结合SPARC的scFv制造技术

本发明专利技术提供了包含结合SPARC的scFv的组合物及其用途。

Combine SPARC with scFv

The present invention provides compositions comprising scFv in combination with SPARC and uses thereof.

【技术实现步骤摘要】
结合SPARC的scFv本申请是申请号为200980153235.1、申请日为2009年12月7日、专利技术名称为“结合SPARC的scFv”的中国专利技术专利申请的分案申请。要求优先权本申请要求2008年12月5日提交的美国临时申请号61/120,228的优先权，其全部内容通过引用方式并入本文。
技术介绍
酸性的富含半胱氨酸的分泌蛋白(SecretedProtein,Acidic,RichinCysteines,SPARC)也被称作骨粘连蛋白(osteonectin)，是人体内表达的303个氨基酸的糖蛋白。SPARC的表达在发育上受到调控，SPARC主要在正常发育或响应于损伤而发生重塑的组织中表达。参见，例如Laneetal.,FASEBJ.,8,163-173(1994)。例如，在鼠、牛和人胚胎的发育中的骨和牙齿(主要是成骨细胞、成牙质细胞、软骨膜的成纤维细胞)以及分化中的软骨细胞中高水平表达SPARC蛋白。SPARC也在组织重塑、创伤修复、形态发生、细胞分化、细胞迁移和血管形成过程中的细胞-基质相互作用中发挥重要作用，其中包括这些过程与疾病状态相关的情况。例如，在肾间质纤维化中表达SPARC，并且其在宿主对肺损伤例如博来霉素诱导的肺纤维化的应答中具有重要作用。在多种癌症中，SPARC在肿瘤及其周围基质中的表达相对于正常组织中是不同的，其表达模式取决于癌症的类型。因此，没有统一的模型来解释其功能及其对癌症产生和发展的作用的各个方面。在一种模式中，有报道指出在乳腺癌(BellahceneandCastronovo,1995；Jonesetal.,2004；Lienetal.,2007；Porteretal.,1995)、黑素瘤(Leddaetal.,1997a)和成胶质细胞瘤(Rempeletal.,1998)中SPARC的表达增加。在这些癌症中，增加的SPARC的表达在肿瘤促进或进展中具有重要作用。因此，在炎症和一些癌症中SPARC的过表达使SPARC成为诊断和治疗的潜在靶标。
技术实现思路
本专利技术提供了用于将治疗或诊断剂递送至哺乳动物中的疾病位点的组合物，其包含治疗或诊断上有效量的药物组合物，所述药物组合物包含偶联于SPARC结合肽("SBP")的治疗或诊断剂以及药学上可接受的载体("本专利技术的组合物")，其中所述SBP包含SEQIDNO:1-117中的一项或多项。特别优选的实施方式包括，例如，用于将治疗剂递送至哺乳动物中的疾病位点的本专利技术组合物，其包含一种或多种SBP，其中所述治疗剂是包含功能性抗体Fc结构域的抗体片段，例如，其中所述功能性抗体Fc结构域包括SEQIDNO:118。特别优选的实施方式包括，例如，用于将治疗或诊断剂递送至哺乳动物中的疾病位点的本专利技术的组合物，例如，其中SBP包含：SEQIDNO:1-112和117中的任意一项或多项的至少10个连续氨基酸。优选地，SBP可以由SEQIDNO:1-112和117中的任意一项或多项的至少10个连续氨基酸组成。其它实施方式包括这样的组合物，例如，其中存在两种或更多种单独的SBP，其中每种单独的SBP包含SEQIDNO:1-112和117中的任意一项、优选SEQIDNO:1-5中的任意一项或多项的至少10个连续氨基酸。实施方式包括这样的组合物，例如，其中存在两种或更多种单独的SBP，其中每种单独的SBP由SEQIDNO:1-112和117中的一项或多项组成。本专利技术还提供了用于将治疗或诊断剂递送至哺乳动物中的疾病位点的组合物，其包含治疗或诊断上有效量的药物组合物，所述药物组合物包含偶联于SBP的治疗或诊断剂，药学上可接受的载体和药学上可接受的载体，还包含白蛋白结合肽("ABP")，其中所述ABP包括SEQIDNO:119或SEQIDNO:120或者SEQIDNO:119与SEQIDNO:120二者。此类组合物包括：其中所述SBP和ABP在同一多肽中，以及，所述SBP和ABP在不同的多肽中的情况。