CD19特异性抗体和嵌合抗原受体制造技术

提供了CD19结合分子，包括抗CD19抗体，包括抗体片段(例如单链片段)，和包括所述抗体的嵌合受体，例如嵌合抗原受体(CAR)。所述抗体包括人抗体，包括与参比抗体(例如鼠抗体)竞争结合CD19的那些。在一些实施方式中，所述抗体展示与所述参比抗体相似的功能性质，例如相当的结合亲和性和/或竞争性抑制性质。还提供表达所述嵌合受体的经遗传工程改造的细胞，以及所述结合分子和细胞在过继细胞疗法的应用。

CD19 specific antibodies and chimeric antigen receptors

CD19 binding molecules are provided, including anti CD19 antibodies, including antibody fragments (e.g., single strand fragments), and chimeric receptors including the antibodies, such as chimeric antigen receptors (CAR). The antibodies include human antibodies, including those that compete with reference antibodies (e.g., murine antibodies) to bind CD19. In some embodiments, the antibodies exhibit functional properties similar to the reference antibodies, such as considerable binding affinity and / or competitive inhibitory properties. Also provided are genetically engineered cells expressing the chimeric receptor, and the use of the binding molecules and cells in adoptive cell therapy.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD19特异性抗体和嵌合抗原受体相关申请的交叉引用本申请要求2014年8月28日提交的题为“CD19特异性抗体和嵌合抗原受体”的美国临时申请号62/043、273，和2014年11月12日提交的题为“CD19特异性抗体和嵌合抗原受体”的美国临时申请号62/078、942的优先权，其内容通过引用其全文纳入本文。通过引用纳入序列表本申请与电子格式的序列表一同提交。所提供的序列表名称为735042000740seqlist.tXt，创建于2015年4月28日，其文件大小为215kb。该序列表的电子格式的信息通过引用其全文纳入本文。
本专利技术在一些方面中涉及CD19结合分子，具体地，涉及抗CD19抗体，包括抗体片段。本专利技术还涉及包含所述抗体的重组受体，包括含有所述抗体的嵌合抗原受体(CAR)。本专利技术还涉及表达所述受体和抗体的经遗传工程改造的细胞，及其在过继细胞疗法中的应用。背景CD19在正常B细胞上表达，并由各种疾病和病症(包括大多数B细胞恶性肿瘤)的细胞和组织表达。大多数B细胞恶性肿瘤患者未能通过现有疗法(包括靶向CD19和/或其它B细胞标志物的疗法)治愈。各种CD19-结合分子，包括抗CD19抗体，和含抗CD19抗体部分的嵌合抗原受体，以及表达所述嵌合受体的细胞，是可及的。需要改进的CD19-结合分子和经工程改造的CD19靶向性细胞。例如，需要具有免疫原性降低的分子和细胞，和/或，人抗体，其包括特异性地结合至CD19的抗体片段，以及表达所述人抗体的嵌合受体，以用于过继细胞疗法。提供了满足上述需求的实施方式。专利技术概述提供了CD19-结合分子，包括多肽，例如抗CD19抗体，包括抗原结合性抗体片段，例如包括scFv片段在内的单链片段，以及包含所述抗体的多肽，包括融合蛋白、受体，例如重组受体，包括嵌合受体例如含有所述抗体作为抗原识别部分的嵌合抗原受体(CAR)。在具体实施方式中，所述抗体是人抗体，例如包括scFv在内的人单链片段。提供了抗体或其抗原结合片段，包括特异性地结合至CD19的那些。在一些实施方式中，所述抗体包含具体的互补决定区(CDR)，包括重链CDR(CDR-H)和轻链CDR(CDR-L)。在一些实施方式中，所述CDR具有或包括参比抗体或其链或序列的CDR的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区。在一些实施方式中，所述抗体，例如，其VH区，包括重链互补决定区3(CDR-H3)，其包含示于SEQIDNO:20的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述VH区与示于SEQIDNO:11、12、60、61、63或62的VH区氨基酸序列具有至少是或约90％的序列相同性，例如，与其具有至少是或约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列相同性。在一些实施方式中，所述抗体或片段包括SEQIDNO:18的CDR-H1和SEQIDNO:20的CDR-H3。在一些实施方式中，所述抗体或片段还包括含有SEQIDNO:81、82、19或72的CDR-H2序列。在一些实施方式中，所述抗体具有CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3，其分别包括所述参比抗体的重链可变(VH)区中所含的CDR1、2和3序列的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述参比抗体的VH区具有SEQIDNO:11或12所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，其具有SEQIDNO:11、12、60、61、63或62所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述抗体具有，例如，还包括，CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3、其分别包含参比抗体的轻链可变(VL)区中所含的CDR1、2和3序列的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述参比抗体的VL具有SEQIDNO:13、14、15、16或17所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述参比抗体的VL具有SEQIDNO:13、14、15、16、17、71、65、64、66、70、69、67、90或91所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述参比抗体、VH或VL中的CDR指，通过任何编号方案定义的CDR，例如，本文中定义的那些。