一种胎盘间充质干细胞注射液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及干细胞技术领域，特别涉及一种胎盘间充质干细胞注射液及其制备方法和应用。该胎盘间充质干细胞注射液包括胎盘间充质干细胞、维生素C、二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清(FBS)、人血白蛋白、珠子参皂苷和溶媒。本发明专利技术制备的胎盘间充质干细胞制备干细胞注射液，取材方便，不违反伦理问题；本发明专利技术制备的注射液能有效的保存干细胞的活性，可直接复苏使用，不用清洗、离心，使用方便；本发明专利技术制备的注射液在回输后能促进间充质干细胞向肝细胞分化成熟，降低GVHD的发生率。

Placenta mesenchymal stem cell injection, preparation method and application thereof

The invention relates to the technical field of stem cells, in particular to a placenta mesenchymal stem cell injection, a preparation method and an application thereof. The placenta mesenchymal stem cell injection contains placenta mesenchymal stem cells, vitamin C, two methyl sulfoxide (DMSO), fetal bovine serum (FBS), Human Albumin, bead saponin and solvent. The preparation of placenta derived mesenchymal stem cells for preparing stem cell injection, convenient, does not violate the ethical problems; injection prepared by the invention can effectively save the stem cell activity, can be directly used without recovery, washing, centrifugation, easy to use; injection prepared by the invention can promote mesenchymal differentiation of stem cells into liver cells in mature after transfusion, reduce the incidence of GVHD.

