺，孙进忠，张许科，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41