在一些实施方式中，所述参比抗体或VH或VL中的CDR指，通过本文所述的Kabat编号方案定义的CDR、通过本文所述的Chothia方案或本文所述的Contact方案定义的CDR。在一些实施方式中，所述抗体包含VH链，其包括CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3，其中CDR-H1包含氨基酸序列DYAMH(SEQIDNO:18)或与SEQIDNO:18具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列相同性的序列；CDR-H2包含SEQIDNO:81或82或19或72的氨基酸序列或与SEQIDNO:81或与SEQIDNO:82或与SEQIDNO:19或与SEQIDNO:72具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列相同性的序列；和/或CDR-H3包含SEQIDNO:20的氨基酸序列或与SEQIDNO:20具有至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列相同性的序列。在一些实施方式中，所述抗体包含：含有SEQIDNO:18的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQIDNO:81或82的氨基酸序列的CDR-H2，和含有示于SEQIDNO:20的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方式中，所述抗体具有CDR-1、其包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQIDNO:110)，其中X1是T、W、S或R；X2是G或A；X3是I、T、D或S；X4是S、R、T或Q；X5为空或是S；X6为空、是D、N或G；X7为空、是V或L；X8是X或为空；X9是X或为空；X10是X；X11是X；X12是Y、F、D或W；X13是V、A或L、且X14是S、N或A。例如，在一些实施方式中，所述抗体具有CDR-L1、该CDR-L1包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQIDNO:111)，其中X1是T、Q、S或R；X2是G或A；X3是I、T、D或S；X4是S、R、T或Q；X5为空或是S；X6是G、D、N或为空；X7为空、是V或L；X8是D、G、I、L、S或为空；X9是S、G、A、I、R或为空；X10是H、Y、F、S或N；X11是R、N、D、H或Y；X12是Y、F、D或W；X13是V、A或L；并且X14是S、N或A；和/或CDR-L2、该CDR-L2包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7(SEQIDNO:112)，其中X1是D或S；X2是F、V、N、K或A；X3是S、T、D或N；X4是K、V、N、Q或R；X5是R、V或L；X6是P、K、A或E；并且X7是S、P、A或T，和/或CDR-L3、该CDR-L3包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12(SEQIDNO:115)，其中X1是X；X2是S、Q、A或T；X3是Y、S、W、R本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗CD19抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中：所述VH区包含重链互补决定区3(CDR‑H3)，其包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列；或所述VH区包含与SEQ ID NO:11、12、60、61、63、62、167或185所示的VH区氨基酸序列至少90％的序列相同性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.28 US 62/043,273;2014.11.12 US 62/078,9421.抗CD19抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中：所述VH区包含重链互补决定区3(CDR-H3)，其包含SEQIDNO:20所示的氨基酸序列；或所述VH区包含与SEQIDNO:11、12、60、61、63、62、167或185所示的VH区氨基酸序列至少90％的序列相同性。2.如权利要求1所述的抗CD19抗体或抗原结合片段，其中，所述VH区包含与SEQIDNO:11、12、60、61、63或62所示的VH区氨基酸序列至少90％序列。3.抗体或其抗原结合片段，包含：重链互补决定区1(CDR-H1)1、CDR-H2和CDR-H3，其分别包含SEQIDNO:11、12、60、61、63、62、167或185所示的VH区氨基酸序列中所含的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的氨基酸序列；和/或轻链互补决定区1(CDR-L1)、CDR-L2和CDR-L3，其分别包含SEQIDNO:13、14、15、16、17、71、65、64、66、70、69、67、90、91或187-205所示的轻链可变(VL)区氨基酸序列中所含的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的氨基酸序列。4.如权利要求3所述的抗体或抗原结合片段，其中：所述重链包含SEQIDNO:11、12、60、61、63或62所示的VH区氨基酸序列中所含的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的氨基酸序列；和/或所述轻链包含SEQIDNO:13、14、15、16、17、71、65、64、66、70、69、67、90或91中所示的轻链可变(VL)区氨基酸序列中所含的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的氨基酸序列。5.