长牡蛎原代细胞的培养方法技术

本发明专利技术涉及一种长牡蛎原代细胞的培养方法，包括如下步骤：（1）剪取牡蛎鳃组织，于含抗生素的灭菌海水中浸泡，每半小时换一次海水，清洗5-6次；（2）剪碎组织，加入L15培养基，移入15ml离心管中1200rpm 5min，弃掉液体，清洗4-5次，直到培养基不再混浊；（3）均匀分散剪碎的组织于6孔培养板中，每孔加入2ml L15培养基，置于26℃培养箱培养，过夜游离细胞；（4）吸取6孔板中游离细胞，于15ml离心管中1200rpm 5min收集细胞，加入新鲜L15培养基重新清洗一次；（5）加入L15培养基，将细胞均匀分散至6孔板内，每孔L15培养基2ml，平均每孔10

Culture method of primary cell of Crassostrea gigas

The invention relates to a method for primary culture of oyster cells, which comprises the following steps: (1) from oyster gill tissue, immersion in sterilized seawater containing antibiotics, every half hour for a water cleaning 5-6 times; (2) shear organization, L15 medium, 15ml moved from the heart tube 1200rpm 5min, discard the liquid, cleaning 4-5 times, until no longer turbid medium; (3) evenly dispersed shredded tissue in 6 well plates, each hole to join 2ml L15 medium, placed in the temperature of 26 DEG incubatortraining, overnight free cells; (4) from 6 hole plate free cells in 15ml centrifuge tube 1200rpm 5min cells were collected, adding fresh L15 medium to clean time; (5) with L15 culture medium, the cells were evenly distributed to 6 hole plate, each hole of L15 medium 2ml, an average of 10 per hole

【技术实现步骤摘要】
长牡蛎原代细胞的培养方法
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种长牡蛎原代细胞的培养方法。
技术介绍
细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。细胞培养技术具有以下优点：能长期传代，保持活性，便于监控检测结构功能和生命活动。培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响。可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化（变异、分化），可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。研究范围和细胞来源广泛，选择性广。不同代次细胞可长期保存，既可开展同代次不同条件和方法研究，又可观察不同代次的动态变化。耗资少、经济、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。因此，海洋生物的研究也越来越多的用到细胞培养技术。
技术实现思路
基于上述研究，本专利技术旨在提供一种长牡蛎原代细胞的培养方法。一种长牡蛎原代细胞的培养方法，包括如下步骤：（1）剪取牡蛎鳃组织，于含抗生素的灭菌海水中浸泡，其中青霉素55mg/L；链霉素100mg/L；庆大霉素100mg/L，每半小时换一次海水，清洗5-6次；（2）剪碎组织，加入L15培养基，抗生素浓度同海水，移入15ml离心管中1200rpm5min，弃掉液体，清洗4-5次，直到培养基不再混浊；（3）均匀分散剪碎的组织于6孔培养板中，每孔加入2mlL15培养基，置于26℃培养箱培养，过夜游离细胞；（4）吸取6孔板中游离细胞，于15ml离心管中1200rpm5min收集细胞，加入新鲜L15培养基重新清洗一次；（5）加入L15培养基，将细胞均匀分散至6孔板内，每孔L15培养基2ml，平均每孔105-106个细胞。本专利技术的长牡蛎原代细胞培养方法，操作简单，细胞的生长状态好，完全可以满足后续试验要求。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。一种长牡蛎原代细胞的培养方法，包括如下步骤：（1）剪取牡蛎鳃组织，于含抗生素的灭菌海水中浸泡，其中青霉素55mg/L；链霉素100mg/L；庆大霉素100mg/L，每半小时换一次海水，清洗5-6次；（2）剪碎组织，加入L15培养基，抗生素浓度同海水，移入15ml离心管中1200rpm5min，弃掉液体，清洗4-5次，直到培养基不再混浊；（3）均匀分散剪碎的组织于6孔培养板中，每孔加入2mlL15培养基，置于26℃培养箱培养，过夜游离细胞；（4）吸取6孔板中游离细胞，于15ml离心管中1200rpm5min收集细胞，加入新鲜L15培养基重新清洗一次；（5）加入L15培养基，将细胞均匀分散至6孔板内，每孔L15培养基2ml，平均每孔105-106个细胞。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长牡蛎原代细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）剪取牡蛎鳃组织，于含抗生素的灭菌海水中浸泡，其中青霉素55mg/L；链霉素100mg/L；庆大霉素100mg/L，每半小时换一次海水，清洗5‑6次；（2）剪碎组织，加入L15培养基，抗生素浓度同海水，移入15ml离心管中1200rpm 5min，弃掉液体，清洗4‑5次，直到培养基不再混浊；（3）均匀分散剪碎的组织于6孔培养板中，每孔加入2ml L15培养基，置于26℃培养箱培养，过夜游离细胞；（4）吸取6孔板中游离细胞，于15ml离心管中1200rpm 5min收集细胞，加入新鲜L15培养基重新清洗一次；（5）加入L15培养基，将细胞均匀分散至6孔板内，每孔L15培养基2ml，平均每孔10

【技术特征摘要】
1.一种长牡蛎原代细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）剪取牡蛎鳃组织，于含抗生素的灭菌海水中浸泡，其中青霉素55mg/L；链霉素100mg/L；庆大霉素100mg/L，每半小时换一次海水，清洗5-6次；（2）剪碎组织，加入L15培养基，抗生素浓度同海水，移入15ml离心管中1200rpm5min，弃掉液体，清洗4-5次，直...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚方强，
申请(专利权)人：青岛清泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37