一种ASE‑HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种ASE‑HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，属于化学检测领域。旨在提供一种故除杂步骤同药典，仅使用ASE替代提取过程以缩短前处理时间，同时保证了测定的准确率的ASE‑HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，本发明专利技术采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用三氯甲烷萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；再采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。本发明专利技术用于测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷。

Method for the determination of pinoresinol glucoside in Eucommia two a ASE HPLC method

The invention discloses a method for ASE HPLC method for the determination of pinoresinol glucoside in Eucommia two, belonging to the field of chemical detection. It aims to provide a cleaning step with the Pharmacopoeia, only alternative extraction process to shorten the pretreatment time of ASE, but also ensure the determination method of Eucommia ulmoides Oliver pinoresinol glucoside two ASE HPLC method for the determination of the accuracy, the invention adopts ASE extraction method for extraction of crushed Eucommia samples, among them, ASE extraction the method includes using chloroform extraction in Soxhlet extractor, then extracted by methanol in solvent extraction instrument, collect the methanol extract; then using HPLC method to detect the methanol extract of pinoresinol glucoside in two. The present invention is used for the determination of oleoresin two glucoside in Eucommia ulmoides oliv.

【技术实现步骤摘要】
一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法
本专利技术属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。
技术介绍
《中国药典》2015年版一部制备供试品方法为：取本品约3g，剪成碎片，揉成絮状，取约2g，精密称定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷适量，加热回流6小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，再置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6小时提取液回收甲醇至适量，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。该方法萃取时间长达12小时，操作非常不便。专利申请号为“201510238784.6”的申请文件中所记载的制备供试品的方法为：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；将硅藻土和过筛后的粉末等重量比混合，装于10ml的萃取池中；在萃取池中加入正己烷静态萃取，正己烷萃取液舍弃；在萃取池中加入甲醇静态萃取，收集并采用甲醇定容至50ml，过滤，得到甲醇萃取液。也就是说，该对比文件采用正己烷使用ASE萃取除杂。但是在该方法的使用过程中，杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。
技术实现思路
针对上述不足，本专利技术旨在提供一种故除杂步骤同药典，仅使用ASE替代提取过程以缩短前处理时间，同时保证了测定的准确率的ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术所提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用三氯甲烷萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；步骤S2：装于索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6小时，三氯甲烷萃取液舍弃；步骤S3：将1g硅藻土和药渣混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤S4：用甲醇萃取，收集并采用甲醇定容至10ml，过滤，得到甲醇萃取液。进一步的，所述的步骤S4中，萃取参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。进一步的，所述的ASE萃取方法采用美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪进行。进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为SyncronisC18，柱温为40℃，流速为0.3mL/min，流动相为甲醇-水，检测波长为277nm。进一步的，所述的HPLC法的检测仪器为Agilent1290液相色谱仪。进一步的，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。进一步的，所述的流动相的甲醇-水的体积比为23:77。本专利技术所述的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1000。本专利技术的有益效果如下：本专利技术采用ASE萃取方法萃取，通过采用三氯甲烷和甲醇分次萃取，先通过三氯甲烷萃取避免其他组分对检测的影响，使其他杂质的出峰不影响松脂醇二葡萄糖苷的出峰，同时避免了杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。另外通过甲醇精确高效的萃取松脂醇二葡萄糖苷，使测量更加准确。附图说明图1为松脂醇二葡萄糖苷对照品图谱图；图2为快速溶剂萃取样品图谱图；图3为药典方法样品图谱图；图4为浓度-峰面积进行线性回归。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。实施例1步骤1：取杜仲样品，剪成碎片，粉碎，过三号筛，取约1g，精密称定，按重量比1：1的比例加入硅藻土后混匀，装于10ml萃取池(装样前在萃取池底部加入适量的硅藻土，装样后用硅藻土填满萃取池)。步骤2：装于索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6小时，三氯甲烷萃取液舍弃，继续用甲醇进行静态萃取，回收甲醇提取液至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得甲醇萃取液，设备为美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪；其中，甲醇进行静态萃取的参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。步骤3：将步骤2得到的甲醇萃取液采用HPLC法进行检测，检测设备为Agilent1290液相色谱仪；所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为SyncronisC18，3*100mm，3um；柱温为40℃，流速为0.3mL/min；流动相为体积比为23:77的甲醇-水；检测波长为277nm；进样量为1μl；理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1000。检测结果见图2。标准样品的检测：按照每1ml甲醇含0.6mg松脂醇二葡萄糖苷配置标准样品溶液，摇匀，即得；采用实施例1的步骤3所述的方法进行检测，检测结果见图1。按照药典的方法进行萃取并检测，检测结果见图3。按照下式计算：式中CR——对照品溶液浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；AX——供试品的峰面积；AR——对照品峰面积。结果：线性关系：取松脂醇二葡萄糖苷对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，分别精密吸取该溶液0.1μl、0.2μl、0.5μl、1μl、1.5μl进入LC测定，并依照上述步骤3所述的方法测定。以浓度-峰面积进行线性回归，详见图4。求回归方程：松脂醇二葡萄糖苷y＝1653.0034x+31.5609，R2＝1,松脂醇二葡萄糖苷在0.0611～0.9165μg内呈良好的线性关系，结果见表1：表1重复性试验：取相同批号的样品(批号：1511099)0.25g，共4份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μl，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中松脂醇二葡萄糖苷的含量见表2，RSD为2.4％，试验表明ASE提取方法重复性良好。表2精密度试验：取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液(0.6mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为1.2％，表明仪器精密度良好。样品不同仪器提取结果详见表3，ASE与药典提取结果比较见表4：表3表4ASE提取溶剂的选择：《中国药典》采用三氯甲烷索式回流6小时除杂，耗材长，且三氯甲烷的毒性大，本实验曾采用正己烷使用ASE萃取除杂，因杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，造成压力故障，故除杂步骤同药典，仅使用ASE替代提取过程以缩短前处理时间。本实验提取溶剂参照《中国药典》采用甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间8min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果见表5，循环3次基本能提取完全。表5循环次数含量％10.15320.00730.001以上所述的仅为本专利技术的较佳实施例，凡在本专利技术的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ASE‑HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用三氯甲烷萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。

【技术特征摘要】
1.一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用三氯甲烷萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；步骤2：采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。2.根据权利要求1所述的一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，其特征在于，所述的步骤1包括下述子步骤：步骤S1：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；步骤S2：装于索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6小时，三氯甲烷萃取液舍弃；步骤S3：将1g硅藻土和药渣混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；步骤S4：用甲醇萃取，收集并采用甲醇定容至10ml，过滤，得到甲醇萃取液。3.根据权利要求2所述的一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡糖糖苷的方法，其特征在于，所述的步骤S4中，萃取参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖强，韦日伟，陈学松，
申请(专利权)人：广西壮族自治区梧州食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：广西,45