抗体或其抗原结合片段，包含：含有SEQIDNO:18的氨基酸序列的CDR-H1、含有SEQIDNO:81或82的氨基酸序列的CDR-H2，和含有示于SEQIDNO:20的氨基酸序列的CDR-H3；和/或CDR-L1，其包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQIDNO:226)，其中X1是T、Q、S或R；X2是G、A或E；X3是I、T、A、D或S；X4是S、R、T、Q、G或I；X5为空、是S、R或T；X6是G、D、N或为空；X7为空、是V、L或I；X8是D、G、I、L、S或为空；X9是S、G、A、I、D、R或为空；X10是H、Y、F、S或N；X11是R、N、D、H、Y或T；X12是Y、F、D、W、H、T或S；X13是V、A或L；并且X14是S、N或A；CDR-L2，其包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7(SEQIDNO:227)，其中X1是D、S或G；X2是F、V、N、K或A；X3是S、T、D或N；X4是K、V、N、Q或R；X5是R、V或L；X6是P、K、A或E；并且X7是S、P、A或T，和CDR-L3，其包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12(SEQIDNO:228)，其中X1是S、G、T、A、Q、C或N；X2是S、Q、A或T；X3是Y、S、W、R；X4是A、D、R、T或Y；X5是A、S、P、G、N或D；X6是I、S、G、T、A、L、H、R或N；X7是S、P、L、Y、G；X8是P、T、S、Q、M、R、N或为空；X9是S、L、N、A、M、R或为空；X10是L、D或为空；X11是Y、W、F、V、A或L；并且X12是V、T、P或L。6.如权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中：CDR-L1包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(SEQIDNO:111)，其中X1是T、Q、S或R；X2是G或A；X3是I、T、D或S；X4是S、R、T或Q；X5为空或是S；X6是G、D、N或为空；X7为空、是V或L；X8是D、G、I、L、S或为空；X9是S、G、A、I、R或为空；X10是H、Y、F、S或N；X11是R、N、D、H或Y；X12是Y、F、D或W；X13是V、A或L；并且X14是S、N或A；CDR-L2包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7(SEQIDNO:112)，其中X1是D或S；X2是F、V、N、K或A；X3是S、T、D或N；X4是K、V、N、Q或R；X5是R、V或L；X6是P、K、A或E；并且X7是S、P、A或T，和CDR-L3包含如下氨基酸序列：X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12(SEQIDNO:114)，其中X1是S、G、T、A、Q、C或N；X2是S、Q、A或T；X3是Y、S、W、R；X4是A、D、R、T或Y；X5是A、S、P、G、N或D；X6是I、S、G、T、A、L、H、R或N；X7是S、P、L、Y、G；X8是P、T、S、Q、M、R、N或为空；X9是S、L、N、A、M或为空；X10是L或为空；X11是Y、W、F、V、A或L；并且X12是V、T或L。7.如权利要求5或权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中：所述CDR-L1包含氨基酸序列X1GX3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13S(SEQIDNO:36)，其中X1是T、S或Q，X3是T、S或D，X4是T或S，X5为空或是S，X6为空、是D或N，X7为空或是V，X8为空、是G或I，X9为空、是G或R，X10是S、Y或N，X11是D或N，X12是D或Y，X13是V或A；所述CDR-L2包含氨基酸序列X1X2X3X4RPS(SEQIDNO:37)，其中X1是D或S，X2是V、N或K，X3是S、N或D，且X4是K、Q或N；所述CDR-L3包含氨基酸序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12(SEQIDNO:38)，其中X1是C、S、A、G或N，X2是S、A或T，X3是Y、W或R，X4是A或D，X5是G、D或S，X6是R、S或N，X7是Y、L或G，X8是N或S，X9是S或为空，X10是V、A或N，X11是W或为空，并且X12是L或V。8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体或片段，其中：所述CDR-H2包含SEQIDNO:19所示的氨基酸序列(GISWNSGRIGYADSVKG)；或者所述CDR-H2包含SEQIDNO:72所示的氨基酸序列(GISWNSGSIGYADSVKG)。9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或片段，其中，所述CDR-L1包含SEQIDNO:80、77、74、73、75、79、78、76、21、25、28、31或146-152所示的氨基酸序列。10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体或片段，其中，所述CDR-L1包含SEQIDNO:80、77、74、73、75、79、78、76、21、25、28或31所示的氨基酸序列。11.如权利要求1-10中任一项所述的抗体或片段，其中，所述CDR-L2包含SEQIDNO:100、97、94、93、95、99、98、96、22、26、29、32或153-157所示的氨基酸序列。12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体或片段，其中，所述CDR-L2包含SEQIDNO:100、97、94、93、95、99、98、96、22、26或29所示的氨基酸序列。13.如权利要求1-12中任一项所述的抗体或片段，其中，所述CDR-L3包含SEQIDNO:109、106、103、101、104、108、107、105、102、23、24、27、30、33、158或159所示的氨基酸序列。14.