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘间充质干细胞注射液及其制备方法和应用
本专利技术涉及干细胞
，特别涉及一种胎盘间充质干细胞注射液及其制备方法和应用。
技术介绍
我国乙型肝炎病毒(HBV)感染人数达1.2亿，慢性肝炎患者高达3000多万，其中乙型病毒性肝炎(乙肝)是导致肝硬化、原发性肝细胞癌(肝癌)的主要原因，每年因肝硬化、肝癌、肝功能衰竭等死亡的人数高达30～50万，严重威胁着人们的健康。对于终末期的肝炎、肝硬化，以及遗传性、代谢性肝病，原位肝移植是目前唯一确定有效的治疗手段，但肝移植术后伴有各种并发症，主要有感染并发症、排斥反应、胆道并发症、原发病复发及免疫抑制剂相关疾病等，严重影响着患者的生活质量及移植肝的长期存活率。据国内外研究报道，大约有30％～70％的肝移植受者在移植术后1年内发生过一次急性排斥反应，是导致移植物丢失的最重要的原因之一。移植物抗宿主反应(GVHD，graft-versus-hostdisease)是一种特异的免疫现象，是由于移植物组织中的免疫活性细胞与免疫受抑制的、组织不相融性抗原受者的组织之间的反应。肝移植术后发生GVHD很罕见，其发生率为0.1～0.2％，显著低于骨髓移植后GVHD的发生率，但病死率极高，超过75％。目前除再次肝移植外，常规治疗方法往往疗效欠佳甚至无效，再次移植肝给患者带来了较大的经济负担和精神肉体上的痛苦。间充质干细胞(MSCs)是多能干细胞，具有“横向分化”或“跨系分化”的能力，不仅支持造血干细胞的生长，还可以在不同诱导条件下，在体外分化为多种组织细胞。MSCs具有广阔的临床应用前景，是细胞替代治疗和组织工程的首选种子细胞。随着干细胞生物学研究不断的发展，MSC具有低免疫原性和很强的免疫调节作用(能逃避免疫识别、抑制免疫应答)、炎症趋化、组织修复等生物特性，国内外研究发现，输注MSC可以提高移植术后的免疫耐受力，延长移植物的存活时间，在治疗移植物抗宿主病上也得到有效应用，尤其在肾移植、骨髓移植等免疫排斥反应治疗中已取得较好效果，但在治疗肝移植术后急性排斥反应中的应用还较少。间充质干细胞具备干细胞的特性及多向分化潜能，可向炎症或损伤部位定向迁移并抗炎或修复损伤组织，还因其低免疫原性、较强的免疫调节及抗微生物作用而成为治疗肝移植术后急性排斥反应的重要研究方向。因此，提供一种新型的能够有效治疗GVHD的干细胞制剂具有重要的医学价值。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种胎盘间充质干细胞注射液及其制备方法和应用。该胎盘间充质干细胞注射液能有效的维持干细胞的活力，在回输后能促进间充质干细胞向肝细胞分化成熟，降低GVHD的发生率。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种胎盘间充质干细胞注射液，包括胎盘间充质干细胞、二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清(FBS)、维生素C、珠子参皂苷、人血白蛋白和溶媒。本专利技术采用人胎盘来源的间充质干细胞(hAMSCs)，具有与骨髓间充质干细胞(BMSCs)相似的表型，分化潜力大、增殖能力比BMSCs强，AMSCs低表达HLA-DR，从而说明AMSCs具有低免疫原性，用于同种异体、异种异体移植后，均不会发生免疫排斥反应，而且AMSCs无致瘤性，其取材方便、无道德伦理问题的限制，以上生物学特性用于肝移植术后移植物抗宿主病(GVHD)治疗有着重要的应用前景。本专利技术在制备得到大量的hAMSCs时，将其制备成注射液，其中还添加了DMSO、FBS、维生素C、珠子参皂苷、人血白蛋白和溶媒。使hAMSCs得到较好的活性保护，提供细胞所需的能量。其中，DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。FBS为细胞提供充足的养分；维生素C可维持过氧化物酶的活性，从而保存细胞的活性；珠子参皂苷能促进间充质干细胞向肝细胞分化成熟；人血白蛋白临床注射级成分，防止细胞结团，为细胞提供营养；溶媒可为勃脉力(复方电解质溶液)或葡萄糖或生理盐水，其可保持细胞的渗透压，利于细胞的保持活性。作为优选，每100mL胎盘间充质干细胞注射液中包括：胎盘间充质干细胞：(0.5～l)×108个；DMSO：0.5～lmL；FBS：4.5mL～9mL；维生素C：0.3～0.7g；珠子参皂苷：2～10g；人血白蛋白：1～5g；溶媒：补足。优选地，每100mL胎盘间充质干细胞注射液中包括：胎盘间充质干细胞：1×108个；DMSO：0.5～lmL；FBS：4.5mL～9mL；维生素C：0.3～0.7g；珠子参皂苷：2～10g；人血白蛋白：10～20mL；溶媒：补足。在本专利技术提供的一实施例中，每100mL胎盘间充质干细胞注射液中包括：胎盘间充质干细胞：1×108个；DMSO：1mL；FBS：9mL；维生素C：0.5g；珠子参皂苷：6g；人血白蛋白：3g；溶媒：补足。在本专利技术提供的另一实施例中，每100mL胎盘间充质干细胞注射液中包括：胎盘间充质干细胞：1×108个；DMSO：0.5mL；FBS：4.5mL；维生素C：0.3g；珠子参皂苷：2g；人血白蛋白：1g；溶媒：补足。在本专利技术提供的另一实施例中，每100mL胎盘间充质干细胞注射液中包括：胎盘间充质干细胞：1×108个；DMSO：0.75mL；FBS：6mL；维生素C：0.7g；珠子参皂苷：10g；人血白蛋白：5g；溶媒：补足。作为优选，溶媒为复方电解质注射液、葡萄糖注射液或生理盐水。作为优选，复方电解质注射液为勃脉力A复方电解质注射液。在本专利技术提供的实施例中，生理盐水为0.9％氯化钠注射液。在本专利技术提供的实施例中，DMSO为临床注射级。作为优选，胎盘间充质干细胞为第2～5代胎盘间充质干细胞。优选地，胎盘间充质干细胞为第3代胎盘间充质干细胞。本专利技术还提供了该胎盘间充质干细胞注射液在制备治疗移植物抗宿主反应的药物中的应用。本专利技术还提供了该胎盘间充质干细胞注射液的制备方法，包括：将胎盘间充质干细胞、DMSO、FBS、维生素C、珠子参皂苷、人血白蛋白和溶媒混匀，得到胎盘间充质干细胞注射液。在本专利技术提供的实施例中，该胎盘间充质干细胞注射液的制备方法包括：将胎盘间充质干细胞于-198℃冻存，使用时于37℃恒温水浴复苏，直接将复苏的细胞液注入混合液(维生素C、人血白蛋白、珠子参皂苷和溶媒)混匀，总体积为100mL，得到胎盘间充质干细胞注射液。本专利技术提供了一种胎盘间充质干细胞注射液及其制备方法和应用。该胎盘间充质干细胞注射液包括胎盘间充质干细胞、DMSO、FBS、维生素C、珠子参皂苷、人血白蛋白及溶媒。本专利技术具有如下有益效果之一：1、本专利技术采用胎盘间充质干细胞制备干细胞注射液，取材方便，不违反伦理问题；2、本专利技术制备的注射液能有效的保存干细胞的活性，可直接复苏使用，不用清洗、离心，使用方便；3、本专利技术制备的注射液在回输后能促进间充质干细胞向肝细胞分化成熟，降低GVHD的发生率。附图说明图1示胎盘间充质干细胞的鉴定结果；其中1-1示P3代细胞培养72h后在显微镜下放大40倍的图片；1-2示P3代细胞培养72h后在显微镜下放大100倍的图片；图2示胎盘间充质干细胞中CD105、CD90、CD73、CD45、CD34、CD19、CD11b和HLA-DR的流式鉴定结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胎盘间充质干细胞注射液，其特征在于，包括胎盘间充质干细胞、DMSO、FBS、维生素C、珠子参皂苷、人血白蛋白和溶媒。

【技术特征摘要】
1.一种胎盘间充质干细胞注射液，其特征在于，包括胎盘间充质干细胞、DMSO、FBS、维生素C、珠子参皂苷、人血白蛋白和溶媒。2.根据权利要求1所述的胎盘间充质干细胞注射液，其特征在于，每100mL胎盘间充质干细胞注射液中包括：胎盘间充质干细胞：(0.5～l)×108个；DMSO：0.5～lmL；FBS：4.5mL～9mL；维生素C：0.3～0.7g；珠子参皂苷：2～10g；人血白蛋白：10～20mL；溶媒：补足。3.根据权利要求1或2所述的胎盘间充质干细胞注射液，其特征在于，每100mL胎盘间充质干细胞注射液中包括：胎盘间充质干细胞：1×108个；DMSO：0.5～lmL；FBS：4.5mL～9mL；维生素C：0.3～0.7g；珠子参皂苷：2～10g；人血白蛋白：...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，陈海佳，王一飞，李丽娟，王小燕，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44