一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它有关物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种萘普替尼的高效液相色谱分析法，具体是色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(100×4.6mm，3.5μm)，以磷酸盐缓冲液‑甲醇(82∶18)为流动相A，以磷酸盐缓冲液‑甲醇(40：60)为流动相B，梯度洗脱，柱温为30℃，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm；取萘普替尼或萘普替尼制剂，加流动相A制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；取萘普替尼对照品，加流动相A制成浓度为0.005mg/ml的溶液，作为对照品溶液。分别进样，按外标法以峰面积计算，供试品溶液的色谱图中各杂质峰面积的和不得超过1.0％。本发明专利技术首次测定了萘普替尼光降解产物及其它有关物质的含量，未见相关文献报导。可快速准确的检测出萘普替尼的光降解产物及其它杂质，操作简单，重现性好，灵敏度高，可较好地控制萘普替尼产品质量，为合成和制剂工艺优化提供了保证。

Method for simultaneous determination of naphthalene degradation products and other related substances by high performance liquid chromatography gradient method

The invention discloses a method for naproxen, high performance liquid chromatography, specifically the chromatographic column is eighteen alkyl silane bonded silica gel column (100 x 4.6mm, 3.5 m), with methanol phosphate buffer (82: 18) as mobile phase A, using phosphate buffer methanol (40:60 B) as mobile phase, gradient elution, the column temperature was 30 degrees Celsius, the flow rate was 1.0ml/min, the detection wavelength was 247nm; taking naproxen erlotinib or gefitinib naproxen preparations, with mobile phase made of A concentration of 0.5mg/ml solution as the test solution; taking naproxen imatinib control products, with mobile phase A made the concentration of 0.005mg/ml solution, as the reference solution. The peak area of each impurity in the chromatogram of the sample solution shall not exceed 1%, respectively, according to the peak area calculated by the external standard method. The present invention determines the content of naphthalene degradation products and other related substances for the first time and has not been reported in related literatures. Can quickly and accurately detect naproxen for degradation products, and other impurities, simple operation, good reproducibility, high sensitivity, can better control the naproxen imatinib product quality, provide for the synthesis and preparation process were optimized to ensure.