如权利要求1-13中任一项所述的抗体或片段，其中：所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:21、22和23；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:21、22和24；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:25、26和27；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:28、29和30；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:31、32和33；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:80、100和109；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:77、97和106；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:74、94和103；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:73、93和101；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:75、95和104；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:79、99和108；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:78、98和107；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:76、96和105；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:73、93和102；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:163、164和165；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:80、100和109；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:146、97和106；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:28、153和158；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:74、94和103；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:147、154和121；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:148、94和103；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:75、95和104；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:149、155和119；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:150、22和120；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:21、22和159；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:151、26和118；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:28、156和116；或所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:152、157和117。15.如权利要求1-14中任一项所述的抗体或片段，其中：所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:21、22和23；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:21、22和24；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:25、26和27；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:28、29和30；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:31、32和33；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:80、100和109；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:77、97和106；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:74、94和103；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:73、93和101；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:75、95和104；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:79、99和108；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:78、98和107；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:76、96和105；或所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3分别包含SEQIDNO:73、93和102。16.如权利要求1-15中任一项所述的抗体或片段，其中：所述抗体或片段的VH区包含SEQIDNO:11、12、60、61、63、62、167或185的氨基酸序列；和/或所述抗体或片段的VL区包含SEQIDNO:13、14、15、16、17、71、90、91、68、65、64、66、70、6967或187-205的氨基酸序列。17.如权利要求1-16中任一项所述的抗体或片段，其中：所述抗体或片段的VH区包含SEQIDNO:11、12、60、61、63或62的氨基酸序列；和/或所述抗体或片段的VL区包含SEQIDNO:13、1...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·陈，S·沙马，C·帕兹玛尼，J·都塔西蒙斯，
申请(专利权)人：朱诺治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US