本专利技术还提供了用于将治疗或诊断剂递送至哺乳动物中的疾病位点的方法，包含治疗或诊断上有效量的药物组合物，所述药物组合物包含偶联于SPARC结合肽的治疗或诊断剂以及药学上可接受的载体("本专利技术的方法")，其中所述SBP包括SEQIDNO:1-117。优选的实施方式包括本专利技术的方法，其中所述组合物，例如，其中SBP包含：SEQIDNO:1-112和117中的任意一项或多项、更优选SEQIDNO:1-5和117中的任意一项或多项的至少10个连续氨基酸。其它优选的实施方式包括本专利技术的方法，例如，其中存在两种或更多种单独的SBP，其中每种单独的SBP由SEQIDNO:1-117中的一项或多项组成。本专利技术还提供了本专利技术的方法，其中存在两种或更多种单独的多肽，每种多肽由至少一个SBP组成，并且其中SBP包含SEQIDNO:1-112中任一项的至少10个连续氨基酸。特别优选的本专利技术的方法包括这样的组合物，例如，其中治疗剂是包含功能性抗体Fc结构域的抗体片段，例如，其中所述抗体片段包括SEQIDNO:118。根据本专利技术的此类方法包括，例如，其中治疗剂是介导下列一项或多项的抗体片段：补体激活、细胞介导的细胞毒性、诱导细胞凋亡、诱导细胞死亡和调理作用。本专利技术提供的本专利技术的方法还包括血清白蛋白结合肽("ABP")，其包括SEQIDNO:119或SEQIDNO:120或者SEQIDNO:119与SEQIDNO:120二者。根据本专利技术的方法还包括，例如，其中所述SBP和ABP在同一多肽中，以及，所述SBP和ABP在不同的多肽中的情况。然而，所述SBP也可以由SEQIDNO:1-112的任意一项或多项的至少10个连续氨基酸组成。所提供的本专利技术的组合物和方法可用于其中疾病位点是肿瘤并且哺乳动物是人类患者的情况。附图说明图1显示了将结合肽与治疗或诊断剂融合的一般概念。在该图所示的实例中，治疗剂是抗体Fc结构域。图2显示了用于反复筛选噬菌体显示文库的一般策略。图3显示了通过序列被分离的次数就与SPARC的结合筛选肽噬菌体显示文库后鉴别的序列。图4显示了通过与SPARC结合的亲和性(由OD指示)就与SPARC的结合筛选肽噬菌体显示文库后鉴别的序列。图5显示了将肽PD15或PD21克隆进入pFUSE-hIgG1-Fc2载体以产生PD15或PD21Fc融合蛋白。图6显示了通过将编码肽15和肽21的序列克隆进入pFUSE-hIgG1-Fc2载体以编码肽-Fc融合蛋白，而由此产生的DNA序列。图7显示了所表达的和在聚丙烯酰胺凝胶电泳中纯化的PD15-Fc和PD21-Fc融合蛋白。图8显示了用于定义PD15和PD21的脱靶结合的Protoarray。图9是ELISA结合测定的图，其中将SPARC与PD15和PD21的结合亲和力与SPARC和抗-SPARC抗体的结合亲和力进行了比较。图10显示了在人肿瘤的切片上进行的免疫组织学研究的显微照片，其中使用抗-SPARC抗体(R&D抗-SPARC)证明了肿瘤SPARC表达。阴性对照抗-赫赛汀抗体(仅Fc片段)和Stablin结合肽-Fc融合蛋白(stab-Fc)不使肿瘤染色。图11显示了表达SPARC的肿瘤的组织学染色，其证明：PD15和PD21与肿瘤中表达本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其中包含以至少7.8x10

【技术特征摘要】
2008.12.05 US 61/120,2281.一种组合物，其中包含以至少7.8x10-5M的KD与SPARC蛋白结合的scFv，其中所述scFv包括SEQIDNO:116所示序列。2.权利要求1的组合物，其中所述scFv偶联于治疗剂或诊断剂。3.权利要求2的组合物，其中所述治疗剂是包含功能性抗体Fc结构域的抗体片段。4.权利要求3的组合物，其中所述功能性抗体Fc结构域包含SEQIDNO:118。5.权利要求2的组合物，其中所述治疗剂选自：放射性核素，阿霉素，安沙霉素抗生素，天冬酰胺酶，博莱霉素，白消安，顺铂，卡铂，卡莫司汀，卡培他滨，苯丁酸氮芥，阿糖胞苷，环磷酰胺，喜树碱，达卡巴嗪，更生霉素，柔红霉素，右雷佐生，多西紫杉醇，多柔比星，依托泊苷，埃坡霉素类，氟尿苷，氟达拉滨，氟尿嘧啶，吉西他滨，羟基脲，去甲氧柔红霉素，异环磷酰胺，...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·德留，
申请(专利权)人：阿布拉西斯生物科学有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US