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它有关物质的方法
本专利技术涉及萘普替尼原料及其相关制剂的分析方法，具体涉及一种用高效液相色谱梯度法进行测定的方法，属于药物分析检测领域。
技术介绍
萘普替尼是一种苯胺喹唑啉类抗癌新药，临床拟用于晚期非小细胞肺癌的治疗。其化学名称为(E)-N-[4-(3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基]-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺二甲苯磺酸盐结晶水合物，分子式为C22H23ClFN5O2·(C7H8O3S)2，其化学结构式如下：萘普替尼在合成和储藏过程中在2位双键上容易产生顺式异构体，另同时也可能存在各中间体、副产物和降解产物，采用一般的分析方法难于分离萘普替尼与它的光学异构体，本文通过调节不同的流动相组成、比例、不同的洗脱方式，不同的PH值及不同的无机盐浓度首次实现了同时测定萘普替尼光降解产物及其它相关有关物质的目的，很好地保证了萘普替尼原料的质量可控，具有现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它有关物质的方法，可用于萘普替尼制备过程及最终产品的质量控制。本专利技术的技术方案为：一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它相关有关物质的方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统：色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以磷酸盐缓冲液-甲醇(82∶18)为流动相A，以磷酸盐缓冲液-甲醇(40∶60)为流动相B，梯度洗脱，磷酸盐缓冲液的浓度为0.04～0.1mol/L，pH值为7.0～7.8，柱温为25～35℃，流速为0.9～1.1ml/min，检测波长为247nm；标准品溶液制备：分别取起始原料、中间体1、中间体2、中间体3、杂质A、光照产物(杂质B)和萘普替尼对照品加流动相A制成每1ml中约含0.0025～0.5mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至萘普替尼主峰与相邻杂质B的峰的分离度应大于1.5，理论板数和拖尾因子按萘普替尼主峰计算应不低于10000和不大于1.5；(2)制备供试品溶液和对照品溶液取萘普替尼待测样品，加流动相A制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；取萘普替尼对照品，加流动相A制成浓度为0.005mg/ml的溶液，作为对照品溶液。(3)通过高效液相色谱测定待测样品中杂质B及相关有关物质的含量以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱测定，记录色谱图至萘普替尼主峰保留时间的3～4倍。(4)计算待测样品中各杂质的含量按外标法以峰面积计算，各杂质峰面积之和不得过1.0％。其中，上述的梯度洗脱中，流动相A比例的变化范围为于0～10分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从75％变化为55％，流动相B的比例从25％变化为45％；于10～20分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持55％不变，流动相B的比例保持45％不变；于20～30分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从55％变化为0％，流动相B的比例从45％变化为100％；于30～40分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持0％不变，流动相B的比例保持100％不变，于40～45分钟，流动相A和B回到初始比例，色谱柱重新平衡。更优选地，上述磷酸盐选自磷酸二氢钠，浓度为0.05mol/L，pH值为7.5。上述色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(100×4.6mm，3.5μm)，以体积比为82∶18的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相A，以体积比为40：60的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相B，梯度洗脱，柱温为30℃，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm。更优选地，上述色谱柱为WatersXBridgeC18色谱柱。上述萘普替尼样品包括萘普替尼原料、萘普替尼中间体、萘普替尼片和萘普替尼胶囊。本专利技术通过使用高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼的光降解产物及其它有关物质，通过对色谱条件的探索，确定了可以有效分离萘普替尼及有关物质的色谱条件，本方法专属性好、分离度佳、灵敏度高、重现性好，对评价合成和制剂工艺的优劣、终产品质量控制及稳定性样品检测具有重要的意义，本专利技术首次测定了萘普替尼光降解产物及其它有关物质的含量，未见相关文献报导。本专利技术中，所述"有关物质"是指在药物制备和贮存过程中，可能生成和降解产生的杂质(包括中间体、副产物等有机杂质)。其中，萘普替尼的有关物质包括：杂质A、杂质B、中间体1、中间体2、中间体3、起始原料。本专利技术方法适用于萘普替尼中间体、萘普替尼原料及含萘普替尼的相关制剂，如固体制剂包括片剂以及胶囊等。本专利技术检测方法准确，操作简单，时间迅速，可以充分满足有关物质检查与分解产物测定的要求，较好地控制样品中的特定杂质与非特定杂质，保证产品质量，在实际质量控制工作中实用性强。附图说明图1是系统适用性典型HPLC图谱，1是杂质A，2是光照产物(杂质B)，3是萘普替尼，4是中间体2，5是中间体3，6是起始原料，7是中间体1；图2是萘普替尼原料供试品溶液的色谱图(批号：20141201)；图3是萘普替尼粗品供试品溶液的色谱图(批号：20141201)；图4是萘普替尼片剂供试品溶液的色谱图(批号：20150204)；图5是萘普替尼胶囊供试品溶液的色谱图(批号：20150301)；具体实施方式仪器：Agilent1260系列高效液相色谱仪；试剂：磷酸二氢钠(分析纯)，氢氧化钠(分析纯)，甲醇(色谱纯，Merk公司)；色谱柱：WatersXBridgeC18色谱柱(100×4.6mm，3.5μm)；标准品的化学名、结构式及来源：萘普替尼：自制，纯度：97.6％，批号：20141001；取萘普替尼原料经甲醇-水重结晶，干燥，即得；杂质A：化学名：1-[4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基]-5-羟基吡咯烷-2-酮结构式：来源：自制，纯度：98.6％，批号：20141105，取萘普替尼原料溶于甲醇-水，60℃降解2小时，经制备液相色谱收集，浓缩，冷冻干燥即得；杂质B：化学名：(Z)-N-[4-(3-氯-4-氟苯基)氨基)-7-乙氧基喹唑啉-6-基]-4-(二甲氨基)丁-2-烯酰胺结构式：来源：自制，纯度：98.2％，批号：20141117，取萘普替尼原料溶于甲醇-水，置光照(5000±500lx)条件下放置5天，取出，经制备液相色谱收集，浓缩，冷冻干燥即得；起始原料：化学名：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-氟-6-硝基-4-喹唑啉胺，批号：BM-20140410，市售；中间体1：化学名：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-乙氧基-6-硝基-4-喹唑啉胺结构式：来源：自制，纯度：95.0％，批号：20140501，参照公开号为CN103755688A、名称为《一种阿法替尼化合物的制备方法》中的方法制得；中间体2：化学名：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-乙氧基-4,6-喹唑啉二胺结构式：来源：自制，纯度：95.4％，批号：20140501，参照公开号为CN103755688A、名称为《一种阿法替本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它有关物质的方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统；色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以体积比为82∶18的磷酸盐缓冲液‑甲醇为流动相A，以体积比为40∶60的磷酸盐缓冲液‑甲醇为流动相B，梯度洗脱，磷酸盐缓冲液的浓度为0.04～0.1mol/L，pH值为7.0～7.8，柱温为25～35℃，流速为0.9～1.1ml/min，检测波长为247nm；标准品溶液制备：分别取起始原料、中间体1、中间体2、中间体3、杂质A、杂质B和萘普替尼对照品加流动相A制成每1ml中含0.0025～0.5mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至萘普替尼主峰与相邻杂质B的峰的分离度大于1.5，萘普替尼主峰的理论板数不低于10000，拖尾因子不大于1.5；(2)制备供试品溶液和对照品溶液；取萘普替尼待测样品，加流动相A制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；取萘普替尼对照品，加流动相A制成浓度为0.005mg/ml的溶液，作为对照品溶液；(3)通过高效液相色谱测定待测样品中杂质B及相关有关物质的含量；以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱测定，记录色谱图至萘普替尼主峰保留时间的3～4倍；(4)计算待测样品中各杂质的含量；按外标法以峰面积计算，各杂质峰面积之和不得超过1.0％。...

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱梯度法同时测定萘普替尼光降解产物及其它有关物质的方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，校定检测系统；色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以体积比为82∶18的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相A，以体积比为40∶60的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相B，梯度洗脱，磷酸盐缓冲液的浓度为0.04～0.1mol/L，pH值为7.0～7.8，柱温为25～35℃，流速为0.9～1.1ml/min，检测波长为247nm；标准品溶液制备：分别取起始原料、中间体1、中间体2、中间体3、杂质A、杂质B和萘普替尼对照品加流动相A制成每1ml中含0.0025～0.5mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至萘普替尼主峰与相邻杂质B的峰的分离度大于1.5，萘普替尼主峰的理论板数不低于10000，拖尾因子不大于1.5；(2)制备供试品溶液和对照品溶液；取萘普替尼待测样品，加流动相A制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；取萘普替尼对照品，加流动相A制成浓度为0.005mg/ml的溶液，作为对照品溶液；(3)通过高效液相色谱测定待测样品中杂质B及相关有关物质的含量；以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱测定，记录色谱图至萘普替尼主...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小柔，佘琴，朱丹，石涛，杨经安，金锋，唐田，
申请(专利权)人：深圳海王医药科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44